SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T1748--2006 进出口食品中寄生虫的检验方法 Inspection of parasitic in food for import and export 2006-01-26发布 2006-08-16实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T1748—2006 前言 本标准参照了美国FDA《BacteriologicalAnalyticalManualOnline》（2001）Chapter19：Parasitic Animals inFoods。 本标准附录A为规范性附录，附录B和附录C为资料性附录。 本标准由国家认证认可监仔委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国广西出入境检验检疫局。 本标准起草人：盘宝进、韦梅良、罗兆飞、汪文龙、刘军义。 本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 1 SN/T1748—2006 进出口食品中寄生虫的检验方法 1范围 本标准规定了进出口食品中主要食源性寄生虫的检验方法。 本标准适用于牛肉、猪肉、羊肉、鱼肉、贝类肉和新鲜蔬菜等食品中，主要食源性寄生虫的检验。 2 缩略语 下列缩略语适用于本标准 2.1 SDS SSodiumDodecylSulfate 十二烷基硫酸钠。 2.2 UV Ultraviolet light 紫外光。 3仪器设备和试剂 3.1 仪器设备 3.1.1天平。 3.1.2磁力搅拌器。 3.1.3 恒温培养箱（37℃±0.5℃）。 3.1.4分液漏斗：1000mL。 3.1.5 生物解剖显微镜。 3.1.6 生物倒置显微镜或普通光学显微镜， 3.1.7 18目过滤网：网孔孔径1mm。 3. 1.8 塑料盘子：长×宽×高为320mm×260mm×75mm。 3.1.9 基简：1000mL 3. 1.10 pH计或pH试纸。 3.1.11 移液管或吸管。 3.1.12 吸球。 3.1.13 匙子。 3. 1.14 食品捣碎机。 3. 1. 15 铝箔纸。 3. 1. 16 镊子。 3. 1. 17 解剖针。 3. 1. 18 刀。 3. 1. 19 透光台：有机玻璃板：长×宽：60cm×30cm，厚度：5mm7mm。 3.1.20 白光光源：20W日光灯作为光源，光照强度为15001x～18001x，光源距离上面的有机玻璃板 30cm；UV光源：波长大约为365nm。 3.1.21 紫外线防护眼罩。 3.1.22 有机玻璃夹板：大小305mm×305mm，用螺钉固定玻璃板边缘。 1 SN/T1748—2006 3.1.23标本瓶。 3. 1.24 培养皿。 3. 1.25 玻璃盘：长×宽×高：350mm×60mm×25mm。 3. 1.26 烧杯：1000mL。 3. 1.27 超声波清洗器。 3.1.28 离心机。 3.1.29 离心管：50ml。 3.2试剂 本标准所使用的试剂均为分析纯，水为蒸馏水。 3.2.10.85%氟化钠生理盐水。 3.2.2 胃蛋白毒。 3.2.3 胃蛋白酶消化液：称取15g胃蛋白醇，溶于750mL0.85%氯化钠生理盐水中。 3.2.4盐酸。 水定容至100mlL，于棕色瓶中保存备用。 3.2.6Sheathers液：称取蔗糖500g，苯酚6.5g，加水定容至320mL。 3.2.71号清洗液：称取SDS1g，移取甲醛25mL和Tween-801mL加水定容至1000mL。 3.2.82号清洗液：称取SDS10g，移取Tween-8010mL加水定容至1000mL。 3.2.93号清洗液：移取Tween-8010ml..加水定容至1000mL。 3.2.1010%的福尔马林水溶液。 3.2.1110%甘油水溶液。 3.2.12 70%乙醇。 3.2.13乙醇、冰乙酸和福尔马林混合液：移取福尔马林5mL和冰乙酸10mL加人到85mL乙醇中。 4检验方法 各检测方法的适用范围见附录A。 4.1消化法 4.1.1样品的制备 4.1.1.1牛肉、猪和（或）羊肉：随机抽取100g样品，剪成小肉块，样品结缔组织较少时，直接消化。较 多时按4.1.1.3操作。 4.1.1.2鱼肉：随机抽取250g样品，直接消化。 4.1.1.3含有较多结缔组织的样品：随机抽取100g样品，加人500mL生理盐水，用食品捣碎机间歇 捣碎10次以上，倒人1500mL烧杯中，用250mL生理盐水冲洗捣碎机上粘附的样品，并人烧杯中。 4.1.2消化、沉降和检查 4.1.2.1消化：将经4.1.1.1或4.1.1.2处理的样品放入1500mL烧杯中，加入750mL胃蛋白酶消 化液；向4.1.1.3样品的烧杯中加人15g胃蛋白酶，混匀。