ICS 13.310 GA A 92 中华人民共和国公共安全行业标准 GA/T1073—2013 生物样品血液、尿液中乙醇、甲醇、正丙 醇、乙醛、丙酮、异丙醇和正丁醇的顶空- 气相色谱检验方法 HS-GC examination methods for ethanol , methanol ,n-propanol ,aldehyde, acetone, isopropanol and n-butanol in blood and urine 2013-06-28发布 2013-06-28实施 中华人民共和国公安部 发布 GA/T10732013 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草， 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任， 本标准由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会（SAC/TC179/SC1）提出并 归口。 本标准起草单位：司法部司法鉴定科学技术研究所。 本标准主要起草人：沈敏、刘伟、卓先义、向平、沈保华。 H GA/T1073—2013 生物样品血液、尿液中乙醇、甲醇、正丙 醇、乙醛、丙酮、异丙醇和正丁醇的顶空 气相色谱检验方法 1范围 本标准规定了生物样品血液、尿液中乙醇、甲醇、正丙醇、乙醛、丙酮、异丙醇和正丁醇的顶空-气相 色谱(HS-GC)检验方法。 本标准适用于生物样品血液、尿液中乙醇、甲醇、正丙醇、乙醛、丙酮、异丙醇和正丁醇的定性及定量 分析。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682—2008分析实验室用水规格和试验方法 GA/T122 2毒物分析名词术语 3术语和定义 GA/T122 2界定的术语和定义适用于本文件。 4原理 利用此类化合物的易挥发性，用顶空-气相色谱/氢火焰离子化检测器（HS-GC/FID)进行检测；经 与平行操作的对照品比较，以保留时间进行定性分析；以峰面积为依据，采用内标法或外标法定量测定。 5试剂、仪器及材料 5.1试剂 本标准所用试剂除另有说明外均为色谱纯，试验用水为二级水（见GB/T6682一2008规定）： a)乙醇; b）甲醇; c）正丙醇； d)乙醛； e）丙酮； f): 异丙醇； g）正丁醇; h）叔丁醇； GA/T1073—2013 i) 乙醇（甲醇、正丙醇、乙醛、丙酮、异丙醇、正丁醇）对照品标准溶液：分别精密称取对照品乙醇 （甲醇、正丙醇、乙醛、丙酮、异丙醇、正丁醇）适量，用水配成10.0mg/mL乙醇（甲醇、正丙醇、 乙醛、丙酮、异丙醇、正丁醇)对照品标准储备溶液，置冰箱中冷藏保存，保存时间为6个月。试 验中所用其他浓度的对照品标准溶液均从上述储备液用水稀释而得； 内标物叔丁醇对照品标准溶液：精密称取叔丁醇适量，用水配制成5.0mg/mL叔丁醇对照品标 准储备溶液，置冰箱中冷藏保存，保存时间为6个月。将储备液用水稀释得4.0×10-²mg/ml 叔丁醇内标工作液，置冰箱中冷藏保存，保存时间为3个月 5.2仪器和材料 仪器和材料包括： a) 气相色谱仪：配有氢火焰离子化检测器(FID)； 分析天平：感量0.1mg； b) c) 顶空自动进样器； d)* 精密移液器； e) 自动稀释仪； ，顶空小瓶； f) g) 硅橡胶垫； h）铝帽； i) 密封钳； i) 恒温水浴锅； 注射器(1mL)。 6检验 6.1定性分析 6.1.1案件样品制备 取待测血液（或尿液)100μL及叔丁醇内标工作液500μL置于顶空小瓶内，盖上硅橡胶垫。用密 封钳加封锅帽，混匀，待测。 6.1.2添加样品及空白样品 取0.01mg/mL乙醇（或甲醇、正丙醇、乙醛、丙酮、异丙醇、正丁醇)标准溶液100μL及叔丁醇内标 工作液500μL作为检测限添加样品，另取空白血液（或尿液)100μL及叔丁醇内标工作液500μL作为 空白样品。按上述操作与案件样品平行提取和分析。 6.1.3气相色谱仪参考条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整： a） 色谱柱(1)：DB-ALC1(30mX0.32mmX1.8μm）柱或等效色谱柱； 色谱柱（2）：DB-ALC2(30mX0.32mmX1.2μm）柱或等效色谱柱； 色谱柱（3）：5%Carbowax20M/Carbopack(80-120目）2mX2mm玻璃柱或等效色谱柱； b) 序升温至170℃，保持5min； c) 进样口温度：150℃； 2 GA/T1073—2013 d) 检测器温度：250℃； e) 载气：高纯氮气，纯度大于等于99.999%； f) 柱流量：4mL/min~8mL/min。 