ICS65.020.20 B 05 备案号： DB64 宁夏回族自治区地方标准 DB 64/ T1253-2016 橡胶草种苗组培快繁技术规程 2016 -12- 28 发布 2017-03-28实施 宁夏回族自治区质量技术监督局 发布 DB64/ T1253—2016 前言 本标准的编写格式符合GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》的规定。 本标准由宁夏农林科学院提出。 本标准由宁夏回族自治区农牧厅归口。 本标准起草单位：宁夏农林科学院农业生物技术研究中心。 本标准主要起草人：张源沛、朱金霞、郑国保、李苗、孔德杰。 1 DB64/T1253—2016 橡胶草种苗组培快繁技术规程 1范围 本标准规定了橡胶草种苗组培快繁的材料的采集、丛芽诱导、增殖培养、生根培养、穴盘苗生产及 管理、穴盘苗质量标准、包装、标志及运输等技术要素。 本标准适用于橡胶草种苗的组培快繁技术管理的全过程 2材料的采集 2.1新品种母本圃种植 将引进的新品种种株种植在温室内，加强肥水管理，确保植株健壮，防治病虫害，减少植株表面附 带的微生物和害虫。 2.2母株的选择 选择无病虫害，生长健壮的橡胶草植株为母株。 2.3实验材料的采集 2.3.1采集时间 在5月～11月，选择连续晴天3天以上的天气采集外植体。 2.3.2采集方法 a） 选取母株上健壮的叶片和叶柄及根做实验材料； 取生长30d左右的橡胶草整株，从叶片基部切取长度5cm～7cm鲜嫩的叶片，待用；剪下主 根，除去须根，待用。 2.4外植体的消毒 外植体消毒按以下步骤进行： 先用自来水冲洗20min～30min。再用洗洁精或洗衣粉水浸泡并放于振荡器中振荡清洗30min，然 后用去离子水冲洗5次。然后在超净工作台中，用75%酒精将外植体消毒30S，无菌水漂洗1次～2次。 之后0.1%升汞+4滴～5滴吐温-20的消毒液浸没外植体，轻轻摇动，消毒9min～11min，后用无菌水 漂洗4次～5次，每次1min～2min。最后将叶片、叶柄和根分别切段，叶片约为0.5cm×0.5cm大小， 叶柄长约1.0cm～1.5cm，根段长约1.0cm～1.5cm，备用。 3丛芽诱导 3.1丛芽诱导培养基配方 橡胶草叶片和叶柄丛生芽诱导培养基参见附录A（表A.1），根丛生芽诱导培养基参见附录A（表 1 DB64/T1253-—2016 A.2)。 3.2培养基制作方法 3.2.1准备 根据培养基成分准备好去离子水、琼脂、蔗糖和各类母液等。 3.2.2定容 入700mL～800mL去离子水，并边加热边搅拌至均匀，加去离子水至1L。 3.2.3pH值测定 充分搅拌后，用pH试纸测pH值，用0.1mo1/L的HC1或0.1mo1/L的NaOH调节pH值至5.8。 3.2.4分装 将培养基分装在350mL的培养瓶中，每升分装20瓶25瓶，每瓶分装约40mL50mL。 3.2.5封口 盖好带透气膜的瓶盖。 3.2.6灭菌 在1.1kg/cm～1.2kg/cm下，121℃灭菌15min。 3.2.7贮存 灭菌后的培养基宜在室温下放置5天左右再用，且贮存时间不应超过一个月。 3.3培养条件 丛芽诱导培养的温度控制在20℃～28℃，光照强度为15001x～30001x，光照时间11h/d～17 h/d。 3.4接种与转接 3.4.1接种 将3.4中准备好的实验材料叶片、叶柄和根做为外植体，分别接种到叶片和叶柄丛生芽诱导培养基， 根丛生芽诱导培养基上，诱导丛芽生长。 3.4.2转接 首次接种5d～8d后应将外植体转接至新的丛生芽诱导培养基，其后则每隔20d～30d转接1次。 4增殖培养 4.1增殖培养基 橡胶草的增殖培养基参见附录A（表A.1或表A.2）。培养基按3.2中方法进行制作。 2 DB64/ T1253—2016 4.2培养条件 增殖培养的温度、光照强度及光照时间与丛芽诱导相同。 4.3培养周期 橡胶草的增殖周期为20d～30d，及时将培养材料转接至新鲜的增殖培养基。 4.4增殖转接 4.4.1转接方法 转接增殖丛芽时，应将大丛芽切分为3个～4个芽组成的小芽丛。切分丛芽时，应避免产生过多和 过大的伤口。 4.4.2注意事项 废弃污染、白化、玻璃化的增殖苗。 4.5材料更新 增殖培养代数宜控制在15代～30代，应该重新采集外植体更新培养材料。 5生根培养 5.1生根培养基 橡胶草生根培养基参见附录A（表A.1或表A.2），培养基按3.2中方法进行制作。 5.2生根苗 橡胶草芽苗高度大于1.5cm时可转入生根培养。弃去一次生根培养未生根的芽苗。 5.3培养条件 光照时间12h/d16h/d。生根培养的温度、光照强度和光照时间与丛芽诱导相同。橡胶草生根培 养的容器高度应大于15cm，直径应大于10cm。 6穴盘苗生产及管理 6.1炼苗 6.1.1移栽标准 在培养容器中生长的根、茎、叶俱全的完整植株，基部长出1条4cm～8cm长的主根时，即可进行 炼苗。 6.1.2炼苗方法 将培养瓶放置在温室中，温度控制在（20+5）℃，封口培养3d～8d，然后打开瓶盖培养5d～10 d. 6.2移栽 3