ICS 65.020.20 B 05 DB36 江 西 省 地 方 标 准 DB 36/T 1770—2023 茶树菇液体菌种生产技术规程 Technical regulation of production of liquid spawn for cyclocybe cylindracea 2023 - 04 - 07发布 2023 - 10 - 01实施 江西省市场监督管理局 发 布 DB36/T 1770 —2023 1 I 目 次 前 言 .............................................................................. II 1 范围 .............................................................................. 1 2 规范性引用文件 .................................................................... 1 3 术语和定义 ........................................................................ 1 4 生产厂房和设备 .................................................................... 1 5 生产原料 .......................................................................... 2 6 母种扩繁 .......................................................................... 2 7 摇瓶液体菌种生产 .................................................................. 2 8 发酵罐液体菌种生产 ................................................................ 3 9 液体菌种贮存 ...................................................................... 4 10 记录和存档 ....................................................................... 4 DB36/T 1770 —2023 II 前 言 本文件按照 GB/T 1.1-2020 《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》 规定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由江西省农业农村厅提出并归口。 本文件起草单位：江西农业大学、江西天和食用菌开发有限公司。 本文件起草人：霍光华、朱宏杰、余福生、邱桂根、崔朝宇、霍达、陈绪涛。DB36/T 1770 —2023 1 1 茶树菇液体菌种生产技术规程 1 范围 本文件规定了茶树菇 (Cyclocybe cylindracea )液体菌种生产的术语和定义、生产厂房和设备、生产 原料、母种扩繁、摇瓶液体菌种生产、发酵罐液体菌种生产、液体菌种贮存、记录和存档等技术内容。 本文件适用于茶树菇液体菌种的生产。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。凡是注日期的引用文件， 仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于 本文件。 GB 150.2 压力容器 第2部分：材料 GB 5749 生活饮用水卫生标准 GB/T 12728 食用菌术语 GB 50073 洁净厂房设计规范 NY/T 2375 食用菌生产技术规范 3 术语和定义 GB/T 12728 中界定的术语和定义适用于本文件。 3.1 液体菌种 liquid spawn 用于生产和销售的菌丝体及其生长基质组成的液体繁殖材料， 包括摇瓶液体菌种、 发酵罐液体菌种。 4 生产厂房和设备 4.1 场址选择 液体菌种生产厂房设计应符合 GB 50073 的规定。