ICS65.020.30 CCSB43 SAASS 团 体 标 准 T/SAASS216—2025 中国荷斯坦牛活体采卵技术规程 Codeofpracticeforovumpick-upinchineseholsteincattle 2025-07-30发布 2025-07-30实施 山东农学会  发布 全国团体标准信息平台 T/SAASS216—2025 I前言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由山东奥克斯畜牧种业有限公司提出。 本文件由山东农学会归口。 本文件起草单位：山东奥克斯畜牧种业有限公司、山东省农业科学院畜牧兽医研究所。 本文件主要起草人：马庆涛、张燕、肖遥、王玲玲、李彦芹、赵秀新、李建斌、黄金明、高运东。 全国团体标准信息平台 T/SAASS216—2025 1中国荷斯坦牛活体采卵技术规程 1范围 本文件规定了中国荷斯坦牛活体采卵的技术流程、供体的选择、饲养管理、超数排卵、活体采卵条 件、活体采卵操作、卵母细胞捡出和档案记录。 本文件适用于中国荷斯坦牛活体采卵。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T3157中国荷斯坦牛 GB/T25915.1洁净室及相关受控环境第1部分：按粒子浓度划分空气洁净度等级 GB/T26938牛胚胎生产技术规程 GB/T35568中国荷斯坦牛体型鉴定技术规程 GB/T40184畜禽基因组选择育种技术规程 GB/T45202牛体外胚胎生产和移植技术规程 NY/T1335牛人工授精技术规程 NY/T1450中国荷斯坦牛生产性能测定技术规范 NY/T3445畜禽养殖场档案规范 3术语和定义 GB/T26938、GB/T35568、GB/T45202和NY/T1450界定的术语和定义适用于本文件。 4技术流程 中国荷斯坦牛活体采卵流程见图1。 图1中国荷斯坦牛活体采卵流程示意图 5供体的选择 品种应符合GB/T3157要求，三代系谱档案完整。 体况评分宜2.75分～3.25分（采用5分制评分）。 体质健康，生殖器官和繁殖机能正常，无遗传缺陷和传染性疾病。 青年牛月龄宜为12月龄～24月龄，有2次及以上正常发情周期，按照GB/T40184的规定进行个 体遗传评估，综合选择指数位于群体前10%。 成母牛宜产后60 d以上，有2次及以上正常发情周期，按照NY/T1450的规定进行生产性能测定， 生产性能位于群体前10%；按照GB/T35568的规定进行体型鉴定，体型总分不小于75。 6饲养管理 全国团体标准信息平台 T/SAASS216—2025 2供体的饲养管理应符合以下要求： a)保持适宜的饲养环境，提供洁净的饮水； b)制定合理的日粮配方，保证营养全面、均衡，可适量补充维生素A、维生素D、维生素E和微 量元素，剂量参见产品说明； c)超数排卵前1月，加强饲养管理，避免调群、运输等应激反应； d)超数排卵前1月，不应注射疫苗。 7超数排卵 发情处理 使用肌肉注射前列腺素（Prostaglandin，PG）法，在发情周期的任意一天注射PG，注射后24 h～ 96 h观察发情。未发情供体可间隔11 d～14 d第二次注射PG，注射后24 h～96 h观察发情。发情鉴定方法 按照NY/T1335的规定执行。 超数排卵方法 7.2.1开始时间 自然发情或使用PG进行发情处理的供体，发情当天记录为第0 d，第7 d使用活体采卵仪进行去优势 卵泡处理，第9 d下午开始肌肉注射促卵泡素（Follicle-StimulatingHormone,FSH）进行超数排卵。 7.2.2FSH注射方法 按照产品说明确定每头牛注射FSH的总剂量，注射时分5次注射（第1次注射时间宜为17:00～19:00）， 每次注射间隔12 h，每次注射量根据表1中百分比依次递减，注射方法见表1。 表1FSH注射方法 时间 上午 下午 第0 d 发情 第7 d 去优势卵泡（＞8 mm） — 第9 d — FSH（28%） 第10 d FSH（25%） FSH（19%） 第11 d FSH（15%） FSH（13%） 第12 d — 活体采卵 重复超数排卵 供体可重复进行超数排卵，重复超数排卵的间隔时间宜7 d以上，连续采卵次数不超过10次。 8活体采卵条件 场地 活体采卵及捡卵场地应符合以下要求： a)采卵室和捡卵室相邻并设置传递窗，两者均为独立封闭的操作空间； b)采卵室使用面积应不小于20 m2，温度保持在18℃～25℃，两侧应留有安全通道，并配备牛保 定架、赶牛通道，人员、牛只进出安全方便； c)捡卵室使用面积应不小于15 m2，温度保持在20℃～25℃，应配备通风净化设备，洁净等级应 符合GB/T25915.1中ISO8级的要求； d)提供稳定电源，配备上下水，冲洗打扫方便。 