ICS 65.020.20 B 99 DB45 广西壮族自治区地方标准 DB 45/T 1532—2017 铁皮石斛种苗组培快繁技术规程 Technical regulations for rapid propagation of tissue culture seedlings of Dendrobium candidum 2017 - 05 - 10 发布 2017 - 06 - 10 实施 广西壮族自治区质量技术监督局 发布 DB45/T 1532 — 2017 I 目 次 前言 ................................................................................ II 1 范围 .............................................................................. 1 2 规范性引用文件 .................................................................... 1 3 术语和定义 ........................................................................ 1 4 场所要求 .......................................................................... 1 5 仪器设备及化学试剂 ................................................................ 2 6 组织培养生产流程 .................................................................. 2 7 建立生产档案 ...................................................................... 4 附录 A（规范性附录） 组培常用化学试剂 ................................................ 5 附录 B（规范性附录） Murashige 和 Skoog（MS）培养基配制 ............................... 7 参考文献 ............................................................................. 9 DB45/T 1532 — 2017 III 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由广西壮族自治区农业科学院提出。 本标准由广西壮族自治区农业厅归口。 本标准起草单位：广西壮族自治区农业科学院农产品加工研究所、南宁市元敬本草堂生物科技有 限公司。 本标准主要起草人：张娥珍、何全光、辛明、淡明、张向军、马荣刚、黄茂康、黄振勇。 DB45/T 1532 —2017 1 铁皮石斛种苗组培快繁技术规程 1 范围 本标准规定了铁皮石斛种苗组培快速繁育技术的术语与定义、场所要求、仪器设备及化学试剂、 组织培养生产流程、建立生产档案。 本标准适用于广西境内铁皮石斛种苗的组培快繁技术。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 3095—2012 环境空气质量标准 GB 4285（所有部分） 农药安全使用标准 GB 5084—2005 农田灌溉水质标准 《中华人民共和国药典》2015年版一部 国家药品监督管理局令[2012年第32号]《中药材生产质量管理规范》（试行） 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1 铁皮石斛蒴果 dendrobium candidum capsule 由合生心皮的复雌蕊发育成的果实，子房多室，每室有多粒种子，含大量无胚乳的淡黄色种子。 3.2 原球茎 protocorm 铁皮石斛种子在组培中诱导产生的球状原胚。 4 场所要求 4.1 环境条件 应有专 用的组培室, 组培室所使用的水源 应 符 合GB 5084—2005中 二级 标准要求， 达到去离子水标 准；组培室周围环境的空气质量应符合GB 3095—2012中 二级或以上要求。 4.2 组培室 4.2.1 周边环境 组培室周围环境必需干燥、洁净，不允许有垃圾或其他污染源，四周通风良好。 DB45/T 1532 — 2017 2 4.2.2 功能区划分 应分 更衣 室，配 料 室， 储存 室， 接 种室，培养室， 消毒灭菌 室， 隔离带等 。 4.2.3 功能区标准 各 区应 达到 其 相 应的 控 制 指 标， 更衣 室、培养基 储存 室、 接 种室、培养室 需达到 30 万级以上洁净 度 。 5 仪器设备及化学试剂 5.1 组培仪器 仪器设备应包括 灭菌 设备、培养设备和无 菌操作台 。 5.2 组培器具 组培所 需 的 玻璃 器 皿 及器材包括 盛装 器 皿 （ 烧杯 、试剂 瓶等 ）、 计 量器 皿 （量 筒 、 容 量 瓶等 ）、 接 种器 具 、组培 瓶等 。 5.3 常用试剂 常用化学试剂包括组培苗生产所用基本培养基所 需 的无 机盐类 和有 机 物 类 ，应 符 合附录A的要求。 6 组织培养生产流程 6.1 工艺流程 6.1.1 人员要求 组织培养 操作 人 员 应 身体健 康，无 传染 性 疾病 ，技 能娴熟 ， 进入 组培室前 需洗手换鞋 ， 经过缓冲 带后方 可 进入 。 操作时 不应 随意谈话 、 说笑 ， 以减 少 污染 。 6.1.2 操作准备 6.1.2.1 操作 人 员洗手后 ，用 7 5 ％ 的 酒精喷手 于 操作台 内 吹干 ， 勿双手互擦 。 更换拖鞋 、 穿白 大 褂 （ 或 接 种 服 ）， 戴上帽 、口 罩 。 6.1.2.2 接 种前应准备 好酒精灯或电热灭菌 器、 酒精或 新 洁尔灭 、无 菌脱脂棉或纱布以 及 接 种器 械 、 培养基、 接 种用苗 等 。 6.1.2.3 超净 工 作台 用7 5 ％ 的 酒精或 0.1 ％ 新 洁尔灭仔细擦 一 遍 ，提 前 3 0 m in 开机通风 ， 同时打开操 作间 、 更衣 室的 紫外灯 20 m in～ 30 m in ， 关掉紫外灯 15 m in～ 20 m in后 人 员才 可 进入 室内。 接 种器 械 用 棉布或纸 包 好 ，用 高压灭菌锅 在1 . 1 kg/ cm2～ 1.2 kg/ cm2下，121 ℃灭菌 20 m in～ 30 m in 。 6.1.3 接种 6.1.3.1 把消毒过 的培养 瓶摆放 在工 作台左边 ， 取 一 个消毒过 的 接 种 盘放 在 面 前， 取 一 瓶待接 的苗 瓶 ， 用 泡 了 酒精 的 纱棉或方巾擦拭瓶 子 外 部， 左手握瓶 ，培 养 瓶 要 拿 成 斜角 ， 右手持镊 子， 小 心 把 组培苗 夹 出， 放 在 接 种 盘里 。 6.1.3.2 放 下空 瓶 子， 换上解剖刀 ，一 手持刀 ，一 手持镊 ， 把 组培苗一 株 一 株 分 离 ， 把 多 余 的 杂 苗， 不成 形 的 原 球 杂茎 及 长根切割 分 开 。