用盐酸调整上述消化液pH值为2。烧杯中 衡15min后，再次校准pH值为2。继续消化直至样品完全消化为止，消化时间不超过24h。 4.1.2.2沉降和检查：用18目滤网过滤4.1.2.1样品消化液，滤液移人塑料盘子中，取250mL生理 盐水冲洗滤网上的残留物，洗液并入塑料盘子滤液中。较大的寄生虫留在滤网上，肉眼检查过滤网上的 寄生虫，记录检查结果。把塑料盘子中的滤液倒人分液漏斗内，自然沉降1h后，释放大约50mL沉降 物到100mL烧杯中。如果沉降物为半透明，直接进行观察；如果样品太粘稠，用适量生理盐水稀释至 半透明后进行观察。用吸管将沉降物转移至平皿，加盖，先用肉眼，接着用生物解剖显微镜，最后用生物倒 2 SN/T1748—2006 置显微镜或普通光学显微镜检查寄生虫。检查烧杯中的全部50mL样品液，计数、初步鉴定、记录观察结 果。选择有代表性的寄生虫进行固定（参见附录B第B1章和第B.2章），作进一步鉴定（参见附录C)。 4.1.2.3按式(1)计算1kg样品中寄生虫数量。 S=1000X/W. ...(1) 式中： S-表示1kg样品中寄生虫数量，单位为个每千克（个/kg）； X一表示检测样品中寄生虫数量，单位为个（个）； W—表示检测样品的质量，单位为克（g）。 4.2烛光法 4.2.1样品制备 4.2.1.1鱼片、鱼块：单个大于200g时，随机抽取15个样品，每个切取200g左右制成1个小样，共 15个小样；单个小于200g时，从全部样品中随机选择，制成15个小样，每个约200g。称量并记录每个 小样的实际质量。厚度小于10mm时直接用于观察，大于10mm，用刀切成薄片，使薄片厚度小于 10mm后检查。 4.2.1.2碎鱼肉：如果是冷冻结成块状，取2个冰冻的块状物，解冻，沥干，制成15个样，每个样200g 左右；如果是非冰冻的，随机抽取15份200g碎鱼肉进行检测。称量并记录样品的实际质量。 4.2.2检查 4.2.2.1白光烛光法：把鱼肉放在透光台上观察，靠近鱼肉表面的寄生虫一般呈红色、棕褐色、乳白色 或白色；而深层肉的寄生虫显现阴影，选择有代表性的寄生虫进行固定（参见第B.1章、第B.2章和第 B.3章)，并进一步鉴定（参见附录C)，计算每千克鱼肉中寄生虫数量，计算见式（1)。 4.2.2.2紫外光烛光法：用UV光在暗房中观察鱼块的各个部位（紫外光观察时应带上紫外线防护眼 罩，并避免裸露皮肤的照射），寄生虫发出蓝或绿色荧光，鱼骨和结缔组织也会发出蓝色荧光，但通过其 部位和形态加以区分，用针刺时，鱼骨头是硬的。 4.3挤压烛光法 4.3.1样品制备 从半透明贝类肉待检样品中随机抽取15个小样，每个100g左右，称量并记录每个小样的实际质 量，根据样品的大小和厚度进行检查，质超过100g的单个样品不能直接挤压，先分细后再挤压。柱 形的样品（如扇贝类）沿级向切成两半后易于压扁和观察。 4.3.2样品检查 把样品夹于有机玻璃夹板内，压紧并固定板的边缘。在白光透光台上检套有机玻璃夹板内样品中 的寄生虫，在肉中的寄生虫显示出阴影。记录寄生虫的数最，用蜡笔在有机玻璃板上标记发现的位置， 打开有机玻璃板，解剖样品，进一步检查。固定有代表性的寄生虫（参见附录B第B.2章），并作进一步 鉴定（参见附录C)。计算1kg样品中寄生虫数量。计算见式（1)。 4.4机械分离沉降法 4.4.1样品制备 随机抽取250g鱼肉样品用于检测，把鱼肉切成薄片，分成两份（每份125g），分别放人食品捣碎 机，每份加入250mL35℃温水，间歇捣碎鱼肉1min～2min，倒进大口烧杯，加人大约600mL水并搅 拌，静置15min，缓慢倒去上清液，保留沉淀物及大约100mL上清液；再次加人大约600mL水并搅拌， 静置15min，缓慢弃去上清液，保留沉淀物及大约100mL上清液备用。 4.4.2样品检查 每次取大约25mL沉淀物于玻璃盘中，加水稀释至半透明（大约375mL水），首先肉眼检查，然后 在366nmUV光下观察（紫外光观察时应带上紫外线防护眼罩，并避免裸露皮肤的照射），寄生虫发出 蓝色或黄绿色荧光。重复上述操作，直至检查完全部样品为止，固定有代表性的寄生虫（参见附录B 3 SN/T1748—2006 第B.1章、第B.2章和第B.3章），并作进一步鉴定（参见附录C)，计算1kg鱼片中寄生虫含量。计算 见式(1)。 4.5浓缩集卵法 4.5.1样品制备 随机抽取5kg蔬菜样品。制样方法：球状（如卷心菜），取其外三层叶子；非球状（如生菜叶），取其 叶片；根类（如胡萝卜），直接取样；花类（如花椰菜），把其细分为50g左右，便于清洗。 4.5.2样品的处理 4.5.2.1取1000mL的1号清洗液加入烧杯中，放人约250g散开的蔬菜，超声波清洗10min，弃去 蔬菜，再次加人约250g蔬菜，重复上述操作，直至洗完1