器材 活体采卵与捡卵器材按附录A执行。 时间 全国团体标准信息平台 T/SAASS216—2025 3供体牛FSH注射完成后18 h～24 h内进行采卵。 9活体采卵操作 采卵前准备 9.1.1采卵前将采卵液分装入50 mL无菌离心管中，每管10 mL～20 mL，使用烘箱预热至35℃～37.5℃。 9.1.2将活体采卵仪、负压泵以及金属浴等仪器有序摆放到采卵车上，确保正常工作。负压泵的负压 调整到100 mmHg，金属浴的温度设置为37.5℃，采卵期间温度保持恒定。 9.1.3连接负压泵、采卵管和胶塞与采卵针，操作时应在酒精灯火焰附近进行，采卵针和剪刀随时灼 烧消毒。 9.1.4活体采卵仪探头端部涂抹耦合剂后套上保护套。 9.1.5将供体赶入保定架中，保证牛只无法前后挪动和左右摆动，清理直肠宿粪。 9.1.6选用5 mL盐酸利多卡因（2%）施行荐尾椎硬膜外麻醉，麻醉后将牛尾向前固定于其身体一侧。 9.1.7清洁供体外阴，然后喷洒75%酒精消毒，再用纸巾擦净。 采卵操作 9.2.1将活体采卵仪探头端部涂抹润滑液后，轻缓插到阴道穹窿处，通过直肠隔着直肠壁将卵巢牵拉 至采卵仪探头端部。 9.2.2根据B超影像，选择清晰可见的卵泡，推进采卵针，采卵针穿过阴道壁，刺破卵泡壁的同时用 脚踏开关控制负压泵抽吸卵泡液至离心管中，两侧卵巢的所有卵泡均需穿刺。 9.2.3用采卵液冲洗采卵针和采卵管，冲洗液也一同回收到离心管中。 9.2.4采卵结束后在离心管上标记供体号、穿刺卵泡数量、采卵结束时间以及采卵人。 9.2.5每头牛采卵完成后，均需更换采卵针和采卵管，更换过程参见9.1.3。 10卵母细胞捡出 回收液过滤 记录离心管上的信息，包括供体牛号、卵泡数、采卵结束时间、采卵人，记录到达实验室时间，将 回收的液体倒入侧漏式集卵杯中进行过滤，用磷酸盐缓冲液（PhosphateBufferedSaline，PBS）冲洗 离心管内部至液体澄清，洗涤液回收到侧漏式集卵杯中。 卵母细胞捡出 用PBS冲洗侧漏式集卵杯中的液体，至液体清亮。侧漏式集卵杯中保留10 mL～20 mL液体，置于38℃ 玻璃热台上，在体视显微镜下依次寻找并捡出卵母细胞。 卵母细胞分级 捡出的卵母细胞移入培养皿的成熟培养液中，1头供体的卵母细胞应放在1个培养皿内。体视显微镜 下按形态学方法将卵母细胞分为4个级别，分级方法按照GB/T45202的规定执行。 卵母细胞的洗涤 挑选A级、B级和C级卵母细胞在成熟培养液中清洗3遍后，以成熟培养液为载体将每头牛的卵母细胞 装入细管中，做好标记。记录回收卵母细胞数、成熟开始时间。 卵母细胞的运输 捡出的卵母细胞放入胚胎运输箱运输到胚胎培养室中继续下一步操作，胚胎运输箱温度设置为38℃。 11档案记录 中国荷斯坦牛活体采卵过程中，应记录各项数据，参见附录B。档案管理按照NY/T3445的规定执行， 档案保存2年。 全国团体标准信息平台 T/SAASS216—2025 4附录A （规范性） 主要设备、器械与试剂 A.1活体采卵与捡卵主要设备 采卵车、活体采卵仪、负压泵、金属浴、体视显微镜、烘箱、胚胎运输箱、玻璃热台等。 A.2活体采卵与捡卵主要器械 采卵管及胶塞、采卵针、探头保护套、温度计、酒精喷壶、酒精灯、打火机、细嘴盐水瓶、注射器、 注射针头、水桶、纸板、剪刀、侧漏式集卵杯、移液枪、培养皿、离心管（50 mL）、乳胶手套、长臂 手套、记号笔等。 A.3活体采卵与捡卵主要试剂 肝素钠（针剂）、采卵液（见GB/T45202）、PBS、成熟培养液（见GB/T45202）、盐酸利多卡因 （2%）、生理盐水、75%酒精、无水乙醇、FSH、新洁尔灭、PG、耦合剂、润滑液等。 全国团体标准信息平台 T/SAASS216—2025 5附录B （资料性） 活体采卵与卵母细胞捡出记录表 活体采卵记录表见表B.1，卵母细胞捡出记录表见表B.2。 表B.1活体采卵记录表 日期： 天气： 环境温度： 环境湿度： 采卵负压： 序号供体 号牛只类别是否 超排保定 效果麻醉效 果卵巢状态卵泡 数采卵 人辅助 人采卵开 始时间采卵结 束时间出血程 度备注 左 右 大小 <33～55～8 >8大小 <33～55～8>8 表B.2卵母细胞捡出记录表 批次 供体分组 牛号成熟分 组采卵结束 时间卵泡 数采卵 人回收 数粘液 中回收卵母细胞质量可用 数捡卵 人捡卵结 束时间成熟开始 时间备注 A级B级C级D级 全国团