ICS 13.310 GA A92 中华人民共和国公共安全行业标准 GA/T 933—2011 生物样品中氟乙酸根离子的气相色谱和 气相色谱-质谱联用检验方法 GC and GC-MS examination methods for monofluorocetate anion in biological samples 2011-04-06发布 2011-05-01实施 中华人民共和国公安部 发布 数码防伪 中华人民共和国公共安全 行业标准 生物样品中氟乙酸根离子的气相色谱和 气相色谱-质谱联用检验方法 GA/T933—2011 * 中国标准出版社出版发行 北京复兴门外三里河北街16号 邮政编码：100045 网址www.spc.net.cn 电话：6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷 各地新华书店经销 * 开本880×12301/16 印张0.75 5字数17千字 2011年5月第一版 2011年5月第一次印刷 * 书号：155066·2-21976定价 16.00元 如有印装差错 由本社发行中心调换 版权专有侵权必究 举报电话：（010)68533533 GA/T 933—2011 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由公安部物证鉴定中心提出， 本标准由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析标准化分技术委员会（SAC/TC179/SC1） 归口。 本标准起草单位：公安部物证鉴定中心。 本标准主要起草人：于忠山、王芳琳、何毅、郑珲、张蕾萍。 1 GA/T933—2011 生物样品中氟乙酸根离子的气相色谱和 气相色谱-质谱联用检验方法 1范围 本标准规定了生物检材中氟乙酸的气相色谱(GC)和气相色谱-质谱联用(GC-MS)检验方法。 本标准适用于生物检材（包括呕吐物、血液、尿液、胃内容及肺、肝、肾等组织脏器）中氟乙酸的定性 分析和定量分析，也适用于凝有氟乙酸钠鼠药的现场物证如剩余食物、鼠药等 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GA/T122毒物分析名词术语 3术语和定义 GA/T122界定的术语和定义适用于本文件。 4原理 4.1气相色谱/电子捕获检测器（GC/ECD)原理 氟乙酰胺类鼠药含有氟乙酰胺、氟乙酸钠（又名氟醋酸钠1080）、氟乙酸等一种或多种成分。氟乙 酸钠可在酸性条件下转化为氟乙酸，氟乙酰胺、氟乙酸钠亦可以生物体内代谢产生氟乙酸，因此在检验 此类鼠药时，主要检验氟乙酸成分。氟乙酸在强酸性的条件下，用乙酸乙酯提取，浓缩后用五氟苄基溴 (PFBBr)衍生化，用GC/ECD进行检测；根据保留时间进行定性；与平行操作的添加样品（已知浓度的 氟乙酸根离子)进行比较，根据峰高比或峰面积值比，用外标法计算检材中氟乙酸根离子的含量。衍生 化反应原理参见图A.1，按照本法获得的气相色谱图参见图A.2。 4.2气相色谱-质谱联用法（GC-MS)原理 本法根据氟乙酸衍生物的特征离子进行定性；对氟乙酸衍生物特征离子与平行操作的添加样品（已 知浓度的氟乙酸根离子)进行比较，根据峰高比或峰面积值比，用外标法计算检材中氟乙酸根离子的含 量。按照本法获得的质谱图参见图A.3和图A.4。 5试剂、材料和仪器 5.1试剂 本法试验用水为蒸馏水，所用试剂均为分析纯： a）丙酮； 1 GA/T 933—2011 b）苯； c) 已烷； d) 乙酸乙酯； e) 无水碳酸钾； f) 无水硫酸钠； g) 6mol/L盐酸; h) 10%三乙醇胺丙酮液：取1mL三乙醇胺溶于9mL丙酮液中，混旋30s备用； i) 10%PFBBr/丙酮液：取1mLPFBBr溶于9mL丙酮液中，混旋30s备用； j) 氟乙酸钠标准溶液： 1） 氟乙酸钠储备溶液：准确称取氟乙酸钠100.0mg，用5mL蒸馏水溶解后，转移到10mL 容量瓶中，添加丙酮到刻度，混匀，得10.0mg/mL的储备液，置于冰箱中冷冻保存，保存 12个月； 2） 氟乙酸钠标准使用液：将氟乙酸钠储备液用丙酮稀释10倍，得1.0mg/mL的氟乙酸钠标 准使用液，置于冰箱中冷藏保存，保存3个月。 