ICS DB64 宁夏回族自治区地方标准 DB64/T1069-—2015 同心圆枣组培苗试管外微嫁接育苗技术规 程 2015-07-13发布 2015-07-13实施 宁夏回族自治区质量技术监督局 发布 DB64/T 1069—-2015 前言 本标准的编写格式符合GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》的要求。 本标准由宁夏回族自治区林业厅提出并归口。 本标准由宁夏职业技术学院起草。 本标准主要起草人：张存智、王敏、魏鹏、胡瑞华、尚雁鸿、杨玲、顾文、刘松涛、张娟、侯建春、 詹红、陈青 I DB64/T 1069---2015 同心圆枣组培苗试管外微嫁接育苗技术规程 1 范围 本标准规定了同心圆枣组培苗试管外微嫁接技术的术语和定义，接穗组织培养、组培苗试管外嫁接、 炼苗、移裁技术。 本标准适用于同心圆枣组培苗试管外微嫁接繁育技术。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T8321.9-2009农药合理使用准则（九） 3术语与定义 下列术语与定义适用于本标准。 3. 1 组织培养 在无菌培养基上，对植物离体器官、组织或细胞进行培养，以形成再生植株，或培养新的育种材料 的生物技术。 3. 2 外植体 生长在培养基上的被培养的器官、组织或细胞。 3. 3 培养基 为外植体的生长、发育提供所需物质的基质。 3. 4 接种 将外植体经消毒后，在无菌条件下植入培养基上的过程。 3. 5 同心圆枣组培苗微嫁接技术 1 DB64/T 1069-2015 同心圆枣组培苗微嫁接技术以该品种试管苗长1.2cm～1.5cm的两芽茎段为接穗，以预先培养出 的酸枣苗为砧木，在自然条件下进行嫁接，之后继续培养。 4接穗的组织培养 4.1培养基配置 同心圆枣外植体启动培养基为MS大量（硝酸铵为550mg.L-1）+MS微量+MS有机+6-BA1.5mg.L -1+IBA0.3mg.L-1，蔗糖20g.L-1和琼脂4.0g.L-1，pH值5.8～6.0。继代增殖培养基可选用：MS 大量（硝酸铵为550mg.L-1）+MS微量+MS有机+IBA0.1mg.L-1+NAA0.05mg.L-1+蔗糖20g.L-1+琼脂 粉4.0g.L-1。 4.2外植体接种 4.2.1外植体的选择 选择生长健壮、无病虫害的生长3年～5年同心圆枣植株作为采样母株，取幼嫩枣头为外植体，采样 最佳时间为5月～6月。 4.2.2外植体消毒 将外植体剪成3.5cm~4.5cm的茎段，先在滴加适量洗洁精的清水中刷洗于净，然后在自来水龙头下 流水冲洗2h～4h，经过修剪处理，然后置于超净工作台上，75%乙醇处理20s～30s，用无菌水洗3次～5 次；0.1%氯化汞处理10min15min，同时滴加2滴浓度为10%吐温-80，用无菌水洗3次～5次即可。 4.2.3接种 在超净工作台上，将消毒后的外植体切割成2芽茎段竖插于培养基中。 4.3组培苗培养 4.3.1启动培养 外植体接种后5d～7d开始转绿，20d左右发芽长出新芽。 4.3.2增殖培养 当启动培养抽出的新芽长至2.0cm～3.0cm时，切下转入增殖培养基上进行继代增殖培养。对继代材 料，待长至瓶高4cm～5cm时，切成含顶芽茎段和含2个芽茎段进行增殖培养，用同种培养基转接，30d～ 40d继代1次。 4.3.3培养条件 温度25℃~30℃，光照强度2000Lx~3000Lx，每天光照16h。 5组培苗试管外嫁接 5.1接穗的处理 5.1.1组培苗炼苗 DB64/T 1069—2015 将生长健壮，培养30d～40d，5cm～7cm高的同心圆枣组培苗进行室内开瓶强光炼苗，光强在 10000Lx～20000Lx的地方，开瓶，倒入瓶高0.5cm～1cm的无菌水，瓶口开度为1/4～1/3，炼苗时间为5d～ 10d。练苗室内的温度应20℃～30℃，空气湿度在30%～40%。 5.1.2采集接穗 炼苗结束后，将组培苗剪成带两芽茎段作为接穗，接穗下部削成楔形。 5.2砧木准备 5.2.1酸枣的催芽处理 2月初，将适量种子放入清水中浸泡0.5h，然后将上浮的杂质和粒种子捞出；再用0.3%～0.5%的 高锰酸钾溶液浸种1h；然后，将消毒好的种子在60℃的热水中浸泡，并不断搅拌，待冷至室温后，再浸 泡12h～24h捞出；放在温度为23℃～27℃的恒温箱中，用湿毛巾保湿催芽，毛巾和种子每天用清水漂洗。 5.2.2酸枣的播种 选择刚刚露芽酸枣种子，在温室中，播种于已装好基质（主要成分是蛭石：珍珠岩：草炭=1:1:1.5） 的8cm×8cm营养钵中，每个营养钵中播1粒～2粒种子。基质要经过800倍～1000倍的多菌灵，73%的螨特 乳油200倍～300倍液或20%扫螨净粉剂3000倍液处理（基质的含水量在40%～45%）。播种后保持基质的 湿润，5d～7d后发芽，在3月份左右，待酸枣长出2片～4片真叶后，作为砧木。 5.3嫁接方法 在室内嫁接，采用劈接法。将长出2片～4片真叶的酸枣切去生长点，留2片子叶，从2片子叶中间劈 开，将接穗插入其中，用封口膜缠绕对嫁接口进行保湿和固定处理。 5.4嫁接后管理 嫁接后置于温室内的小拱棚内，第1周室内湿度保持在70%～80%，基质湿度50%～60%，温度保持在 25℃～30℃，70%遮阴网在温室上方遮阴。1周后逐渐降低湿度，直至接穗发芽并长出2片新叶，降至湿 度至40%～60%，撤去小拱棚，70%遮阴网在温室上方继续遮阴8d～12d。嫁接1周后及时剪去嫁接口以下 酸枣发抽生的枣头；30d左右后可获得嫁接苗。 对温室大棚及小拱棚内的地表，用1:800倍的多菌灵溶液和甲基托布津溶液交替消毒。嫁接3d后喷1 次50%多菌灵800倍液，以后每5d为1周期用50%多菌灵800倍液和80%代森锰锌800倍液交替使用预防病害。 6炼苗 接穗发芽并长出2片新叶，隔周喷1次0.5%浓度的磷酸二氢钾，接穗长出8个～10个叶片，高度达15cm 左右，可直接在温室定植。在炼苗期间和苗期，主要虫害是螨虫和红蜘蛛，防治方法是用73%的螨特乳 7移栽 移栽时间在4月～6月，平整土地，每亩施腐熟优质鸡粪2000Kg～3000Kg，配施20Kg～30Kg的磷酸 二铵。地下覆膜，按0.3m×0.5m的株行距定植于种植蔬菜的茬地的温室中，需要70%遮阴网遮阴5d～7d， 3 DB64/T 1069--2015 保持土壤潮湿，温度在25℃～30℃，待苗发出新芽，可逐步降低士壤湿度，到正常苗木管理， 第2年春 天可移植于大田。 DB64/T 1069--2015 保持土壤潮湿，温度在25℃～30℃，待苗发出新芽，可逐步降低士壤湿度，到正常苗木管理， 第2年春 天可移植于大田。