ICS 65.120 CCS B 46 团 体 标 准 宠物饲料中牛磺酸的测定 Determination of taurine in pet feeds 2024 -09-23发布 2024 -10-19实施 中国饲料工业协会 发 布 T/CFIAS 6010—2024 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/CFIAS 6010—2024 I 前言 本文件按照 GB/T 1.1 －2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中国饲料工业协会团体标准技术委员会提出并归口。 本文件起草单位： 中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所 [国家饲料质量检验检测中心 （北 京）]、北京市兽药饲料监测中心、新疆畜牧科学院畜牧业质量标准研究所、上海天祥质量技术服务有 限公司、上海安谱实验科技股份有限公司、岛津企业管理（中国）有限公司、乖宝宠物食品集团股份有 限公司、深圳红瑞生物科技有限公司、上海宠幸宠物用品有限公司、皇誉宠物食品（上海）有限公司、 天津雀巢普瑞纳宠物食品有限公司。 本文件主要起草人：贾铮、樊霞、王继彤、姚婷、严华、李兰、边涛、薛德时、冯玉超、魏佩玲、 江晨舟、王利娟、秦华、徐法典、胡玉珍、田甜、吕少俊、刘淑琴、陈姝、谢爽、周淼佳、田天、杨文 翰、张圆圆、骆丹、田静、徐思远、肖志明、李阳、刘晓露、张祯昊、韩梦、娄迎霞、曹林、李征、冯 秀燕。 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/CFIAS 6010—2024 1 宠物饲料中牛磺酸的测定 1 范围 本文件描述了宠物饲料中牛磺酸含量测定的高效液相色谱法和液相色谱 -串联质谱法。 本文件适用于宠物饲料中牛磺酸含量的测定。 本文件高效液相色谱法的定量限为 100 mg/kg ；液相色谱 -串联质谱法的定量限为 5 mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 20195 动物饲料 试样的制备 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 第一法 高效液相色谱法 4.1 原理 试样中的牛磺酸用水提取，沉淀蛋白后，经丹磺酰氯衍生化，高效液相色谱仪测定，外标法定量。 4.2 试剂或材料 除非另有说明，仅使用分析纯试剂。 4.2.1 水：GB/T 6682 ，一级。 4.2.2 乙腈：色谱纯。 4.2.3 盐酸溶液：移取 9 mL盐酸，加水稀释至 100 mL，混匀。 4.2.4 亚铁氰化钾溶液：称取 15.0 g亚铁氰化钾，用水溶解并稀释至 100 mL，混匀。 4.2.5 乙酸锌溶液：称取 30.0 g乙酸锌，用水溶解并稀释至 100 mL，混匀。 4.2.6 碳酸钠缓冲溶液 （ pH 9.5） ： 称取0.848 g无水碳酸钠， 加约 80 mL水溶解， 用盐酸溶液 （ 4.2.3） 调节pH至9.5，用水定容至 100 mL。 4.2.7 丹磺酰氯乙腈溶液：称取 0.10 g丹磺酰氯，用乙腈溶解并稀释至 100 mL。临用现配。 4.2.8 盐酸甲胺溶液：称取 2.0 g盐酸甲胺，用水溶解并稀释至 100 mL。2℃～8℃保存，有效期 3个 月。 4.2.9 乙酸钠缓冲溶液（ pH 4.20）：称取 0.820 g无水乙酸钠，加约 900 mL水溶解，加冰乙酸调节 pH至4.20，用水定容至 1000 mL，混匀，微孔滤膜（ 4.2.12）过滤。 4.2.10 牛磺酸标准储备溶液（ 1 mg/mL）：称取 0.1 g牛磺酸标准品（ CAS号：107-35-7，纯度≥ 99 %） （精确至 0.1 mg），用水溶解并定容至 100 mL。2℃～8℃保存，有效期 7天。 4.2.11 牛磺酸标准系列溶液：准确移取牛磺酸标准储备溶液（ 4.2.10）适量，用水稀释并定容，配制 成浓度分别为 2 μg/mL、5 μg/mL、10 μg/mL、20 μg/mL、50 μg/mL和100 μg/mL的标准工作溶 液。临用现配。 4.2.12 微孔滤膜： 0.45 μm，水系。 4.3 仪器设备 全国团体标准信息平台 T/CFIAS 6010—2024 2 4.3.1 高效液相色谱仪：配紫外检测器（或二极管阵列检测器）。 4.3.2 分析天平：精度为 1 mg和0.1 mg。 4.3.3 超声波清洗仪。 4.3.4 离心机：转速不低于 5000 r/min 。 4.3.5 涡旋混合器。 4.3.6 酸度计：精度为± 0.01。 4.4 样品 按GB/T 20195 制备试样。固体试样至少 200 g，粉碎使其全部通过 0.425 mm 孔径的分析筛，充分混 匀，密闭容器中避光保存；膏状或液体原包装保存，备用。 4.5 试验步骤 4.5.1 提取 平行做两份试验。称取 2 g～5 g（精确至 1 mg）试样于 50 mL离心管中，加入约 40 mL水，充分混 匀，超声 20 min（中间振摇两次），冷却至室温，转移至 100 mL容量瓶中，分次用少量水洗涤离心管， 合并溶液至容量瓶中，加入 1 mL亚铁氰化钾溶液（ 4.2.4），混匀，再加入 1 mL乙酸锌溶液（ 4.2.5）， 混匀，用水定容，充分混匀。移取溶液约 10 mL于5000 r/min 离心10 min，上清液备用。 4.5.2 衍生化 4.5.2.1 试样溶液的衍生化 准确吸取上清液（ 4.5.1）1 mL于10 mL具塞试管中，准确加入 1 mL碳酸钠缓冲溶液（ 4.2.6）、1 mL 丹磺酰氯乙腈溶液（ 4.2.7），涡旋混匀，避光于 60℃水浴中反应 30 min后，立即加入 0.1 mL盐酸甲胺 溶液（4.2.8）涡旋混合，以终止反应。避光静置至室温，微孔滤膜（ 4.2.12）过滤，待测。 4.5.2.2 标准系列溶液的衍生化 分别准确移取 1 mL标准系列溶液（ 4.2.11），与4.5.2.1操作同步进行。 4.5.3 液相色谱参考条件 液相色谱参考条件如下： a) 色谱柱： C18色谱柱，柱长 250 mm，内径4.6 mm，粒径5 μm，或性能相当者； b) 柱温：30℃； c) 检测波长： 254 nm； d) 进样量： 10 μL； e) 流速：1.0 mL/min ； f) 流动相： A——乙酸钠缓冲溶液（ 4.2.9），B——乙腈； g) 梯度洗脱，洗脱程序见表 1。 表1 梯度洗脱程序 时间/min A/% B/% 0.0 80 20 1.0 80 20 3.0 60 40 10.0 5 95 13.0 5 95 13.1 80 20 18.0 80 20 4.5.4 测定 全国团体标准信息平台