SN-T 2102.1-2008 食源性病原体PCR检测技术规范第1部分通用要求和定义

书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２１０２．１—２００８／犐犛犗２２１７４：２００５食源性病原体犘犆犚检测技术规范第１部分：通用要求和定义犘狅犾狔犿犲狉犪狊犲犮犺犪犻狀狉犲犪犮狋犻狅狀（犘犆犚）犳狅狉狋犺犲犱犲狋犲犮狋犻狅狀狅犳犳狅狅犱  犫狅狉狀犲狆犪狋犺狅犵犲狀狊— 犘犪狉狋１：犌犲狀犲狉犪犾狉犲狇狌犻狉犲犿犲狀狋狊犪狀犱犱犲犳犻狀犻狋犻狅狀狊［ＩＳＯ２２１７４：２００５，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙｏｆｆｏｏｄａｎｄａｎｉｍａｌｆｅｅｄｉｎｇｓｔｕｆｆｓ— Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ（ＰＣＲ）ｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｆｏｏｄ  ｂｏｒｎｅｐａｔｈｏｇｅｎｓ— Ｇｅｎｅｒａｌｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓａｎｄｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎｓ，ＩＤＴ］２００８０７１７发布２００９０２０１实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布 rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.书书书前　　言　　ＳＮ／Ｔ２１０２《食源性病原体ＰＣＲ检测技术规范》共分为四个部分： — — —第１部分：通用要求和定义； — — —第２部分：ＰＣＲ仪性能试验要求； — — —第３部分：定性检测方法样品制备要求； — — —第４部分：定性检测方法扩增和检测要求。本部分为ＳＮ／Ｔ２１０２的第１部分。本部分等同采用ＩＳＯ２２１７４：２００５《食品与动物饲料微生物学　食源性病原体ＰＣＲ检测　通用要求和定义》，并做了如下编辑性修改： — — —对“前言”和“引言”进行了修改； — — —对“规范性引用文件 ”的描述按照ＧＢ／Ｔ１．１的要求进行了修改； — — —将标准中的部分 “注”按中文标准习惯改为正文； — — —将标准中的国际标准用相应的国家标准或行业标准替代，如：ＧＢ／Ｔ２７０２５代替ＩＳＯ１７０２５； — — —将“警告”改为“安全要求，并放置到标准的末尾段 ” 。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分由中华人民共和国山西出入境检验检疫局、中华人民共和国上海出入境检验检疫局、中华人民共和国内蒙出入境检验检疫局、中华人民共和国江苏出入境检验检疫局、中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局负责起草。本部分主要起草人：李卫华、李晓虹、刘中学、蒋原、曹际娟、王海艳。本部分系首次发布的出入境检验检疫行业标准。 Ⅰ犛犖／犜２１０２．１—２００８／犐犛犗２２１７４：２００５ rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.引　　言　　聚合酶链式反应（ＰＣＲ）具有快速、灵敏和特异的优点，利用ＰＣＲ技术进行食源性微生物的检测方法近年来发展十分迅速。根据所要扩增目标核酸的类型，可将ＰＣＲ技术分为ＤＮＡ扩增（反转录ＰＣＲ）和ＲＮＡ扩增（ＰＣＲ）两大类，并以上述两类ＰＣＲ技术为基础，发展和衍生出了多种ＰＣＲ检测技术。ＩＳＯ２２１７４：２００５，由欧洲标准委员会（ＣＥＮ）食品分析 — — —水平方法技术委员会（ＣＥＮ／ＴＣ２７５）与食物产品技术委员会（ＩＳＯ／ＴＣ３４）微生物小组委员会（ＳＣ９）依照ＩＳＯ和ＣＥＮ技术合作协议联合制定。本部分等同采用ＩＳＯ２２１７４：２００５，为《食源性病原体ＰＣＲ检测技术规范》的第１部分。提出了食源性病原体体外ＰＣＲ扩增和检测的通用要求，并确保不同的实验室得到检测结果的可比性和可重复性。 