书书书　 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 犛 犖／犜３ １ ４ ８—２ ０ １ ２ 出口食品中过氧化苯甲酰含量的测定 高效液相色谱法 犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳犫 犲 狀 狕 狅 狔犾狆犲 狉 狅 狓 犻 犱 犲 犻 狀犳 狅 狅 犱犳 狅 狉犲 狓 狆狅 狉 狋— 犎 犘 犔 犆 ２ ０ １ ２０ ５０ ７发布 ２ ０ １ ２１ １１ ６实施 中 华 人 民 共 和 国 国家质量监督检验检疫总局发 布 rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.书书书前　　言 　　本标准按照 Ｇ Ｂ／Ｔ１． １—２ ０ ０ ９给出的规则起草 。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任 。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口 。 本标准起草单位 ：中华人民共和国浙江出入境检验检疫局 、中华人民共和国连云港出入境检验检 疫局。 本标准主要起草人 ：刘海山、陈笑梅、黄超群、石蕾、楼成杰、汤杭燕、王海涛。 Ⅰ犛 犖／犜３ １ ４ ８—２ ０ １ ２ rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.出口食品中过氧化苯甲酰含量的测定 高效液相色谱法 １　范围 本标准规定了食品中过氧化苯甲酰含量检测的高效液相色谱测定方法 。 本标准适用于小麦粉 、米粉和马铃薯淀粉等食品中过氧化苯甲酰含量的检测 。 第一法　还　原　法 ２　方法提要 用甲醇水（２＋８，体积比）提取样品中的过氧化苯甲酰 ，在提取液中加入亚硫酸钠溶液 ，将过氧化苯 甲酰还原为苯甲酸 ，过０． ４ ５μｍ滤膜后，用高效液相色谱仪测定 ，外标法定量 。 ３　试剂和材料 除另有规定外 ，试剂均为分析纯 ，水为重蒸水或去离子水 。 ３．１　乙腈：液相色谱级 。 ３．２　甲醇：液相色谱级 。 ３．３　亚硫酸钠 。 ３．４　乙酸铵。 ３．５　甲醇水（２＋８，体积比） ：取１ ０ ０ｍＬ 甲醇（３． ２） ，与４ ０ ０ｍＬ 水混匀。 ３．６　４％亚硫酸钠溶液 ：称取８． ０ｇ亚硫酸钠 （３． ３） ，用水溶解并定容至 ２ ０ ０ｍＬ 。 ３．７　０． ０ ０ ５ｍ ｏ ｌ ／Ｌ乙酸铵溶液 ：称取０． ３ ９ｇ乙酸铵（３． ４） ，用水溶解并定容至 １０ ０ ０ｍＬ 。 ３．８　过氧化苯甲酰 （分子式：Ｃ１ ４Ｈ１ ０Ｏ４，ＣＡ Ｓ号：９ ４  ３ ６  ０）标准品：纯度大于等于 ９ ８． ０％。 ３．９　过氧化苯甲酰标准储备溶液 ：准确称取适量过氧化苯甲酰标准品 （３． ８） ，用乙腈配制成 ２ ０ ０μｇ／ｍ Ｌ 标准储备液 ，０℃～４℃储存。 ３．１ ０　过氧化苯甲酰标准工作溶液 ：根据需要 ，用乙腈将标准储备液 （３． ９）稀释成适当浓度的标准工作 溶液。 ３．１ １　０． ４ ５μｍ有机系滤膜 。 ４　仪器和设备 ４．１　高效液相色谱仪 ，配有紫外检测器或二极管阵列检测器 。 ４．２　分析天平 ：感量０． １ｍｇ和０． ０ １ｇ。 ４．３　涡旋混匀器 。 ４．４　离心机：转速不低于 ４０ ０ ０ｒ／ｍ ｉ ｎ。 １犛 犖／犜３ １ ４ ８—２ ０ １ ２ rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.５　试样制备与保存 ５．１　试样制备 取代表性样品约 ５ ０ ０ｇ，混匀后均分成两份 ，装入洁净容器内 ，作为试样 ，密封，并标明标记 。 ５．２　试样保存 将试样置于 ０℃～４℃保存。在制样操作过程中 ，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化 。 ６　测定步骤 ６．１　提取 称取１ｇ试样（精确至０． ０ １ｇ） ，置于５ ０ｍＬ离心管中 。加入１ ０ｍＬ甲醇水（３． ５） ，涡旋混匀 ５ｍ ｉ ｎ 后离心（４０ ０ ０ｒ／ｍ ｉ ｎ）５ｍ ｉ ｎ，过滤。 ６．２　还原 取５． ０ｍＬ 滤液，转移至另一支离心管中 。加入５． ０ｍＬ４％ 亚硫酸钠溶液 （３． ６） ，涡旋混匀 ５ｍ ｉ ｎ 后静置１ ０ｍ ｉ ｎ。过０． ４ ５μｍ滤膜（３． １ １）后供高效液相色谱分析 。 ６．３　标准工作曲线 在５个离心管中分别加入适量过氧化苯甲酰标准工作溶液 ，用甲醇水（３． ５）补至５． ０ｍＬ ，再加入 ５． ０ｍ Ｌ４％ 亚硫酸钠溶液 （３． ６） ，使混匀后溶液中过氧化苯甲酰的浓度分别为 ０． ２ ５μｇ／ｍ Ｌ、０． ５μｇ／ｍ Ｌ、 １μｇ／ｍＬ、５μｇ／ｍＬ、１ ０μｇ／ｍＬ。涡旋混匀 ５ｍ ｉ ｎ后静置１ ０ｍ ｉ ｎ。过０． ４ ５μｍ滤膜后供高效液相色谱 分析。 ６．４　测定 ６．４．１　色谱条件 色谱条件如下 ： ａ）　色谱柱：Ｃ１ ８，５μｍ，２ ５ ０ｍｍ×４． ６ｍｍ （内径） ，或相当的色谱柱 ； ｂ）　流动相：梯度洗脱条件见表 １； ｃ）　流速：１． ０ｍＬ／ｍ ｉ ｎ； ｄ）　检测波长 ：２ ３ ０ｎ ｍ； ｅ）　进样量：５ ０μＬ。 表１　梯度洗脱条件 时间／ｍ ｉ ｎ 甲醇／％ ０． ０ ０ ５ｍ ｏ ｌ ／Ｌ乙酸铵／％ ０． ０ ０ １ ０ ９ ０ ４． ０ ０ １ ０ ９ ０ １ ０． ０ ０ ４ ０ ６ ０ １ １． ０ ０ １ ０ ９ ０ １ ６． ０ ０ １ ０ ９ ０ ２犛 犖／犜３ １ ４ ８—２ ０ １ ２ rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.６．４．２　色谱测定 根据样液中苯甲酸含量 ，选择浓度相近的标准工作溶液 。还原所得标准溶液和样液中苯甲酸的响 应值均应在仪器检测的线性范围内 。对还原所得标准溶液和样液等体积穿插进样测定 。在上述色谱条 件下，苯甲酸的保留时间为 ７． １ｍ ｉ ｎ 。还原所得苯甲酸标准溶液的色谱图参见图 Ａ． １，苯甲酸的紫外光 谱图参见图 Ａ． ２。 ６．５　空白试验 除不加试样外 ，均按上述步骤进行 。 ７　结果计算和表述 用色谱数据处理机或按式 （１）计算试样中过氧化苯甲酰含量 ，计算结果应扣除空白值 。 