ICS 01.040.11 CCS C 62 团体 标准 T/JPMA 033—2025 鹦鹉热衣原体环介导等温扩增（ LAMP）检 测方法 Rapid Detection of Chlamydia psittaci Using Loop -Mediated Isothermal Amplification (LAMP) Method 2025 - 06 - 24发布 2025 - 07 - 01实施 江苏省预防医学会 发布 全国团体标准信息平台 T/JPMA 033 —2025 I 目次 前言 ................................ ................................ ................. II 1 范围 ................................ ................................ ............... 1 2 规范性引用文件 ................................ ................................ ..... 1 3 术语和定义 ................................ ................................ ......... 1 4 缩略语 ................................ ................................ ............. 1 5 原理 ................................ ................................ ............... 1 6 环境与设施 ................................ ................................ ......... 1 7 试剂与材料 ................................ ................................ ......... 1 8 仪器与设备 ................................ ................................ ......... 2 9 操作步骤 ................................ ................................ ........... 2 10 质量控制 ................................ ................................ .......... 3 11 生物安全 ................................ ................................ .......... 3 全国团体标准信息平台 T/JPMA 033 —2025 II 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文 件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由 常州市疾病预防控制中心 提出。 本文件由 江苏省预防医学会 归口。 本文件起草单位： 常州市疾病预防控制中心、 江苏国际旅行卫生保健中心常州分中心 、常州市先趋 医疗科技有限公司 。 本文件主要起草人： 王凤鸣、毛旭建、蒋靖怡、许健、董昕、屠博文、 唐宏兵、 李翠霞、陈巧玲、 江锦宜、李琼、姚萍、龚丽。 全国团体标准信息平台 T/JPMA 033 —2025 1 鹦鹉热衣原体环介导等温扩增（ LAMP）检测方法 1 范围 本文件规定了鹦鹉热衣原体环介导等温扩增（ LAMP）检测方法 的环境与设施、试剂与材料、仪器与 设备、操作步骤、质量控制、生物安全的要求 。 本文件适用于人体呼吸道标本（咽/鼻拭子、痰液或肺泡灌洗液 等）的鹦鹉热衣原体 病原学检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB 19489 实验室 生物安全通用要求 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 环介导等温扩增 Loop-mediated isothermal amplification （LAMP） 针对靶基因的 6个区域设计 4-6条特定引物，通过链置换活性的 Bst DNA聚合酶，在等温条件（ 65 ℃ 左右）反应数十分钟，完成对靶核酸进行特定扩增的一种核酸等温扩增技术。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 DNA：脱氧核糖核酸 (Deoxyribonucleic acid) PCR：聚合酶链式反应 (Polymerase chain reaction) qPCR：实时荧光定量 PCR（Quantitative Real -time PCR ） dNTP：脱氧核糖核苷三磷酸（ deoxy-ribonucleoside triphosphate ） LAMP：环介导等温扩增（ Loop-mediated isothermal amplification ） Bst：嗜热脂肪芽孢杆菌（ Bacillus stearothermophilus ） 5 原理 本方法基于鹦鹉热衣原体保守基因 CPSIT_0429设计内外引物和环引物，识别靶序列上的 7个独立区 域。利用 Bst DNA聚合酶启动循环链置换反应，合成互补链，形成具有多个环状结构的茎 -环状DNA混合 物。伴随着大量质子的释放，体系内的 pH值逐渐下降，使溶液颜色从粉红色变为黄色。通过观察颜色变 化判断检测结果。 6 环境与设施 灭活标本可在生物安全一级实验室 开展检测，非灭活 标本应在生物安全二级实验室内开展检测。 7 试剂与材料 全国团体标准信息平台 T/JPMA 033 —2025 2 鹦鹉热衣原体 DNA阳性质控品 ：含有鹦鹉热衣原体 CPSIT_0429基因全长序列的重组质粒 ，质粒浓 度应不低于1105 aM。 LAMP显色法预混液： 主要成分包含 Bst2.0 DNA聚合酶、dNTP、 可视化的 酚红指示剂（pH6.6-8.2） 和缓冲液， 可使用同等功效的商品化试剂。 反应管: 0.2 mL透明色PCR管。 DNA提取试剂盒。 无菌双蒸水。 引物信息见表 1，-20 ℃条件下保存。 表1 引物信息 引物名称 引物序列（5’-3’） 靶基因a 外引物1(F3) GAGTTGTAGAGTCTATTCCGA 鹦鹉热衣原体 CPSIT_0429基因 外引物2(B3) ACTACTTGCTATAGCTGTGTT 内引物1(FIP) CTCTTCAACAACTAGCGAGACTAAATGATATCTTCAAGCGTGTAAGG 内引物2(BIP) GGAATGGGTTCCATTTCGATTAAACATTGCAATTCATAAGCACCG 环引物(LB) GGAGGTTGCTTTTGCATAGAGAGTT a 鹦鹉热衣原体 CPSIT_0429靶基因序列（ ACCESSION: NC_017287 ） atgacaacttctatacctgcatcgatagaaagtaacccatcgataaaccctatagtaacttcaaacacacagactccagaatctcttaaaaagatag ataagctaacaatcctctcgattatcaccatagtggctacaacgttatgtactgctgctggtataattagtgctactgtaactggcattgctggttt gttcgcactacctgtagcggccatactacttgctatagctgtgttaattgcaattcataagc accgttgtagtaaagaactctctatgcaaaagcaa cctccgagtttaatcgaaatggaacccattccctcttcaacaactagcgagactaaagaaagtaaagaatctaaaccttacacgcttgaagatatca tcggaatagactctacaactccaagaaagatcagtcttgatgatgtcacagtatctgaatag 8 仪器与设备 超净工作台。 二级生物安全柜。 微量移液器：量程 0.5 µL～10 µL、5 µL～50 µL、20 µL～200 µL。 水浴锅或金属浴： 温度范围 40 ℃-100 ℃，控温精度± 0.5 ℃。 计时器。 全自动核酸提取仪。 微型离心机 。 高压灭菌 器。 9 操作步骤 标本的采集 、转运与保存 采集人员呼吸道 标本送检（咽 /鼻拭子、痰液或肺泡灌洗液）。采集的 标本应置入细菌采样管内， 拧紧管口。 标本转