ICS65.020.20 CCSB61 4413 惠州市地方标准 DB4413/T64—2025 橙黄玉凤花组织培养育苗技术规程 CodeofpracticeontissuecultureofHabenariarhodocheila 2025-05-31发布 2025-08-31实施 惠州市市场监督管理局  发布DB4413/T64—2025 I前言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由惠州市林业局提出并归口。 本文件起草单位：惠州市林业科学研究所（惠州植物园管理服务中心）、惠州市林学会。 本文件主要起草人：刘德浩、钟小华、何沁园、吴颖、郑洲翔、黄丽纯、陈智涛、孟蕊、舒夏竺、 巫添辉、江惠兰、卢永辉、李运龙、王少东、周小峰、刘健、张展鹏。DB4413/T64—2025 1橙黄玉凤花组织培养育苗技术规程 1范围 本文件规定了橙黄玉凤花（Habenariarhodocheila）组织培养育苗过程中外植体采集、外植体处理、 瓶苗培育、瓶苗移植、病虫害防治、档案管理等技术要求。 本文件适用于橙黄玉凤花组培苗培育。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T6001育苗技术规程 LY/T1882林木组织培养育苗技术规程 LY/T2752林木轻基质无纺布容器育苗技术规程 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 橙黄玉凤花Habenariarhodocheila 橙黄玉凤花(Habenariarhodocheila)是兰科玉凤花属多年生草本植物，块茎长圆形，茎具叶；叶线 状披针形或近长圆形，花茎无毛；花苞片卵状披针形，萼片和花瓣绿色，唇瓣红、橙红或橙黄色，花瓣 直立，匙状线形；蒴果纺锤形，有喙；花期7月～8月，果期10月～11月。 4外植体 4.1采集 需在连续3d晴天后采集成熟且未开裂的蒴果。 4.2消毒处理 用细毛刷清洁蒴果表面杂质，在超净工作台上用75%乙醇表面消毒20s～30s，无菌水冲洗1次～2 次；然后用添加1滴～2滴吐温80的0.1%HgCl2溶液浸泡并不断摇动12min，用无菌水冲洗4次～6次，用 灭菌过的滤纸吸干表面水分备用。 5瓶苗培育DB4413/T64—2025 25.1培养基 5.1.1配制 种子萌发培养基为1/2MS＋NAA0.5mg/L＋AC0.2%，增殖培养基为1/2MS＋NAA0.4mg/L＋ZT3.0 mg/L＋AC0.2%，生根培养基为1/2MS＋NAA0.2mg/L＋6-BA2.0mg/L＋AC0.2%，添加卡拉胶均为6g/L， 蔗糖均为30g/L，pH值调至5.8～6.0。培养基配方参见附录A。 5.1.2灭菌与存放 采用高压灭菌锅121℃持续20min灭菌后存放至超净工作台备用，按LY/T1882的规定执行。 5.2培养条件 应定期清洁培养室，及时清除污染材料。培养室温度26℃±2℃，相对湿度65%～70%，光照强度 1000lx～2000lx，日光照时长10h～12h。 5.3种子萌发培养 用无菌解剖刀将消毒处理好的蒴果纵向切开,将其内部的细粉状种子均匀地撒播于培养基上；待培 养20d～25d，种子开始出现膨大，形成白色的原球茎。 5.4增殖分化培养 将未分化的原球茎转接至增殖培养基上，培养20d～25d，原球茎分化出叶原基后长出叶片，形成 小苗；培养约35d，小苗基部生成丛生原球茎，进一步分化出丛生苗3株～10株。 5.5生根培养 选取2片以上舒展叶片、高1cm～1.5cm的芽苗，接种在生根培养基中诱导生根，每株苗长出1条～ 3条新根和1个～2个椭圆形或长圆形块茎。单株苗继续增殖成丛生苗，部分用于继代增殖，部分用于炼 苗种植。培养周期为30d～35d。 6炼苗移植 6.1基质与育苗袋 采用轻型基质（基质成分参照LY/T2752相关条款执行）或腐殖土作基质，以塑料薄膜袋或无纺布 袋等为育苗袋，规格为8cm×10cm。移植前2d对基质与育苗袋用50%的多菌灵可湿性粉剂1000倍液淋 透杀菌。 6.2炼苗 选取长出新根、球茎达0.2cm～0.5cm、叶片2片～3片的瓶苗移至炼苗棚内。炼苗10d～15d后将瓶 盖拧开，继续炼苗3d～5d。 6.3洗苗 将经过炼苗的瓶苗和培养基一起倒入清水中洗净，注意避免损伤根系。 6.4移植DB4413/T64—2025 3在基质中捅个小孔，小心将芽苗植入，用基质完全覆盖芽苗根部，不可大力按压基质以防伤苗；避 开夏季高温天气移植。 6.5苗期管理 6.5.1遮荫 移植后用透光度25%的遮阴网遮荫，45d后用透光度50%的遮阴网遮荫。 6.5.2水分 移植后即淋透水；后期做到见干见湿，保持基质湿润。 6.5.3养分 小苗移植10d后施薄肥，采用1g/L的复合肥（N2-P2O5-K2O=15-15-15）水溶液淋施，每7d～10d一 次；移植30d后，采用3g/L的复合肥（N2-P2O5-K2O=15-15-15）水溶液淋施，每10d～15d一次。 6.5.4除草 及时清除杂草。 7病虫害防治 7.1病害 苗期偶有根腐病危害，应及时清除病株，集中焚烧。用50%多菌灵可湿性粉剂1000倍液喷洒基质， 防止病原传播。 7.2虫害 苗期偶有卷夜蛾或金龟子危害嫩叶和球茎，少量危害时人工捕杀，并用黑光灯或糖醋液诱杀成虫。 8出圃 生长正常、无损伤、无病虫害、苗高≥10cm的幼苗可以出圃。 9档案管理 按GB/T6001相关条款执行。DB4413/T64—2025 4附录A （资料性） 橙黄玉凤花组织培养的培养基配方 橙黄玉凤花组织培养的培养基配方见表A.1。 表A.1橙黄玉凤花组织培养培养基配方 培养基成份种子萌发培养基（mg/L）增殖培养基（mg/L）生根培养基（mg/L） KNO3 950 950 950 NH4NO3 825 825 825 KH2PO4 85 85 85 CaCl2·2H2O 220 220 220 MgSO4·7H2O 185 185 185 FeSO4·7H2O 13.9 13.9 13.9 Na2-EDTA 18.65 18.65 18.65 MnSO4·4H2O 11.15 11.15 11.15 ZnSO4·7H2O 4.3 4.3 4.3 H3BO3 3.1 3.1 3.1 KI 0.415 0.415 0.415 Na2MoO4·2H2O 0.125 0.125 0.125 CuSO4·5H2O 0.0125 0.0125 0.0125 CoCl2·6H2O 0.0125 0.0125 0.0125 甘氨酸 1 1 1 VB1 0.05 0.05 0.05 VB6 0.25 0.25 0.25 VB3 0.25 0.25 0.25 肌醇 50 50 50 蔗糖 30000 30000 30000 琼脂粉 5000 5000 5000 NAA 0.5 0.4 0.2 ZT — 3.0 — 6-BA — — 2.0 AC 0.2% 0.2% 0.2%