ICS67.180.20 分类号：X69 备案号：41608-2013 中华人民共和国轻工行业标准 QB/T 4482-2013 碱性果胶酶制剂 Alkaline pectinase preparations 2013-07-22发布 2013-12-01实施 中华人民共和国工业和信息化部 发布 QB/T4482-2013 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由中国轻工业联合会提出。 本标准由全国食品工业标准化技术委员会（SAC/TC64）归口。 本标准起草单位：青岛蔚蓝生物集团有限公司、大连工业大学、中国科学院过程工程研究所、中国 生物发酵产业协会。 本标准主要起草人：杜军、李晓燕、陈亮珍、李宪臻、陈洪章、刘捷、周英俊、王岚。 QB/T4482-2013 碱性果胶酶制剂 1范围 本标准规定了碱性果胶酶制剂的术语和定义、要求、试验方法、检验规则及标志、包装、运输和 存。 本标准适用于微生物发酵法生产的工业用碱性果胶酶制剂。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T601化学试剂标准滴定溶液的制备 GB/T603化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备（GB/T603一2002，ISO6353-1：1982， NEQ) GB/T6543运输包装用单瓦楞纸箱和双瓦楞纸箱 GB6682实验室用水规格和试验方法（GB/T6682一2008，ISO3696：1987，MOD） GB/T23527蛋白酶制剂 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3. 1 碱性果胶酶alkalinepectinase 能催化分解果胶质的，在碱性范围内具有较高活性的酶。 3. 2 碱性果胶酶活力 activityofalkalinepectinase 一定时间内，裂解聚半乳糖醛酸生成不饱和聚半乳糖醛酸物质的能力。 注：1g固体酶（或1mL液体酶），于45℃、pH9.0条件下，1min裂解聚半乳糖醛酸生成相当于1umol不饱和聚半乳 糖醛酸物质，即为一个酶活力单位，以“u/g（u/mL）”表示。 4产品分类 根据产品形态不同，可分为固体剂型碱性果胶酶制剂和液体剂型碱性果胶酶制剂。 5要求 5.1感官要求 应符合表1的规定。 表1 感官要求 要求 序号 项目 固体剂型 液体剂型 1 色泽 白色至黄色 淡黄至黄褐色 2 外观 颗粒或粉状，无潮解、霉变、结块 液态，可有少量的凝聚物 3 气味 有特殊发醇酵气味，无异味 有特殊发醇气味，无异味 1 QB/T44822013 5.2理化要求 应符合表2的规定。 表2 理化要求 要 求 序号 项 固体剂型 液体剂型 1 酶活力[ug（或u/mL》］ 150 2 干燥失重/% 8.0 一 3 细度（40目标准筛通过率）/% 80 “如有特殊要求，可按供需双方合同规定的酵活力规格执行。 试验方法 6 试验方法中所用水均为去离子水或蒸馅水并符合GB/T6682的规定，所用试剂除特殊说明外为分析 纯。标准溶液 制剂的制备应符合GB/T601和GB/T603的要求。 6.1 感官 称取样品10g（或10mL)-，观察、嗅闻作出判断，做好记录。 6.2酶活力 按附录A的方法进行测定。 6.3干燥失重 按GB/T23527规定的方法进行测定。 6.4细度 按GB/T23527规定的方法进行测定。 检验规则 7. 1 批次的确定 以同一次投料生产、同一规格、同一品种的均一质量的产品为 7.2取样规则和样本量： 7.2.1取样应均匀分布在整个灌装过程中，或均匀分布于灌装后的成品中。 7.2.2取样时应采用适宜的方法保证取样具有代表性，保证取样部位和取样瓶的清洁。 7.2.3成品抽样的样本量见表3/取样的样本量可按照估计的批量参照表3执行，或由生产企业和（或） 相关方确定。批取样量不应小于200g（或200mL），不足按照比例适当加取。 表3成品抽样的样本量 批量/桶或箱 样本量/桶或袋 50% .2 '51~500 3 >500 4 注：批量是指批中所包含的单位商品数，单位为桶或箱。样本量是指样本中所包含的样本单位数，单位为桶或袋。 7.3出厂检验 7.3.1产品出厂前应经公司质检部门检验合格，并出具合格证明方可出厂。 2 QB/T4482-2013 7.3.2出厂检验项目为：感官、酶活力、干燥失重（固体）、细度（固体） 7.4判定规则 对抽取的样品按出广检验项目进行检验，如果检验结果中有任何1项指标不合格时，应重新取样进 行复检，取样数量是第一饮的两倍；复检结果中仍有指标不合格，则整批产品判定为不合格。 