ICS 11.100 CCS C 50 团体 标准 T/JPMA 035—2025 结核分枝杆菌感染的γ -干扰素检测 酶联免疫吸附法 Detection of interferon -γ among mycobacterium tuberculosis infection Enzyme -linked immunosorbent assay 2025 - 06 - 24发布 2025 - 07 - 01实施 江苏省预防医学会 发布 全国团体标准信息平台 T/JPMA 035 —2025 I 目次 前言 ................................ ................................ ................. II 1 范围 ................................ ................................ ............... 1 2 规范性引用文件 ................................ ................................ ..... 1 3 术语和定义 ................................ ................................ ......... 1 4 检测原理 ................................ ................................ ........... 1 5 试剂与仪器 ................................ ................................ ......... 1 6 操作流程 ................................ ................................ ........... 1 7 结果判读及临床意义 ................................ ................................ . 2 8 注意事项 ................................ ................................ ........... 3 9 质量控制 ................................ ................................ ........... 3 10 生物安全 ................................ ................................ .......... 3 附录A（资料性） 外周抗凝血培养及 IGRA-ELISA检测所需试剂和材料 ........................ 4 附录B（资料性） 检测所需仪器 ................................ ......................... 5 参考文献 ................................ ................................ .............. 6 全国团体标准信息平台 T/JPMA 035 —2025 II 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本文件由江苏省疾病预防控制中心提出 。 本文件由 江苏省预防医学会归口。 本文件起草单位： 江苏省疾病预防控制中心 、 盐城市疾病预防控制中心、 扬州市疾病预防控制中心、 无锡市疾病预防控制中心。 本文件主要起草人： 刘巧、竺丽梅、邵燕、陈诚、薛浩、丁晓艳、李锦程、宋红焕、许祝平、卢鹏、 李国莉、丁慧。 全国团体标准信息平台 T/JPMA 035 —2025 1 结核分枝杆菌 感染的γ-干扰素检测 酶联免疫吸附法 1 范围 本文件规定了酶联免疫吸附试验（ enzyme -linked immunosorbent assay ，ELISA）体外检测 γ-干扰素 释放水平（ interferon －γ release assays ，IGRAs）的操作流程、结果解读、临床意义以及质量控制。 本文件适用于各级医疗卫生机构实验室对目标人群开展结核感染检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB 19489 实验室生物安全通用要求 3 术语和定义 本文件没有特别需要界定的术语和定义。 4 检测原理 机体感染结核分枝杆菌复合群后会产生结核分枝杆菌致敏的效应 T淋巴细胞，当再次受到结核分枝 杆菌特异性抗原刺激后，致敏的效应 T淋巴细胞会产生 γ-干扰素。通过采集新鲜全血和结核分枝杆菌特 异性抗原充分混合孵育，应用酶联免疫吸附试验法（ ELISA）检测 γ-干扰素浓度水平，从而判断机体是 否存在结核分枝杆菌感染。 5 试剂与仪器 5.1 试剂和材料 外周抗凝血培养及酶联免疫吸附试验所需试剂和材料参见附录 A。 5.2 仪器 检测所需仪器参见附录 B。 6 操作流程 6.1 样本采集、运输和保存 6.1.1 样本采集 应由检验人员或培训合格的专业人员采集 疑似结核分枝杆菌 感染者静脉血液 4-5mL，加入至含肝素 锂或肝素钠的抗凝血真空管中，轻轻颠倒 2次～ 3次使血液和抗凝剂混合均匀。 6.1.2 样本运输和保存 样品采集后置 专用运输盒 ，由专人尽快转运至实验室 ，从样品采集到孵育不宜 超过 16 h。 6.2 检测步骤 全国团体标准信息平台 T/JPMA 035 —2025 2 6.2.1 血液孵育 孵育前轻轻颠倒抗凝血真空管以充分混匀血液样本，再 将样本按照 1.0mL/管分装至 血液培养管 。血 液培养管一般包括三支，分别为阳性对照管、空白对照管和结核抗原管，分装后 上下颠倒充分 混匀，确 保整个血培养管内壁都被血液覆盖，随后保持直立，于 37 ℃±1 ℃ 恒温培养箱孵育 16 h～24 h。 6.2.2 血浆提取 离心血培养管， 3000 -5000r/min, ，10-15min, 使血浆和血细胞分层 。如采用商品化试剂盒 (以下简称 试剂盒 )，则按照试剂盒说明书操作。 6.2.3 γ-干扰素测定 不同的试剂盒可能存在 免疫识别和信号输出方式 的不同，因此，检测 的操作步骤可能有所不同 。具 体操作以 试剂盒说明书为准 。一般包括以下四个流程： a) 标准品配制： 用去离子水或蒸馏水复溶冻干人 γ-干扰素标准品，按照 适宜的浓度梯度，用稀 释剂配制相应浓度的 γ-干扰素标准品。 b) 免疫学反应：用微量移液器将 血浆样本、标准品 各50.0μL分别加入 ELISA板微孔，按试剂盒 说明书确定加样孔位。随后，用微量振荡器混匀后避光孵育。 c) 酶底物孵育：每个 微孔内加入酶底物溶液， 用微量振荡器混匀后 避光孵育 。 d) 检测：每个 微孔内加入终止液，轻轻震荡混匀后，利用酶标仪读取每个微孔的光密度 (OpticalDensity, OD) 值，建议用双波长 450nm/（620～650）nm检测。 7 结果判读及临床意义 7.1 一般要求 本测试仅供体外诊断使用，应结合患者的流行病学史、 临床资料 和其他诊断结果综合应用。 7.2 判读方法 利用标准品 γ-干扰素浓度及其 OD值制作标准曲线， 通过标准曲线计算每个检测样本的 γ-干扰素浓度 （IU/mL）用于结果判读。 7.3 结果判定 原则上， 当结核分枝杆菌 抗原管的 γ-干扰素含量明显高于空白对照管视为实验结果阳性；反之，阴 性。如阳性对照管反应弱且结核 分枝杆菌 抗原管呈阴性反应时， 则表示结果不确定。 具体判读的标准以 试剂盒说明书为准。 7.4 临床意义 7.4.1 阳性结果 7.4.1.1 潜伏感染：临床上无结核病症状及其他活动性结核病诊断证据，但有结核分枝杆菌暴露史， 阳性提示结核 分枝杆菌 潜伏感染。 7.4.1.2 既往感染：既往有结核感染史或有明确的结核病证据者，无论是否治疗，但目前无结核 病症 状，阳性提示机体曾经感染过结核分枝杆菌。 7.4.1.3 活动性结核病：阳性结果可作为病原学阴性的活动性结核病辅助诊断依据之一，但不能根据 阳性检测数值的高低判断是否罹患活动性结核病以及结核病病情。 7.4.1.4 非结核分枝杆菌感染： 部分非结核分枝杆菌感染 （如 M. kansasii 、M. szulgai 或 M. marinum） 也会出现