5.2材料 5.2.1 空白检材为健康人全血或正常猪肝。 5.2.2 离心试管。 5.2.3 具塞刻度试管。 5.2.4 10μL、100μL微量注射器。 5.2.5 蒸发皿。 5.3仪器 5.3. 1 GC：配电子捕获检测器（ECD)和色谱数据处理系统。 5.3.2 GC-MS：配有电离源(EI)或负化学源(NCI)。 5.3.3 高速离心机。 5.3.4 恒温水浴锅。 5.3.5 电动振荡器。 5.3.6 微波炉。 6操作方法 6.1 定性分析 6.1.1 提取 取血液等液体检材5.0mL或固体检材铰碎5.0g装人50mL离心试管中，分别用20mL的丙酮 水（4：1)超声振荡1h或浸泡过夜。高速离心5min，分出上清液于65℃水浴锅上浓缩至2mL～ 3mL。用3mL的苯或已烷洗涤杂质，分离去掉有机相。在水液中加人6mol盐酸调pH≤2，用5mL 乙酸乙酯振荡5min提取两次，高速离心分离合并有机相，加人10%三乙醇胺丙酮溶液0.1mL，混匀 后在70℃下用氮气或空气吹干。残渣加人3mL丙酮振荡溶解。 取相应空白检材5.0g两份，一份添加5.0μg的氟乙酸钠作阳性对照，一份做阴性对照，按上述操 作进行空白对照和已知对照分析。 2 GA/T933—2011 6.1.2衍生化 在丙酮液中加入0.1g0.2g无水碳酸钾、0.5g~1.0g无水硫酸钠、10%PFBBr衍生化试剂 0.1mL，在微波炉中微波最低档衍生化2min，冷却后振荡混匀，待检。 6.1.3纯品衍生物的制备 在5mL丙酮液中加人10.0μg氟乙酸钠，按6.1.2方法直接进行衍生化。 6.1.4检测 GC/ECD条件 6.1.4.1 不同仪器和不同检材可根据实际情况进行调整，以下条件作为参考： 色谱柱：DB-1、DB-5等弹性石英毛细管柱（30mX0.32mmX0.25μm），或相当者； a) b) c) 进样口温度：280℃； d) 检测器温度：300℃； e) 载气：高纯氮气。 6.1.4.2 GC-MS条件 不同仪器和不同检材可根据实际情况进行调整，以下条件作为参考： a) 色谱柱：DB-5MS弹性石英毛细柱（30m×0.25mm×0.25μm），或相当者； b) 离子源：EI或NCI； c) 升温程序：起始温度80℃保持2min，以30℃/min升至280℃保持10min； (P 传输线温度：250℃； c) 进样口温度：280℃； f) 载气：高纯氨气； g) NCI反应气：甲烷； h) 扫描方式：SCAN。 6.1.4.3 3进样 分别吸取检材提取衍生物、空白对照衍生物和已知对照衍生物液体各1.0μL，按上述色谱条件进 行分析，每个试样进样1次。 6.1.4.4记录和计算 记录各样品中氟乙酸标准品衍生物和可疑氟乙酸衍生物的保留时间及峰面积值，按照公式（1)计算 氟乙酸的回收率。 R- .(1 ) As 式中： R添加毒物回收率； A=——空白检材中添加氟乙酸的衍生物峰面积均值； As氟乙酸标准品相同添加量的衍生物峰面积均值。 3 GA/T 933—2011 6.2 定量分析 6.2.1取样 准确称取或量取检材5.0g(5.0mL)各两份，另取相应的空白检材两份，按粗测值加入氟乙酸钠标 准使用液，混匀。 6.2.2提取 按6.1.1的方法进行操作。 6.2.3 衍生化 按6.1.2的方法进行操作。 6.2.4测定 6.2.4.1 色谱分析条件 同6.1.4.1、6.1.4.2。 6.2.4.2 进样 分别吸取检材、空白添加样品各1.0μL，按上述色谱条件进行分析，每个样品各进样2～3次。 6.2.4.3 记录与计算 记录检材及空白添加标准品中氟乙酸衍生物的峰面积值，计算检材及空白添加中氟乙酸衍生物的 峰面积平均值。按照公式（2)计算检材中氟乙酸含量。 M标XA检 W= ...(2) MXA标 式中： W 检材中氟乙酸的含量，单位为微克每毫升（μg/mL)或微克每克（μg/g）； M 检材用量，单位为克（g)或毫升（mL）； M标—— 空白添加样品中氟乙酸标准品添加量，单位为微克（ug）； 检材提取液中氟乙酸衍生物峰面积； A标一 空白添加样品中氟乙酸的衍生物峰面积平均值。 6.3 计算相对相差 记录两份平行操作的检材含量，按照公式（3)计算相对相差。 ·(3) x 式中： RD 相对相差； X1、X2 两个样品平行定量测定的含量数值； x 两个样品平行定量测定含量的平均值。