ICS 65. 020 CCS B 15 DB53 云南省國地國方 标准 DB53/T 1426—2025 极小种群野生植物华盖木组培繁殖技术规 程 2025 － 06 － 07 发布 2025 － 09 － 07 实施 云南省市场监督管理局 发布 DB53/T 1426—2025 前言 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由云南省林业标准化技术委员会（YNTCO2）提出并归口。 本文件起草单位：中国科学院昆明植物研究所、云南交投生态环境工程有限公司。 本文件主要起草人：罗桂芬、孙卫邦、杨佳俊、葛佳、蔡磊、魏薇、钟艺。 I DB53/T 1426—2025 极小种群野生植物华盖木组培繁殖技术规程 1范围 本文件规定了极小种群野生植物华盖木（Manglietiastrum sinicum）组织培养的基本要求、外植 体采集与处理、诱导培养、增殖培养、壮苗与生根培养、炼苗移栽等技术要求。 本文件适用于极小种群野生植物华盖木组培繁殖。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 LY/T1882林木组织培养育苗技术规程 3术语和定义 LY/T 1882 界定的以及下列术语和定义适用于本文件。 3. 1 极小种群野生植物 plant species with extremely small populations 分布地域狭窄或呈间断分布、种群和个体数量少、人为干扰严重和随时有灭绝风险的野生植物。 3. 2 组织培养 tissue culture 在无菌条件下，将离体的植物器官、组织、细胞以及原生质体培养在人工培养基和人工控制的环境 中，使其再生新植株的过程和技术。 [来源：LY/T 1882，3.2] 3. 3 外植体explant 用于建立植物组织培养的离体植物器官、组织、细胞以及原生质体。 [来源：LY/T 1882，3.3] 3. 4 诱导培养 induction culture 将消毒后的外植体接种到特定培养基中，经过一段时间的培养，使之长出愈伤组织、顶芽、腋芽、 不定芽等的过程。 3. 5 增殖培养 multiplication culture 离体芽苗、愈伤组织或悬浮培养细胞不断倍增的培养过程。 3.6 生根培养 rooting culture 诱导无根离体芽苗产生根的培养过程。 3.7 瓶苗炼苗 bottle plantlet acclimatization 1 DB53/T 1426—2025 将组培苗连培养容器一起移至室外接近自然环境中培养，提高苗木的木质化程度，增强苗木对自然 光照和温差变化适应能力的过程。 3.8 移栽 transplant 将培养容器中长到适宜高度、具备合适根数与根长的生根苗，取出种植到基质中，使苗木逐渐适应 自然条件的过程。 4缩略语 下列缩略语适用于本文件。 MS：培养基发明人名字的缩写（Murashige and Sk og 6-BA：6-苄基腺嘌呤（6-benzyl adenine: IBA：吲哚-3-丁酸（indole-3- tyri IAA：吲哚-3-乙酸（indole-3 5基本要求 培养基配制、消毒、接种操作、 及培养室管理执行LY/T1882，其中 接种器械清洗与消毒、 接种 外植体消毒及诱导、增殖、生根等环节涉及的转接、 切分均应 于 工作台进行。 培养室培养条件：温度 23 3℃-30 ux Lux， 光照时间10 h/d。 淮化 6外植体采集与处理 6.1外植体选择 从生长旺盛、无病虫害植株的当 学年生枝条 采集带芽茎 段作为外植体， 并记录外植体母株、采集时 间和地点等信息。 标 6.2采集时间 2月～4月、9月～12月。 6.3保存与运输 采集的外植体宜当天消毒接种。若需长途运输，控制在3d内，75%酒精擦拭表面后，用干净的纸 巾包裹置于自封袋中，放置冰袋低温冷藏运输。 6.4 外植体消毒 消毒步骤如下： a) 剪去外植体上叶片，保留叶柄0.3cm～0.5cm，剪成1.5 cm～2 cm带芽的茎段，于1%的肥皂 液中浸泡10 min 后用流动的自来水清洗干净; b) 用 75%酒精消毒 8 s～10 s，无菌水冲洗3次后，用 0.1%氯化汞溶液消毒5 min～8min，再用 无菌水冲洗3次～5次。 ７ 诱导培养 2 DB53/T 1426—2025 7.1诱导培养基配方 MS+6-BA 0.5 mg/L～3.0 mg/L+IAA 1.0 mg/L+蔗糖 30 g/L+琼脂 5 g/L，pH5.8。MS 基本培养基母 液与6-BA、IAA等常用植物生长调节剂的配制和保存见附录 A、附录B，下同。 7.2 接种要求 将消毒外植体叶柄和茎段两端切去0.2 cm～0.5cm，按照芽生长方向朝上原则，竖直或者倾斜接 种于诱导培养基中，每个培养瓶接1个芽或者茎段，诱导腋芽和顶芽生长。 7.3褐化控制 14 d 内每天更换外植体在培养容器内接种的位置或者转接于新的培养基。 部 ８增殖培养 8.1增殖培养基配方 MS+6-BA 0. 0 mg/L～2. 0 mg/L+IAA 0 mg/L~1. 0 mg/L+蔗糖 30 g/L+琼脂5 g/L，pH5.8。 政 8.2 接种要求 淮化行 腋芽和顶芽生长至 2 cm 将其切成 段，接种于增殖培养基，增殖周 期50 d～60 d。 9 ，壮苗与生根培养 9.1 壮苗与生根培养基配方 MS+IBA 0. 1 mg/L~2. 0 g/L+琼脂5 g/L，pH5.8。 9.2壮苗与生根培养操作 增殖培养的茎段生长至 3 cm 4 cm时， 切下生长健壮、形态正常、带顶芽、长２ cm～3cm 的茎段 进行壮苗与生根培养。 10炼苗移栽 10.1 组培瓶苗质量要求 组培瓶苗应符合如下质量要求： a）植株生长健壮、叶形叶色正常，具2片～3片展开叶; a）株高3 cm～5 cm; b）根数量多于 2条，根长1 cm～2 cm。 10.2闭瓶炼苗 将组培瓶苗移植于遮光率60%～70%、湿度<50%的大棚内，闭瓶炼苗7d～10d，使组培苗适应自 然光照和叠夜温差。 3