ICS 07.100.99 CCS C 59 团体 标准 T/JPMA 032—2025 四类人源肠道耐药菌检测技术规范 Technical specification for detection of four categories of human intestinal drug - resistant bacteria 2025 - 06 - 24发布 2025 - 07 - 01实施 江苏省预防医学会 发布 全国团体标准信息平台 T/JPMA 032 —2025 I 目次 前言 ................................ ................................ ................. II 1 范围 ................................ ................................ ............... 1 2 规范性引用文件 ................................ ................................ ..... 1 3 术语和定义 ................................ ................................ ......... 1 4 设备和材料 ................................ ................................ ......... 2 5 培养基和试剂 ................................ ................................ ....... 2 6 质控菌株 ................................ ................................ ........... 2 7 检测程序 ................................ ................................ ........... 2 8 操作步骤 ................................ ................................ ........... 3 9 生物安全 ................................ ................................ ........... 4 附录A（规范性） 培养基和试剂 ................................ ......................... 6 全国团体标准信息平台 T/JPMA 032 —2025 II 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由无锡市疾病预防控制中心提出。 本文件由江苏省预防医学会归口。 本文件起草单位：无锡市疾病预防控制中心、中国疾病预防控制中心传染病预防控制所、江苏省疾 病预防控制中心。 本文件主要起草人：管红霞、齐倩倩、马丹、王雅静、周琪、李娟、袁敏、谈忠鸣、钱慧敏、肖勇、 沙丹、樊玲芳、冯微宏、曹文婷、韩毅。 全国团体标准信息平台 T/JPMA 032 —2025 1 四类人源肠道耐药菌检测技术规范 1 范围 本文件规定了人源肠道中产超广谱β -内酰胺酶肠杆菌 目细菌、碳青霉烯类耐药菌、多黏菌素耐药 菌和耐万古霉素肠球菌检测的设备和材料、培养基和试剂、 标本采集、 保存和转运 、菌株分离鉴定、 药 敏试验、质量控制、结果判定 与报告、 生物安全 的要求。 本文件适用于人源肠道中产超广谱β -内酰胺酶肠杆菌 目细菌、碳青霉烯类耐药菌、多黏菌素耐药 菌和耐万古霉素肠球菌的检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB 4789.28 食品安全国家标准 食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求 GB 19489 实验室 生物安全通用要求 WS/T 639 抗菌药物敏感性试验的技术要求 CLSI M100 抗微生物药物敏感性试验执行标准 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 抗微生物药物敏感性试验 antimicrobial susceptibility testing ，AST 简称药敏试验。 检测微生物（本文件特指细菌）对抗微生物药物（本文件特指抗菌药物）的体外 敏感性的微生物学试验 。 最低抑菌浓度 Minimal inhibitory concentration ，MIC 在琼脂或肉汤稀释法药 敏试验中能抑制肉眼可见的 细菌生长的最低抗菌药物浓度。 产超广谱 β-内酰胺酶肠杆 菌目细菌extended -spectrum β-lactamase -producing enterobacterales, ESBL-E 一类产超广谱 β-内酰胺酶 ，对三代头孢菌素（如头孢噻肟、头孢他啶、头孢曲松）及单环 β-内酰胺 类（如氨曲南） 耐药的革兰阴性杆菌 。其酶活性可被 β-内酰胺酶抑制剂（如克拉维酸）所抑制。 碳青霉烯类耐药菌 carbapenem -resistant organism ，CRO 通过药敏试验， 对亚胺培南、美罗培南、厄他培南或多 立培南任何一种碳青霉烯类抗生素 表现为耐 药或产生碳青霉烯酶 的细菌。主要 包括碳青霉烯耐药肠杆菌、碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌和碳青霉烯耐 药铜绿假单胞菌。 全国团体标准信息平台 T/JPMA 032 —2025 2 多黏菌素耐药菌 polymyxin -resistant bacteria,PRB 通过药敏试验，对多黏菌素类药物（黏菌素或多黏菌素 B）表现为耐药的细菌 。 耐万古霉素肠球菌 vancomycin -resistant enterococcus,VRE 通过药敏试验 ，对万古霉素 表现为耐药的肠球菌，主要指具有重要临床意义的粪肠球菌和屎肠球 菌。 4 设备和材料 二级生物安全柜。 高压灭菌器。 冰箱：2 ℃～8 ℃、-80 ℃。 恒温培养箱： 36 ℃±1 ℃ 。 涡旋振荡器。 电子天平：感量 0.01 g、0.001 g。 微量移液器： 0.5μL～10μL、1μL～100μL、100μL～1 000μL 。 pH计。 微生物生化鉴定系统或微生物 质谱鉴定仪。 比浊仪 无菌锥形瓶：容量1000 mL、500 mL。 无菌培养皿：直径 90 mm。 无菌接种环： 1μL、10μL。 无菌旋盖管： 15 mL。 1.5 mL离心管。 微孔滤膜： 0.22μm。 5 培养基和试剂 实验用水：符合 GB 4789.28 的规定。 生理盐水：符合附录 A.1的规定。 Cary-Blair运送培养基 ：符合附录 A.2的规定。 ESBL筛查培养基： 符合附录 A.3的规定。 CRO筛查培养基： 符合附录 A.4的规定。 PRB筛查培养基： 符合附录 A.5的规定。 VRE筛查培养基： 符合附录 A.6的规定。 脑心浸液琼脂： 符合附录 A.7的规定。 阳离子调节 Mueller-Hinton肉汤（CAMHB）：符合附录 A.8的规定。 0.5麦氏单位 （McFarland ）标准比浊液 。 商品化药敏试验板。 6 质控菌株 大肠埃希菌 ATCC 25922。 铜绿假单胞菌 ATCC 27853。 粪肠球菌 ATCC 29212。 7 检测程序 全国团体标准信息平台 T/JPMA 032 —2025 3 ESBL-E、CRO、PRB和VRE检测程序见图 1。 图1 ESBL-E、CRO、PRB和VRE检测程序 8 操作步骤 标本采集 8.1.1 粪便采集 采集5 g左右新鲜粪便标本置于无菌螺帽容器中， 不应混入尿液及其它异物， 采集过程应无菌操作。 8.1.2 肛拭子采集 无菌棉拭子用生理盐水湿润，轻轻地插入肛门括约肌上方（约 3 cm～5 cm），旋转 3圈，取出，置 于Cary-Blair运送培养基中 ，拭子上宜可见粪便。 保存和转运 采集的标本于冷藏（ 2 ℃～8 ℃）条件下运送到实验室检测。如不能立即检测，标本在 2 ℃～8 ℃ 存放不得超过 48 h。 36 ℃1 ℃，18 h～24 h 36 ℃1 ℃，18 h～24 h 标本采集 标本保存和转运 微生物生化鉴定系统或质谱鉴定仪 脑心浸液琼脂培养基 典型或可疑菌落 基 药敏试验 ESBL筛查培养基 CRO筛查培养基 PRB筛查培养基