ICS 65.020.20 B 21 DB45 广西壮族自治区地方标准 DB 45/T 1588—2017 蝴蝶兰组织培养技术规程 Technical specification for tissue culture of Phalaenopsis spp. 2017 - 09 - 15 发布 2017 - 10 - 15 实施 广西壮族自治区质量技术监督局 发布 DB45/T 1588 — 2017 I 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由广西壮族自治区农业科学院提出。 本标准起草单位：广西壮族自治区农业科学院花卉研究所。 本标准主要起草人：何荆洲、卜朝阳、黄昌艳、闫海霞、王晓国、张自斌、邓杰玲。 DB45/T 1588 —2017 1 蝴蝶兰组织培养技术规程 1 范围 本标准规定了蝴蝶兰(Phalaenopsis spp.) 组织培养的基本条件、培养基的制备、组织培养方法、 培养环境、组培苗出瓶质量要求、污染防控以及生产技术档案等。 本标准适用于广西境内蝴蝶兰组培苗生产。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 NY/T 2306—2013 花卉种苗组培快繁技术规程 3 基本条件 组织培养所需的设施、设备、器材、试剂等基本要求，参照 NY/T 2306 的要求执行。 4 培养基的制备 4.1 母液配制 母液的配制参照 NY/T 2306—2013 中第 7 章要求配制。 4.2 培养基配制 不同生长阶段的培养基配方有所不同， 种子萌发培养基、 腋芽诱导培养基、 继代培养基、 壮苗培养 基和生根培养基的配方参见附录A。 4.3 培养基使用 培养基存放于干净无污染的环境中放置 1 周以上，无污染后再使用。 5 组织培养方法 5.1 外植体的选择 5.1.1 蒴果 选取授粉后 80 d～110 d(小型花品种)或 100 d～130 d（中、大型花品种），果皮黄绿色，未开裂 的蒴果。 DB45/T 1588 — 2017 2 5.1.2 花梗 农艺性状优良、生长健壮、无病虫害的盛花期植株的花梗。 5.2 灭菌 5.2.1 蒴果灭菌 将采集到的蒴果置流水下， 用软刷刷洗表皮， 饱和洗衣粉水浸泡 10 min， 期间不间断晃动， 清洗后 用自来水冲洗 30 min。在超净 工作台 上用 7 5％酒精擦拭 表皮，无 菌 水洗2 次 ，0.1 ％HgCl 2溶 液浸泡蒴 果2 5 min，无 菌 水洗3 次 。 5.2.2 花梗灭菌 把 花梗 剪成带一个苞片 的 节 段， 苞片 上下 各留 1. 5 c m～2 c m的 长 度 ，用饱和洗衣粉水浸泡 10 min， 用自来水冲洗 30 min。 75％酒精棉球擦拭 花梗表 面 ， 无 菌 水洗 2～3 次 ， 0.1 ％ HgCl 2 浸泡 20 min～30 min， 无 菌 水洗2 ～ 3 次 ， 剥去苞片 ，再用 0.1 ％HgCl 2 浸泡 8 min，无 菌 水洗 4 ～ 5次 。 5.3 诱导培养 5.3.1 用 手 术 刀剖 开蒴果， 将种子取出， 直接播 种于种子萌发培养基上， 暗 培养 3 d， 之 后 转光 照培养。 5.3.2 将 外 植 体 花梗 茎 段 接 种到腋芽诱导培养基上 进 行培养。 暗 培养 3 d， 之 后 转光 照培养。 5.4 继代培养 当 芽苗长 至 3 c m～6 c m， 切去叶片 ， 切成带 1个 腋芽的 茎 段， 接 种到继代培养基中。 光 照培养 45 d～ 60 d进 行下 一 继代 转接 。 5.5 壮苗培养 从茎 段 侧 芽培养的继代苗或种子无 菌播 种苗中 切 取3 c m～6 c m的单 个 芽苗，不 切叶片 ，不 打顶 ， 接 种于壮苗培养基中。 光 照培养 45 d～60 d。 5.6 生根培养 从 壮苗培养中选取 4 c m～6 c m的芽苗，不 切叶片 ，不 打顶 ， 接 种到生根培养基中。 光 照培养90 d以 上。 6 光照培养环境 培养 温度 ：22 ℃ ～28 ℃ ， 光 照 强度 1 5 00 lx ～3 5 00 lx ， 光 照 时 间10 h ～12 h 。 7 组培苗出瓶质量要求 蝴蝶兰组培苗无污染， 叶片数 3～ 4 片 ， 叶宽 1. 5 c m～2 c m； 根 数 2～ 4 条，根长1. 5 c m～ 4 c m，植株 生长 旺 盛。 DB45/T 1588 —2017 3 8 污染防控 组织培养过程中的污染防控参照NY/T 2306 第8章 进行。组织培养室每7 d使用艾草：苍术=2 :1（质 量 比 ）按0. 5 g/1 m2～1. 5 g /1 m2浓度进 行 熏蒸， 熏蒸时间 为 10 min～30 min。 熏蒸期间，所有人员 不 得 进入组织培养室，熏蒸完成1 d后， 通风无味，人员方可进入。 9 生产技术档案 建立生产技术管理档案（参见附录B），记录组培室温湿度情况、各项作业的实际 用工量和化 学试 剂、物品的购买使用情况等。技术档案要有专人记载，技术负责人审查后存档。 DB45/T 1588 — 2017 4 A A 附 录 A （资料性附录） 培养基配方 A.1 种子萌发培养基配方 1/2 MS ＋ 2.0 m g / L 6 - BA ＋ 100 m l / L椰汁＋ 30 g / L白糖 ＋ 4 .2 g / L琼脂 ， pH 5 . 5 ～ 5 .8。 A.2 腋芽诱导培养基配方 1/2 MS ＋ 10.0 m g / L 6 - BA ＋5 m g / L K T ＋ 100 m l / L 椰汁＋ 30 g / L 白糖＋4 .2 g / L 琼脂 ， pH 5 . 5 ～ 5 .8。 A.3 继代培养基配方 MS ＋ 3.0 m g / L 6 - BA ＋5 m g / L A d ＋ 1. 5 m g / L I BA ＋ 1 g / L 花 宝 1 号1) ＋ 0.2 5 g / L 善 存 ＋ 100 m l / L 椰汁 ＋ 30 g / L 白糖 ＋ 4 .2 g / L 琼脂 ， pH 5 . 5 ～ 5 .8。 A.4 壮苗培养基配方 1/3 MS＋ 1 g / L 花 宝 1 号＋ 1 g / L 花 宝 2 号1）＋ 2 g / L蛋白胨＋ 1. 5 g / L活 性 炭＋ 37 g / L香蕉＋ 7 5 g / L 土豆 ＋ 30 g / L白糖＋4 .2 g / L琼脂 ， pH 5 . 5 ～ 5 .8。 A.5 生根培养基配方 1/2 MS＋ 1 m g / L I BA ＋ 0. 5 m g / L N A A ＋ 1. 5 g / L 活 性 炭＋ 20 g / L 白糖＋4 .2 g / L 琼脂 ， pH 5 . 5 ～ 5 .8。 1) 注： “花宝 1 号” 和 “花宝 2 号” 是由 “HYPONeX ® ” 公司提供的产品的商品名， “善存” 是惠氏制药有限公司提 供的产品的商品名。给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品 具有相同的效果，则可以使用这些等效产品。