犡＝犮×犞 犿…………………………（ １） 　　式中： 犡— — —试样中过氧化苯甲酰的含量 ，单位为毫克每千克 （ｍｇ／ｋｇ） ； 犮— — —由标准曲线得到的样液中过氧化苯甲酰的浓度 ，单位为微克每毫升 （μｇ／ｍＬ） ； 犞— — —样液最终定容体积 ，单位为毫升 （ｍＬ） ； 犿— — —最终样液所代表的试样量 ，单位为克 （ｇ） 。 ８　测定低限 、回收率 ８．１　测定低限 本方法对食品中过氧化苯甲酰的测定低限为 ５ｍｇ／ｋｇ。 ８．２　回收率 在小麦粉 、米粉和马铃薯淀粉样品中添加过氧化苯甲酰的浓度在 ５ｍｇ／ｋｇ、６ ０ｍｇ／ｋｇ、１ ５ ０ｍｇ／ｋｇ 时，还原法测定的回收率范围见表 ２。 表２　还原法测定小麦粉 、米粉和马铃薯淀粉样品中过氧化苯甲酰的回收率范围 ％ 添加浓度 ／（ｍｇ／ｋｇ） 小麦粉 米粉 马铃薯淀粉 ５ ８ ３． ６～９ ２． ９ ８ ６． ０～９ ３． ７ ８ ３． ６～９ １． ３ ６ ０ ８ ８． ６～９ ２． ３ ８ ８． ７～９ ２． ４ ８ ９． ４～９ ３． ５ １ ５ ０ ９ ８． ３～１ ０ ２． ４ ９ ０． ２～９ ４． １ ９ ２． ２～９ ６． ０ 第二法　直接提取法 ９　方法提要 用乙腈提取试样中的过氧化苯甲酰 ，过０． ４ ５μｍ滤膜后，用高效液相色谱仪测定 ，外标法定量 。 ３犛 犖／犜３ １ ４ ８—２ ０ １ ２ rHgCb@g · ykbûR60
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SÑU.１ ０　试剂和材料 除另有规定外 ，试剂均为分析纯 ，水为重蒸水或去离子水 。 １ ０．１　乙腈：液相色谱级 。 １ ０．２　甲醇：液相色谱级 。 １ ０．３　过氧化苯甲酰 （分子式：Ｃ１ ４Ｈ１ ０Ｏ４，ＣＡ Ｓ号：９ ４  ３ ６  ０）标准品：纯度大于等于 ９ ８． ０％。 １ ０．４　过氧化苯甲酰标准储备溶液 ：准确称取适量过氧化苯甲酰标准品 （１ ０． ３） ，用乙腈配制成 ２ ０ ０μｇ／ｍＬ标准储备液 ，０℃～４℃储存。 １ ０．５　过氧化苯甲酰标准工作溶液 ：根据需要 ，用乙腈将标准储备液 （１ ０． ４）稀释成适当浓度的标准工作 溶液。 １ ０．６　０． ４ ５μｍ有机系滤膜 。 １ １　仪器和设备 １ １．１　高效液相色谱仪 ，配有紫外检测器或二极管阵列检测器 。 １ １．２　分析天平 ：感量０． １ｍｇ和０． ０ １ｇ。 １ １．３　涡旋混匀器 。 １ １．４　离心机（４０ ０ ０ｒ／ｍ ｉ ｎ） 。 １ ２　试样制备与保存 同第５章。 １ ３　测定步骤 １ ３．１　提取 称取１ｇ试样（精确至０． ０ １ｇ） ，置于５ ０ｍＬ离心管中 。加入１ ０ｍＬ乙腈，涡旋混匀 ５ｍ ｉ ｎ后离心 （４０ ０ ０ｒ／ｍ ｉ ｎ）５ｍ ｉ ｎ。取上清液过 ０． ４ ５μｍ滤膜（１ ０． ６）后供高效液相色谱分析 。 １ ３．２　测定 １ ３．２．１　色谱条件 色谱条件如下 ： ａ）　色谱柱：Ｃ１ ８，３． ５μｍ，１ ５ ０ｍｍ×４． ６ｍｍ （内径） ，或相当的色谱柱 ； ｂ）　流动相：梯度洗脱条件见表 ３。 ｃ）　流速：１． ０ｍＬ／ｍ ｉ ｎ； ｄ）　检测波长 ：２ ３ ５ｎ ｍ； ｅ）　进样量：２ ５μＬ。 ４犛 犖／犜３ １ ４ ８—２ ０ １ ２ rHgCb@g · ykbû