ICS71.040.99 CCSZ10 CITS 团 体 标 准 T/CITS338—2025 核受体蛋白亲和选择质谱筛查技术 Nuclearreceptorproteinaffinityselectionmassspectrometryscreeningtechnology 2025-04-30发布 2025-04-30实施 中国检验检测学会  发布 全国团体标准信息平台 T/CITS338—2025 I目次 前言..................................................................................II 1范围................................................................................1 2规范性引用文件......................................................................1 3术语和定义..........................................................................1 4筛查流程............................................................................1 5核受体蛋白制备......................................................................2 5.1试剂、耗材与仪器设备............................................................2 5.2溶液配制........................................................................2 5.3重组质粒转染....................................................................3 5.4核受体蛋白表达..................................................................3 5.5核受体蛋白纯化..................................................................3 5.6受体蛋白浓度测定................................................................3 6磁珠-核受体蛋白亲和筛查.............................................................3 6.1试剂、耗材与仪器设备............................................................3 6.2样品前处理......................................................................4 6.3核受体蛋白亲和捕获实验..........................................................4 6.4筛选方法控制....................................................................4 6.5液相-高分辨质谱联用分析.........................................................4 7活性离子筛选与物质识别..............................................................5 7.1活性离子筛选....................................................................5 7.2物质识别........................................................................5 附录A（规范性）实验方法..............................................................6 A.1核受体蛋白制备..................................................................6 A.2镍离子螯合磁珠-核受体蛋白亲和筛查...............................................7 A.3活性离子筛选....................................................................8 附录B（规范性）仪器参考参数..........................................................9 全国团体标准信息平台 T/CITS338—2025 II前言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中国检验检测学会提出并归口。 本文件起草单位：北京大学、中国科学院生态环境研究中心、中国环境科学研究院、力合科技（湖 南）股份有限公司。 本文件主要起草人：胡建英、李强、李麟宛、徐成、黄崇、杨敏、尤立、安立会、邹雄伟、张辉、 郭珍、张琳琳、吴先伟。 全国团体标准信息平台 T/CITS338—2025 1核受体蛋白亲和选择质谱筛查技术 1范围 本文件提供了核受体蛋白亲和选择质谱筛查技术方法。 本文件适用于应用核受体蛋白亲和选择质谱筛查技术进行健康风险物质筛查。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T6041质谱分析方法通则 GB/T6682分析实验室用水 GB/T13966分析仪器术语 GB/Z35959液相色谱-质谱联用分析方法通则 HJ493水质样品的保存和管理技术规定 HJ494水质采样技术指导 3术语和定义 GB/T6041，GB/T13966和GB/Z35959界定的以及下列术语和定义适用于本文件。 3.1 核受体蛋白nuclearreceptor 细胞内一类配体依赖的转录因子。 3.2 核受体蛋白亲和选择质谱nuclearreceptorproteinaffinityselectionmassspectrometry 利用核受体蛋白亲和原理并结合高分辨质谱对样品中核受体活性物质进行高通量识别的技术。 3.3 核受体活性物质nuclearreceptoractivesubstances 能与细胞内核受体蛋白发生特异性结合并调控下游基因表达的化学物质。 3.4 健康风险物质healthrisksubstances 能对人体健康产生危害的化学物质。 3.5 磁珠-核受体蛋白亲和筛查magneticbeads-nuclearreceptorproteinaffinityscreening 利用磁珠表面的镍离子与核受体蛋白的His标签特异性结合来分离蛋白配体复合物的技术。 3.6 活性离子bioactiveions 通过核受体蛋白亲和选择质谱技术筛选出的具有核受体活性的物质。 4筛查流程 核受体蛋白亲和质谱筛查技术工作流程见图1。 全国团体标准信息平台 T/CITS338—2025 2 图1核受体蛋白亲和质谱筛查流程图 5核受体蛋白制备 5.1试剂、耗材与仪器设备 除另有规定，所使用试剂均为分析纯。实验用水为GB/T6682规定的一级水。具体说明见表1核受 体蛋白制备要求。 表1核受体蛋白制备要求 试剂、耗材与仪器设备 部分说明要求 感受态细胞 酵母提取物 胰蛋白胨 氨苄青霉素 卡那霉素 氯化钠 甘油 异丙基-β-D-硫代半乳糖苷 三羟甲基氨基甲烷 咪唑 乙二胺四乙酸二钠 超纯水制备仪 蛋白亲和纯化仪 His标签蛋白纯化柱 非接触式超声细胞破碎仪 适用样品体积0.5mL~50mL 恒温振荡培养箱 控温范围4℃~60℃，转速10rpm~400rpm 手轮型高压蒸汽灭菌器 设计温度136℃，设计压力0.23MPa 紫外可见分光光度计 波长范围190nm~1100nm，波长准确度±0.5nm 台式高速冷冻离心机 温度范围-11℃~±40℃，转速100rpm~17500rpm 制冰机 电子分析天平称量范围0.5g~820g，实际分度值（d）0.01g，检定分度值 （e）0.1g 电热恒温水浴锅 控温范围室温0℃~100℃，控温精度±0.5℃ 无菌操作台 pH计 测量范围pH（0~14.00）pH，±0.01pH 超声波清洗仪 功率500W，可调范围40%~100% 注：所用玻璃仪器均在马弗炉中经过450℃、4h处理 5.2溶液配制 5.2.1LB液体培养基 分别称取酵母提取物5.00g，胰蛋白胨10.00g，NaCl各10.00g，加入1