Ⅱ犛犖／犜２１０２．１—２００８／犐犛犗２２１７４：２００５ rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.食源性病原体犘犆犚检测技术规范第１部分：通用要求和定义１　范围ＳＮ／Ｔ２１０２的本部分规定了体外核酸序列（ＤＮＡ或ＲＮＡ）扩增的通用要求。规定了检测食品和食品分离物中病原体的ＰＣＲ方法。本部分适用于食品和饲料中病原体检测，也适用于其他样品（如环境样品）和非病原微生物的检测。２　规范性引用文件下列文件中的条款通过ＳＮ／Ｔ２１０２的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。ＧＢ／Ｔ２７０２５　检测和校准实验室能力的通用要求ＳＮ／Ｔ２１０２．３　食源性病原体ＰＣＲ检测技术规范　第３部分：定性检测方法样品制备要求ＳＮ／Ｔ２１０２．４　食源性病原体ＰＣＲ检测技术规范　第４部分：定性检测方法扩增和检测要求ＷＳ／Ｔ２３０　临床诊断中聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术的应用３　术语和定义下列术语和定义适用于ＳＮ／Ｔ２１０２的本部分。３．１　常规术语３．１．１核酸　狀狌犮犾犲犻犮犪犮犻犱作为遗传信息介质或信息表达因子的生物大分子。核酸有ＤＮＡ和ＲＮＡ两种类型。３．１．２脱氧核糖核酸　犱犲狅狓狔狉犻犫狅狀狌犮犾犲犻犮犪犮犻犱，犇犖犃以双链或单链形式存在的脱氧核糖核苷酸聚合体。３．１．３核糖核酸　狉犻犫狅狀狌犮犾犲犻犮犪犮犻犱，犚犖犃以双链或单链形式存在的核糖核苷酸聚合体。３．１．４基质　犿犪狋狉犻狓用于分析的样品，这些样品在化学组成或物理状态上可能存在差异。３．１．５重复性条件　狉犲狆犲犪狋犪犫犻犾犻狋狔犮狅狀犱犻狋犻狅狀狊同一操作者在同一实验室使用相同的仪器和方法在较短时间间隔内获得独立结果的条件。３．１．６再现性条件　狉犲狆狉狅犱狌犮犻犫犻犾犻狋狔犮狅狀犱犻狋犻狅狀狊不同操作者在不同实验室使用不同仪器和相同方法检测同一个项目得到检测结果的条件。１犛犖／犜２１０２．１—２００８／犐犛犗２２１７４：２００５ rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.３．１．７检测　犱犲狋犲犮狋犻狅狀识别是否存在目标核酸的过程。３．１．８检出限　犱犲狋犲犮狋犻狅狀犾犻犿犻狋犲犱在方法规定的实验条件下稳定地检测出定量样品中目标微生物最低的浓度或含量。３．１．９鉴定　犻犱犲狀狋犻犳犻犮犪狋犻狅狀确定某一分离产物特定属性的过程。３．２　与犇犖犃／犚犖犃提取和纯化相关的术语３．２．１核酸提取　狀狌犮犾犲犻犮犪犮犻犱犲狓狋狉犪犮狋犻狅狀释放目标核酸的样品处理过程。３．２．２核酸纯化　狀狌犮犾犲犻犮犪犮犻犱狆狌狉犻犳犻犮犪狋犻狅狀能得到更为纯净ＤＮＡ的方法。本部分中的 “纯化”是指减少ＰＣＲ反应显著抑制因子的过程。３．２．３犇犖犃模板质量　犘犆犚狇狌犪犾犻狋狔犇犖犃用于ＰＣＲ反应ＤＮＡ模板的有效长度和拷贝数量。３．２．４犚犖犃模板质量　犚犜  犘犆犚狇狌犪犾犻狋狔犚犖犃用于反转录ＰＣＲ的ＲＮＡ模板的有效长度和拷贝数量。３．３　犚犖犃到犇犖犃反转录相关术语３．３．１反转录　狉犲狏犲狉狊犲狋狉犪狀狊犮狉犻狆狋犻狅狀，犚犜在反转录引物参与下，在反转录酶作用下，以ＲＮＡ为模板，以三磷酸脱氧核糖核苷酸（Ｄｎｔｐ）为底物合成ＤＮＡ的过程。３．３．２反转录酶　狉犲狏犲狉狊犲狋狉犪狀狊犮狉犻狆狋犪狊犲使用反转录引物，催化ＲＮＡ反转录为ＤＮＡ的酶。３．３．３核糖核酸酶　狉犻犫狅狀狌犮犾犲犪狊犲降解ＲＮＡ的酶。３．３．４核糖核酸酶抑制剂　狉犻犫狅狀狌犮犾犲犪狊犲犻狀犺犻犫犻狋狅狉抑制核糖核酸酶活性的物质。３．３．５反转录引物　犚犜 狆狉犻犿犲狉用于反转录反应的引物。３．３．６反转录反应混合物　犚犜犿犻狓反转录所需的反应混合试剂。２犛犖／犜２１０２．１—２００８／犐犛犗２２１７４：２

SN-T 2102.1-2008 食源性病原体PCR检测技术规范 第1部分 通用要求和定义

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