6.1.4进样 6.1.4.1顶空自动进样器进样 将样品置于顶空自动进样器样品架上，顶空自动进样器自动加热、进样。顶空自动进样器参考 条件： a) 加热箱温度：65℃； b) 定量环温度：105℃； c) 传输线温度：110℃； (P 气相循环时间：3.5min（色谱柱1、色谱柱2），8.5min（色谱柱3）； 样品瓶加热平衡时间：10.0min； f) 样品瓶加压时间：0.10min； g) 定量环充满时间：0.10min； h) 定量环平衡时间：0.05min； i) 进样时间：1.00min。 6.1.4.2 顶空手动进样 将样品置于65℃恒温水浴中加热10min，用1mL注射器吸取加热后瓶内液面上气体0.4mL， 进样。 6.1.5记录 记录各样品中叔丁醇、乙醇和可疑色谱峰的保留时间。 6.2定量分析 6.2.1样品制备 取案件血液（或尿液)100μL两份，样品制备同6.1.1。 配制系列浓度的乙醇（或甲醇、正丙醇、乙醛、丙酮、异丙醇、正丁醇)（见附录A中A.2)或单点浓度 的对照品标准溶液，取以上标准溶液100μL各两份，样品制备同6.1.1。 案件样品中乙醇的浓度应在校准曲线的线性范围内。配制单点浓度的对照品标准浴液时，案件中 乙醇(或甲醇、正丙醇、乙醛、丙酮、异丙醇、正丁醇)浓度需在该对照品溶液浓度的士30%内。 若以外标法定量，样品制备时以水代替叔丁醇内标工作液即可。 6.2.2气相色谱仪参考条件 同6.1.3。 6.2.3进样 分别取案件样品、系列浓度的标准溶液样品或单点浓度标准溶液样品，按6.1.4条件进样分析。 6.2.4记录 记录案什样品、系列浓度的标准溶液样品或单点浓度标准溶液样品中乙醇及内标物叔丁醇的峰面 3 GA/T1073-—2013 积值，然后计算含量。 6.2.5计算 6.2.5.1案件样品中乙醇含量 6.2.5.1.1内标-校准曲线法 在系列浓度的标准溶液样品中，以乙醇（或甲醇、正丙醇、乙醛、丙酮、异丙醇、正丁醇)与内标叔丁醇 的峰面积比(Y)为纵坐标、乙醇(或甲醇、正丙醇、乙醛、丙酮、异丙醇、正丁醇)质量浓度(C)为横坐标进 行线性回归，得线性方程。 根据案件样品中乙醇（或甲醇、正丙醇、乙醛、丙酮、异丙醇、正丁醇)及内标叔丁醇峰面积值，按式 (1)计算出案件样品中乙醇(或甲醇、正丙醇、乙醛、丙酮、异丙醇、正丁醇)的质量浓度。 a (1) 式中： C一一案件样品中乙醇（或甲醇、正丙醇、乙醛、丙酮、异丙醇、正丁醇)的质量浓度，单位为毫克每毫 升（mg/mL）； 一线性方程的截距； 6一一线性方程的斜率。 6.2.5.1.2内标-单点校正法 根据案件样品和标准溶液样品中乙醇（或甲醇、正丙酵、乙醛、丙酮、异丙醇、正丁醇)及内标物的峰 面积值，按式(2)计算出案件样品中乙醇(或甲醇、正丙醇、乙醛、丙酮、异丙醇、正丁醇)的质量浓度。 A'XA; ·(2) 式中： C 一案件样品中乙醇(或甲醇、正丙醇、乙醛、丙酮、异丙醇、正丁醇)的质量浓度，单位为毫克每 毫升(mg/mL）； A一一案件样品中乙醇（或甲醇、正丙醇、乙醛、丙酮、异丙醇、正丁醇)的峰面积； A'一一标准溶液样品中乙醇（或甲醇、正丙醇、乙醛、丙酮、异丙醇、正丁醇)的峰面积； A；一一案件样品中内标物的峰面积； A：-一标准溶液样品中内标物的峰面积； 标准溶液中乙醇（或甲醇、正丙醇、乙醛、丙酮、异丙醇、正丁醇）的质量浓度，单位为毫克每 毫升（mg/mL）。 6.2.5.1.3外标-校准曲线法 在系列浓度的标准溶液样品中，以乙醇（或甲醇、正丙醇、乙醛、丙酮、异丙醇、正丁醇)的峰面积(Y) 为纵坐标、乙醇或甲醇、正丙醇、乙醛、丙酮、异丙醇、正丁醇)质量浓度(C)为横坐标进行线性同归，得 线性方程。 根据案件样品中乙醇（或甲醇、正丙醇、乙醛、内酮、异丙醇、正丁醇)的峰面积值。按式(3)计算出乙 醇（或甲醇、正丙醇、乙醛、丙酮、异丙醇、正丁醇)的质量浓度。 C-Y-a .(3) 4 GA/T 1073—2013 式中： C一一案件样品中乙醇(或甲醇、正丙醇、乙醛、丙酮、异丙醇、正丁醇)的质量浓度，单位为毫克每毫 升(mg/mL); Y一一案件样品中乙醇（或甲醇、正丙醇、乙醛、丙酮、异丙醇、正丁醇)的峰面积； α线性方程的截距； b一一线性方程的斜率。 6.2.5.1.4外标-单点校正法 根据案件样品和标准溶液样品中乙醇（或甲醇、正丙醇、乙醛、丙酮、异丙醇、正丁醇)的峰面积值，按 式（4)计算出乙醇（或甲醇、正丙醇、乙醛、丙酮、异丙醇、正丁醇)的质量浓度。 ·(4) A' 式中： C—案件样品中乙醇(或甲醇、正丙醇、乙醛、丙酮、异丙醇、正丁醇)的质量浓度，单位为毫克每毫 升(mg/mL); A—案件样品中乙醇（或甲醇、正丙醇、乙醛、丙酮、异丙醇、正丁醇)的峰面积， A——标