ICS 07.100.30 CCS C 53 团 体 标 准 T/CIQA 125 —2025 食品中霉菌和酵母快速 计数 测试片法 Rapid enumeration of molds and yeasts in food — Dry rehydratable film method 2025 -07-04发布 2025 -07-04实施 中国出入境检验检疫协会 发布 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/CIQA 125 —2025 Ⅲ 前 言 本文件按照 GB/T 1.1 -2020《标准化工作导则第 1部分： 标准化文件的结构和起草规则》 的规定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本文件由中国出入境检验检疫协会进出口食品标准化技术委员会（ CIQA/TC 10)提出并归口。 本文件起草单位： 山东美正生物科技有限公司 、国家食品安全风险评估中心 、深圳海关食品检验检 疫技术中心 、通标标准技术服务有限公司 、中农孚德检测技术（北京）有限公司 、光明乳业股份有限公 司、河南双汇投资发展股份有限公司 、内蒙古伊利实业集团股份有限公司 、内蒙古蒙牛乳业 (集团 )股份 有限公司、 元气森林（北京）食品科技集团有限公司 、北京美正生物科技有限公司 。 本文件主要起草人： 陶文靖、王伟、王琦、付敏、吕敬章、肖晶、 贾晨、许冉冉、李志君、王丹、 孙丹丹、 张娜、董彬、王剑铭、苏政、王蕊、吴萍、孙英丽、孙宏伟、刘磊、 曲连海、凌空、 刘赫东、 周琦。 本文件知识产权归中国出入境检验检疫协会所有。任何单位或个人未经许可，不得以营利为目的， 印制、出版、翻译、转发或复制全文或部分文字。 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/CIQA 125 —2025 食品中霉菌和酵母快速 计数 测试片法 1 范围 本文件规定了食品中 霉菌和酵母 测试片快速 计数的方法。 本文件适用于食品中霉菌和酵母的快速 计数。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适 用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 4789.1 食品安全国家标准 食品微生物学检验 总则 GB 4789.15 食品安全国家标准 食品微生物学检验 霉菌和酵母计数 GB 4789.25 食品安全国家标准 食品微生物学检验 酒类、饮料、冷冻饮品采样和检样处 理 GB 4789.28 食品安全国家标准 食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB 19489 实验室生物安全通用要求 3 术语和定义 GB 4789.15 中界定的术语和定义适用于本文件。 4 检测原理 MicroFast®1)霉菌酵母测试片法是用一种预先制备的含有指示剂及冷水可溶性凝胶的培养 基系统进行微生物培养的方法。培养基中含有霉菌和酵母生长的主要营养物质和功能性物质 （如显色底物、冷水可溶性凝胶等）。霉菌和酵母生长过程中代谢产生的酶与测试片中的显 色底物发生特异性反应释放显色基团，随霉菌和酵母生长，显色集团不断积累，显色效应逐 渐增强，最终形成可见光下可计数的蓝绿色菌落。冷水可溶性凝胶遇水形成凝胶层，起固定 营养与隔离保护作用。 1) MicroFast®霉菌酵母测试片 是由山东美正生物科技有限公司提供的产品的商品名。 给出这一信息是为了 方便本文件使用者 。如果其他产品具有相同的效果 ,那么可使用这些等效的产品。 全国团体标准信息平台 T/CIQA 125 —2025 2 5 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 5.1 恒温培养箱： 28 ℃± 1 ℃ 。 5.2 电子天平：感量 0.1 g。 5.3 pH计或精密 pH试纸。 5.4 均质器（拍击式）或等效的设备 、无菌均质袋。 5.5 旋涡振荡器。 5.6 无菌移液管： 1 mL(具0.01 mL刻度 )、10 mL(具0.1 mL刻度 )无菌移液管或移液器及 无菌 吸头。 