ICS 65.020.20 B 21 DB45 广西壮族自治区地方标准 DB 45/T 1590—2017 带叶兜兰无菌播种繁育技术规程 Technical regulations for aseptic seeding and breeding of Paphiopedilu m hirsutissimum 2017 - 09 - 15 发布 2017 - 10 - 15 实施 广西壮族自治区质量技术监督局 发布 DB45/T 1590 — 2017 I 目 次 前言 ................................................................................ II 1 范围 .............................................................................. 1 2 规范性引用文件 .................................................................... 1 3 术语和定义 ........................................................................ 1 4 母株选择与授粉 .................................................................... 1 5 无菌播种繁育方法 .................................................................. 2 6 组培苗移栽 ........................................................................ 2 7 栽培管理 .......................................................................... 3 附录 A（资料性附录） 培养基配方 ...................................................... 4 附录 B（资料性附录） 带叶兜兰定期消毒方法及主要病虫害化学防治方法 .................... 5 DB45/T 1590 — 2017 II DB45/T 1590 — 2017 III 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由广西壮族自治区农业科学院提出。 本标准起草单位：广西壮族自治区农业科学院花卉研究所。 本标准主要起草人： 李秀玲、 卜朝阳、 黄昌艳、 黄凤玲、 邓杰玲、 宋倩、 周锦业、 崔学强、 张自斌。 DB45/T 1590 —2017 1 带叶兜兰无菌播种繁育技术规程 1 范围 本标准规定了带叶兜兰（Paphiopedilum hirsutissimum （Lindl ex Hook.）Stein）无菌播种繁育 的术语与定义、母株选择与授粉、无菌播种繁育方法、组培苗移栽、栽培管理。 本标准适用于广西境内带叶兜兰无菌播种繁育。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 8321（所有部分） 农药合理使用准则 NY/T 2306 花卉种苗组培快繁技术规程 3 术语和定义 NY/T 2306界定的以及下列术语和定义适用于本文件。 3.1 无菌播种繁育技术 aseptic seeding technique 又称为非共生萌发繁育技术， 是指将种子播种在人工培养基上， 不需要借助任何真菌侵染就可以使 兰花种子萌发，从而获得完整植株的现象，是兰科植物常规的繁殖方法。 3.2 原球茎 protocorm 兰花种子萌发过程中的一种形态学结构， 种子的幼胚吸水膨胀， 中部的胚细胞分裂增殖， 突破合点 端种皮形成球形或椭球形。 4 母株选择与授粉 4.1 母株的选择 选择品种纯正、植物学性状一致、农艺性状优良、生长健壮、无病虫害的植株。 4.2 授粉 待花盛开4 d～7 d内，移 除母株的花粉，去除母株唇兜或者将唇兜背部靠柱头处戳出洞，选择花型 较好的异株花朵作父本， 用牙签将父本花粉取出， 放在干净的纸张上， 再用牙签取适量花粉涂抹在母株 凹陷的柱头处。 DB45/T 1590 — 2017 2 5 无菌播种繁育方法 5.1 蒴果采收与表面灭菌 5.1.1 蒴果采收 人工授粉 后 120 d～ 180 d，在 蒴果八 成 熟且未开 裂 时采收 。 5.1.2 蒴果灭菌 将 蒴果 用自 来 水 洗净 ，中性 洗涤剂冲洗 ， 酒精搽拭 ， 流 水 冲 15 m in ，在 超净 工 作台 上用 7 0 ％～ 75 ％酒精灭 菌3 0 s ， 接着 用0 . 1 ％升汞溶液浸泡 15 m in ～ 20 m in， 无菌水 冲洗 5～ 6 次 ， 放置 在 接 种 盘 内。 5.2 培养基配方 各阶段 培养基配方 参见 附录A。 5.3 无菌播种与诱导培养 切开果荚 ，将 种子 均匀撒 在种子萌发 诱导 培养基上， 培养基 参见 附录 A.1 ； 用 灭 菌 处 理的 胶头滴 管 加入 1～ 2 滴 无菌水， 摇匀 ， 置 于无菌培养 室 中培养。 培养 室温度 23 ℃～ 27 ℃ ， 光 照强 度 1 000 lx ～ 2 000 lx， 光 周期 10 h～ 12 h ，培养 40 d～ 60 d。 5.4 原球茎继代增殖培养 将 原 球 茎接 种 到原 球 茎 增殖培养基上 进行 培养， 培养基 参见 附录A.2。 培养 室温度 23 ℃～ 27 ℃ ， 光 照强 度 2 400 lx ～ 3 200 lx， 光 周期10 h～ 12 h ，培养40 d～ 50 d，增殖 代数 5代 以内。 5.5 生根壮苗培养 将 具 有3 ～ 4片 叶、 叶 长 2.5 cm～ 3.5 cm 的 小 苗 转入 生 根 壮苗培养基上培养， 培养基 参见 附录A.3。 培 养 室温度 23 ℃～ 27 ℃ ， 光 照强 度 2 400 lx ～ 3 200 lx，培养周期30 d～ 40 d。 5.6 炼苗 小 苗 根长 2.5 cm～ 3.5 cm 、叶 片数 4～ 5片 、叶 长 4.5 cm～ 6.0 cm时 ， 搬至炼 苗 室 内 炼 苗。 炼 苗 室温度 26 ℃～ 30 ℃ ， 光 照强 度 5 000 lx， 炼 苗10 d～ 15 d后 ，移 至大棚闭盖炼 苗7 d， 开盖炼 苗1 d。 6 组培苗移栽 6.1 环境条件 温度 ：15 ℃～ 28 ℃ ， 空气相 对 湿度 ：70 ％～ 80 ％ ， 光 照强 度 ：5 000 lx ～ 8 000 lx。 6.2 基质 基 质透气 性 好 、 保 水 能力 强， p H 为 4.5 ～ 6.5。可用兰 石 和 松树 皮按 2 : 1的 体积比 配 制 ，兰 石粒径 0.4 cm～ 0.7 cm ， 树 皮 粒径 0.3 cm～ 0.6 cm 。移栽前 12 h～ 24 h 用 浓度 为0 . 2 ％～ 0.3 ％高锰酸钾 水 溶液 喷洒 消毒。