备案号： 25025—2009 江西省地方标准DB36 DB36/T 557—2009 金边瑞香脱毒快繁技术规程 The technical regulation for Virus Removal and Rapid Propagation of Daphne odora var.maginata 2009-04-10 发布 2009-05-01 实施 江西省质量技术监督局 发布 DB36/T 557—2009 I 目 次 前言 ............................................................. .................... II 1 范围 ............................................................. ................... 1 2 规范性引用文件 ........................................................ .............. 1 3 脱毒试管苗无性系的建立 .................................................... .......... 1 4 试管苗移植 .......................................................... ................ 2 5 上钵 ............................................................. ................... 2 6 苗木分级 ........................................................... ................. 2 7 检疫 ............................................................. ................... 2 DB36/T 557—2009 II 前 言 本标准由江西省林业厅提出并归口。 本标准起草单位：江西省科学院生物资源研究所、江西省大余县花卉生产办公室、江西省林业科技 推广总站。 本标准主要起草人：江洪如、金晓鹏、朱祺、李新、彭军、钟东洋、余发新、毛新琳、吕新、王碧 琴、刘腾云、高柱。DB36/T 557—2009 1 金边瑞香脱毒快繁技术规程 范围 本标准规定了金边瑞香茎尖诱导培养、脱毒组培苗无性系的建立、脱毒试管苗的移栽、脱毒盆苗培 养及苗的分级、包装、检疫等。 本标准适用于江西省金边瑞香脱毒快繁。 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的 修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB 6001-1985 育苗技术规程 GB/T 18247.2-2000 主要花卉产品等级 第2部分:盆花 《植物检疫条例》 《植物检疫条例实施细则》 《中华人民共和国进出境动植物检疫条例实施细则》 脱毒试管苗无性系的建立 培养基的配置 配置 MS 基本培养基。 将每升 0.6%琼脂条溶化。 按培养的要求分别加入所需的激素种类和浓度。 将上述 3 项混合定容并搅匀。 将配好的培养基的 pH 值调为 5.7～5.8。 装瓶，瓶的大小 220ml左右，每瓶装培养基 35.5ml。 封好瓶口后，放进灭菌锅内进行高压灭菌；灭菌的压力为 0.09MPa，时间为 25min。 脱毒 外植体处理 选择生长健壮的金边瑞香枝条作为脱毒组培苗的外植体。将嫩芽在自来水下洗净，用0.1%升汞溶液 浸泡12min， 无菌水冲洗4～5次，无菌滤纸吸干水分，切下顶芽，然后在超净台中双筒显微镜下剥离 0.2mm～0.3mm的茎尖，接种到预先准备好的诱导培养基中，每瓶接种5个。茎尖诱导培养需50d～70d。 茎尖的诱导培养及脱毒检测 由单个茎尖诱导获得的单芽分别转入MS+6-BA0.5 -1mg/L+NAA0 .1mg/L的培养基中培养， 待长成2cm～ 3cm高的试管苗，将茎苗再切成带有一个节的基段，继续在原培养基上培养，然后将来自不同茎尖生长点的试管苗若干株进行脱毒检测，脱去 5种病毒的苗可作为脱毒苗进行快速繁殖。 试管苗的无性系培养 接种 在超净工作台上，取出试管苗，切下顶芽以及带有2～3个节的下部茎段，然后按芽和茎段分别接入 转代增殖培养基中，每瓶放8个材料；苗直径大于1.0mm以上 的试管苗，切下1.5cm～2cm高的苗则接入生 根培养基中，每瓶6个。