液体菌种生产场址应建在交通方便，水源和电源 充足，无有害气体、烟雾、灰沙，远离垃圾场、畜禽场舍等有污染的地方，且道路路面硬化、排水良好。 4.2 生产厂房布局和要求 生产厂房布局应满足以下要求： a) 生产厂房车间应符合 NY/T 2375 要求； b) 液体菌种生产车间应包括配料间、灭菌室、冷却室、接种室、培养室、发酵室、化验室、菌种 室等，并配备相应设施设备； DB36/T 1770 —2023 2 c) 地面要求防水、防滑、防腐蚀、防渗漏、易清洗； d) 墙壁和天花板应能防水、防潮、防霉、易清洗； e) 厂房安装排水管道或者排风设备，配置封闭式废物桶，有适当的排水坡度（ 1.0%~1.5% ）和良 好的排水系统，排水沟应是圆弧似的明沟； f) 厂房车间入口处应设置洗手消毒和干手设施。 4.3 生产设备 生产设备包括不限于以下内容： a) 液体菌种发酵罐、显微镜、磁力搅拌机、空气压缩机、高效空气过滤器、液体菌种接种器、高 压蒸汽灭菌锅、蒸汽锅炉、净化工作台、恒温摇床、恒温培养箱、除湿机、玻璃三角瓶、玻璃 平皿； b) 液体菌种发酵罐、高压蒸汽灭菌锅和蒸汽锅炉应符合 GB 150.2 的规定； c) 高效空气过滤器：对粒径 0.1μm~0.2μm 粒子的补集效率在 99.99%以上； d) 玻璃三角瓶容积 500ml、1000 ml，两者均耐 121℃高温灭菌。 5 生产原料 培养基质、化学投入品应符合 NY/T 2375 要求，生产用水应符合 GB 5749 要求且水不溶物物料需 过140目筛。 6 母种扩繁 母种选用茶树菇试管种扩繁， 即选取保存在试管斜面的茶树菇菌块转接至 PDA平板中央， 26℃±1℃ 条件下培养，接近长满平板时，从培养箱中取出作为摇瓶生产的菌种。 7 摇瓶液体菌种生产 7.1 培养基配方 马铃薯20%、葡萄糖 2%、牛肉膏 0.2%、蛋白胨 0.1%、KH2PO4 0.1%、MgSO 4 0.1%、余量为水， pH 自然。 7.2 培养基制作 培养基制作流程如下： 1) 分装：将配制好的 200ml培养基加入 500ml的玻璃三角瓶中，或 400ml培养基加入 1000ml的 玻璃三角瓶中。 2) 灭菌：装有培养基的三角瓶立即用封口膜（耐高温组培封口膜）封口，后置于灭菌锅中灭菌， 灭菌条件： 0.1Mpa、121℃灭菌25min。 3) 冷却：灭菌后的培养基置于干净冷却室内冷却至室温（ ≤28℃）。 7.3 接种 在超净工作台上使用直径 7 mm的打孔器在平皿菌丝生长旺盛处打孔，后用无菌接种铲接种于三角 瓶培养基中，立即封口避免杂菌污染。 DB36/T 1770 —2023 3 7.4 培养 7.4.1 培养：将接种后的三角瓶置于摇床上振荡培养，转速为 160 rpm，26±1℃下培养7d。 7.4.2 培养期检查：摇瓶培养期间应定期检查，及时剔除污染杂菌的三角瓶。 8 发酵罐液体菌种生产 8.1 前期准备 8.1.1 空气过滤器检查和灭菌 8.1.1.1 检查：使用前应检查空气过滤器滤芯，要求无油污、料污、无破损，外壳内外壁要求无污物、 光洁亮净。 8.1.1.2 灭菌：检查完后空气过滤器应高压蒸汽灭菌，灭菌条件： 0.20Mpa~0.30Mpa 、温度达 125℃时， 高压蒸汽灭菌 3h。 8.1.2 发酵罐检查和灭菌 8.1.2.1 检查：检查罐上的所有阀门，安全阀、压力表、要求完好，工作正常。 8.1.2.2 清洗：对罐体内、外和所有阀门用流水进行冲洗，达到无死角、内壁无任何培养料残余物的 洁净程度。 8.1.2.3 空消：发酵罐初次使用、出现染菌、长期放置、更换品种时，都要求使用外源蒸汽进行灭菌； 灭菌条件：发酵罐罐体内压力 0.120Mpa~0.140Mpa 、温度达 125℃时高压蒸汽灭菌 3h。 8.2 培养基制作 8.2.1 配方 培养基配方如下： a) 配方I：玉米粉 3%、豆柏粉 0.3%、KH2PO4 0.05% 、MgSO4 0.15% 、余量为水， pH自然； b) 配方II： 豆柏粉0.8%、 白砂糖2.5%、 胡萝卜粉 2%、KH2PO40.1% 、MgSO40.05% 、 消泡剂0.002%、 余量为水， pH自然。 8.2.2 投料 将配置好的液体培养基原料充分溶解，加适量温水搅拌均匀，倒入或用泵抽入发酵罐中，加水定容 至所需体积（液体培养基占罐体体积的 60%~70% ），密封上料口。 8.2.3 实消 采用外源蒸汽对投料后的发酵罐进行实消。发酵罐罐体内压力 0.20 Mpa~0.30 Mpa 、温度125℃时， 容积700 L发酵罐灭菌 3 h（其他型号罐体灭菌时间视灭菌效果作相应调整）。 8.