8标志、包装、运输、贮存 8.1标志 包装容器外标签应注明：产品名称、生产厂厂名厂址、酶活力、生产日期、批号、保质期、执行 的标准编号等。外包装应符合GB/T6543的要求。 8.2包装 产品的内包装和（或）包装容器的内涂料应采用国家批准的材料。 8.3运输 运输过程中应有遮盖物，避免雨淋日晒；不应与有毒物质混放、混运。 8.4贮存 产品应贮存于阴凉、 于燥的库房。贮存仓库应保持清洁、阴凉、干燥、通风。 QB/T4482-2013 附录A （规范性附录） 碱性果胶酶活力的测定 A.1原理 碱性果胶酶一般指聚半乳糖醛酸裂解酶（Polygalacturonatelyase，PGL)，通过反式消去作用切割α-1,4 糖苷键，在半乳糖醛酸非还原末端形成C4和Cs不饱和键，裂解聚半乳糖醛酸生成不饱和的聚半乳糖醛酸 物质，可用紫外分光光度法在235nm波长下测定聚半乳糖醛酸的不饱和度即生成量，从而计算出来碱性 果胶酶活力。 A.2试剂和溶液 本方法中所用试剂，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和符合规定的去离子水。 A.2.1pH9.0甘氨酸-氢氧化钠（含有0.44mmo1/L的CaCl2）溶液 A液：0.8mol/L甘氨酸溶液（含有0.44mmol/L的CaCl2） B液：0.8mol/L氢氧化钠溶液 将A、B两液混合，配制pH为9.0的缓冲液，用pH计进行校准，以确保pH在9.0士0.01的范围内，在室 温下放置，一周内有效。 A.2.20.03mol/L磷酸溶液 将85%的磷酸稀释至0.03mol/L后使用，在室温下放置，一周内有效。 A.2.3聚半乳糖醛酸（果胶酸）溶液 0.2g聚半乳糖醛酸，用甘氨酸-氢氧化钠溶液（A.2.1），室温搅拌30min，使聚半乳糖醛酸充分溶解 后再定容至100mL。 底物溶液在使用之前配制，若用量较少时可用50mL容量瓶配制。 A.3仪器和设备 a) 实验室常用仪器设备； 恒温水浴：（45.0土0.1）℃； c) 分光光度计：有10mm石英比色皿，在235nm下测定吸光度； 磁力搅拌器； 涡流式混合器； 酸度计：精确至小数点后2位。 A.4分析步骤 A.4.1样品制备 固态酶制剂：称取酶粉1g~2g，精确至0.0002g，先用少量的甘氨酸缓冲液溶解，并用玻璃棒捣研 （或用磁力搅拌器搅拌），直至固体全部溶解（约10min～15min），将上清液小心倾入容量瓶中，沉 渣部分再加入少量缓冲液，如此捣研34次，最后全部移入容量瓶中，用缓冲液稀释至刻度，摇匀，通 过4层纱布过滤，收集滤液供测定用。 液态酶制剂：直接用甘氨酸-氢氧化钠溶液（A.2.1）配制。 最终样品OD值在0.2～0.6之间。 样品空白的制备：取稀释好的酶液1mL，沸水浴20min灭活，冷却至室温备用。 4 QB/T4482-2013 A.4.2测定 取20mL磨沙口带塞子的试管按下面的反应顺序进行操作，每个样品3个平行样。在反应过程中，从 加入底物开始，向每支试管中加入试剂的时间间隔应一致，45℃反应15min。 反应步骤及试剂用量见表A.1。 表A.1反应步骤及试剂用量 反应步骤 样 品 样品空白 1 加0.2%聚半乳糖醛酸底物2mL 2 45℃预热5min 3 加入待反应液20μL，混合 4 45℃水反应15min 5 依次加入0.03mo1磷酸试剂3mL 6 加入待反应液20μL 7 混合 8 总体积5.02mL 9 在235nm下比色 A.4.3结果计算 在底物聚半乳糖醛酸（Sigma81325，纯度95%，分子量25000～50000）浓度0.2g/mL、温度45℃、 pH9.0的条件下，每min裂解聚半乳糖醛酸产生相当于1μmo1不饱和低聚半乳糖醛酸物质所需的酶量，为 个碱性果胶酶活性单位（u）。在分光光度计235nm波长处测定样品空白（Ao）和样品溶液（A）的吸 光值。 注：Sigma81325是商品名，给出这一信息是为了给本标准的使用者一个相对标准。如果其他产品能有相同的效果， 则可使用这些等效的产品。 样品中的碱性果胶酶活力按公式（A.1）计算。 (A - A。)×10 ° × N ×V, X : (A.1) 103×t×4600×b×Vz 式中： 碱性果胶酶活力，u/g（或u/mL）； X: A-酶反应液的吸光度值； 酶空白样的吸光度值； Ao N 稀释倍数； Vi 反应体系的总体积，单位为毫升（mL）； V2 加入稀释后酶液的体积，单位为毫升（mL）： 不饱和聚半乳糖醛酸在235nm处的摩尔吸光系数，L·molcm； 4600 酶促反应时间（在酶反应的线性范围内），单位为分钟（min）； 比色杯厚度，单位为厘米（cm）。 b A.4.4允许差 实验结果以平行测定结果的算术平均值为准。平行测定结果的绝对差值不应超过5%。 5