5.7 无菌滤膜（直径 47 mm，孔径 0.45 μ m）。 5.8 无菌锥形瓶（或其他合适容器）。 5.9 测试片压板 装置。 5.10 膜过滤装置。 5.11 菌落计数装置 ：放大镜或低倍镜或全自动菌落计数仪等。 5.12 恒温装置： 46 ℃± 1 ℃。 6 培养基和试剂 6.1 MicroFast®霉菌酵母测试片 ：见附录 A.1、附录 B。 6.2磷酸盐缓冲液 ：见附录 A.2。 6.3生理盐水 ：见附录 A.3。 6.4高酶活性样品专用稀释液 ：见附录 A.4。 6.5 1 mol/L氢氧化钠 溶液：见附录 A.5。 6.6 1 mol/L 盐酸溶液：见附录 A.6。 6.7 沙氏葡萄糖琼脂： 见附录 A.7。 6.8沙氏葡萄糖肉汤： 见附录 A.8。 6.9胰酪大豆胨液体培养基： 见附录 A.9。 7 检验程序 具体操作程序见图 1。 全国团体标准信息平台 T/CIQA 125 —2025 3 图1 食品中霉菌和酵母快速 计数 测试片法操作程序 8 操作步骤 8.1 样品的稀释 8.1.1 固体、半固体、液体样品：取 25 g（mL）样品，置于盛有 225 mL无菌稀释液（无菌 水或生理盐水或磷酸盐缓冲液）的 无菌锥形瓶（或其他适宜容器）中 ，充分混匀，或置于盛 有225 mL无菌稀释液的无菌均质袋 内，用拍击式均质器拍打 1 min～2 min，制成 1:10的样 全国团体标准信息平台 T/CIQA 125 —2025 4 品匀液。无菌操作吸取 1:10样品匀液 1 mL，沿管壁缓慢注于 9 mL无菌稀释液中（注意吸管 或吸头尖端不要触及液面），在漩涡 振荡器混匀，制成 1:100的样品匀液，以此类推，制备 10倍系列稀释样品匀液。 8.1.2 采用膜过滤方式前处理的样品 ： 取适量 （ 50 mL或其他规定的体积） 样品经直径 47 mm、 孔径 0.45 μm无菌滤膜抽滤，再用 15 mL无菌稀释液冲洗抽滤。必要时可用检样稀释液冲洗滤 杯内壁 1次～ 3次，以确保将 附着在滤杯壁上的检样完全冲洗下来。抽滤完成后取下滤杯， 无 菌操作用镊子取出滤膜待检 ，用于 8.2.3的接种。 8.1.3 蛋黄粉 /制品、芒果、牛油果、生鲜鱼、生虾等 含较高活性酶的样品： 用无菌高酶活性 样品专用稀释液， 参照 8.1.1进行样品稀释。 8.1.4 样品匀液（液体样品包括原液）的 pH应在 5.0～8.5之间，必要时用 1 mol/L氢氧化钠 溶液或1 mol/L 盐酸溶液 调节样品匀液的 pH（采用膜过滤方式前处理的样品除外）。 8.2 接种培养 8.2.1 根据对样品微生物污染状况的估计，选择 2个～ 3个适宜的连续稀释度样品匀液（液体 样品包括原液）进行接种 ，每个稀释度接种两张测试片。 8.2.2 测试片使用前，平衡至室温。测试片平放在水平实验台上，缓慢揭开上膜。将 1 mL样 品匀液垂直滴加在测试片中心区域。缓慢盖上上膜，尽量避免气泡的产生。将压板放在测试片 中央，轻轻压下，使样液均匀分布于圆形培养基上，拿起压板，静置 2 min，再移动测试片。 8.2.3 对于采用膜过滤方式前处理的 样品，无菌操作用镊子将抽滤后的 滤膜贴在揭开上膜后的 测试片中心区域 ，正面向上， 缓慢滴加 1 mL无菌稀释液。 缓慢盖上上膜 ，并按 8.2.2进行后续 操作。 8.2.4 吸取 1 mL无菌稀释液 接种两张测试片 ，作空白对照。 8.2.5 将测试片正置于培养箱内，最多可堆叠至 20片，于28 ℃±1 ℃培养 48 h±2 h，如有必要 可适当延长培养时间 至60 h。 8.3 计数 8.3.1 肉眼观察， 也可使用 菌落计数装置 观察计数 ，在霉菌酵母测试片上，酵母菌落较小， 边界清晰，呈蓝绿色；霉菌菌落较大，边缘不规则，呈蓝绿色。随培养时间延长，可能会伴 随黑色、紫色等其他颜色 （见附录 C）。记录稀释倍数和相应的菌落数量，计数以菌落形成单 位（ colony forming unite ，CFU）表示。 8.3.2 选取菌落数在 10 CFU～150 CFU 范围的霉菌酵母测试片 ，按照 8.3.1和附录 C计数。 当测试片上菌落数多至无法计数时，即测试片整片变成蓝色，记录为 “多不可计 ”。 全国团体标准信息平台