ICS65.020.20 B21DB14 山 西 省 地 方 标 准 DB14/T 630 —2015 代替DB14/T 630-2011 马铃薯脱毒试管苗（薯）繁育技术规程 2015 - 11 - 30 发布 2015 - 12 - 30实施 山西省质量技术监督局 发 布2022年10月14日确认有效DB14/T 630 —2015 I目  次 前言..................................................................................................................................................................... II 1 范围 ................................................................................................................................................................. 1 2 规范性引用文件 ............................................................................................................................................. 1 3 术语、定义和缩略语 ..................................................................................................................................... 1 4 生产设施、仪器设备、试剂和培养基 ......................................................................................................... 2 5 MS培养基和植物生长调节剂母液配制 ........................................................................................................ 3 6 脱毒技术 ......................................................................................................................................................... 4 7 脱毒试管苗扩繁 ............................................................................................................................................. 6 8 试管薯诱导 ..................................................................................................................................................... 7DB14/T 630 —2015 II前  言 本标准按 GB/T 1.1 —2009给出的规则起草。 本标准代替 DB 14/T 630— 2011《马铃薯脱毒试管苗（薯）繁育技术规程》，与 DB 14/T 630 —2011 相比差异如下： ——增加了脱毒核心试管苗、脱毒基础试管苗的定义，修改了脱毒试管苗的定义。 ——增加了风淋室、臭氧消毒机等设施及仪器设备。 ——增加了臭氧环境净化内容，并对6.5内容进行了调整。 ——修改了病毒检测方法、种性鉴定方法、污染苗处理方法。 本标准由山西省农业厅提出并归口。 本标准起草单位：山西省薯类脱毒中心、山西省农业科学院高寒区作物研究所、山西汾水源薯业科 技有限公司。 本标准主要起草人：姬青云、杜珍、王拴福、田肉虎、穆艳娥、姚鹏、齐海英、柴生武、杜培兵、 邓利爱、张东红、石维山、冀晓慧。 本标准2011年12月首次发布，本次为第一次修订。DB14/T 630 —2015 1马铃薯脱毒试管苗（薯）繁育技术规程 1 范围 本标准规定了马铃薯脱毒试管苗（薯）繁育的术语、定义和缩略语，生产设施、仪器设备、试剂和 培养基， MS培养基和植物生长调节剂母液的配制，脱毒技术，试管苗扩繁和试管薯诱导等内容。 本标准适用于山西省马铃薯脱毒试管苗（薯）的繁育。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 7331 马铃薯种薯产地检疫规程 GB 18133 马铃薯种薯 GB 20464 农作物种子标签通则 GB/T 28660 马铃薯种薯真实性和纯度鉴定 SSR 分子标记 NY/T 401 脱毒马铃薯种薯（苗）病毒检测技术规程 NY/T 1962 马铃薯纺锤块茎类病毒检测 NY/T 1963 马铃薯品种鉴定 NY/T 2678 马铃薯 6种病毒的检测 RT—PCR NY/T 2744 马铃薯纺锤块茎类病毒检测技术 核酸斑点杂交法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 试管苗 plantlet 应用植物组织培养技术在封闭容器内繁殖的种苗。 3.2 脱毒核心试管苗 core plantlet 应用茎尖分生组织培养技术获得的，不带 PVX、PVY、PVS、PVA、PVM、PLRV和PSTVd，经 鉴定具有原品种特征特性的试管苗。 3.3 脱毒基础试管苗 basic plantlet 由脱毒核心试管苗繁殖的、用于保存和大量扩繁的无病毒试管苗。DB14/T 630 —2015 23.4 脱毒试管苗 in-vitro Virus free plantlet 由脱毒基础试管苗大量扩繁的、用于繁育试管薯和原原种的无病毒试管苗。 3.5 脱毒试管薯 Microtuber 无菌条件下，在封闭培养容器内用脱毒试管苗诱导形成的小块茎。 3.6 原原种 pre-elite 用脱毒试管苗或脱毒试管薯在防虫网室（棚）等严格隔离条件下，采用无土栽培技术生产的、经质 量检测达到 GB 18133 相应要求，用于原种生产的微型薯。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 PVX：马铃薯 X病毒（ Potato virus X ） PVY：马铃薯 Y病毒（ Potato virus Y ） PVS：马铃薯 S病毒（ Potato virus S ） PVM：马铃薯 M病毒（ Potato virus M ） PVA：马铃薯 A病毒（ Potato virus A ） PLRV：马铃薯卷叶病毒（ Potato leaf roll virus ） PSTVd：马铃薯纺锤块茎类病毒（ Potato spindle tuber viroid ） DAS-ELISA ：双抗体夹心酶联免疫吸附测定（ Double Antibody Sandwich ELISA ） R-PAGE：双向聚丙烯酰胺凝胶电泳法（ Return Polyacrylamide Gel Electrophoresis ） RT-PCR：反转录-聚合酶链式反应（ Reverse Transcription-PCR ） NASH：核酸斑点杂交（ Nucleic Acid Spot Hybridization ） MS：MS培养基（ Murashige & Skoog(1962) ） 6-BA：6-苄胺基嘌呤（ 6-Benzylaminopurine ） CCC：矮壮素（ Chlormequat Chloride ） IBA：吲哚丁酸（ Indole-3-Butyric Acid ） KT：激动素（ Kinetin） IAA：吲哚乙酸（ Indole-3-Acetic Acid ） B9：丁酰肼（ Daminozide ） AR：分析纯 （ Analytical Reagent ） 5 生产设施、仪器设备、试剂和培养基 5.1 生产设施 风淋室、更衣室、洗涤室、配制室、灭菌室、仪器室、接种室（无菌操作室）、组培室、检测室。DB14/T 630 —2015 35.2 仪器设备配置 5.2.1更衣室：紫外线灯、更衣柜、消毒柜、洗手池、工作服、接种服、工作帽、口罩、拖鞋或鞋套 等。 5.2.2洗涤室：紫外线灯、试验台、洗涤池、洗瓶机、晾瓶架、蒸馏水器、洗涤用具、周转箱等。 5.2.3配制室：试验台、电子天平、 pH计、磁力搅拌器、电冰箱、蒸煮锅、培养基制备机、定量灌装 机、紫外线灯、烧杯、量筒、移液管、玻璃搅拌棒、容量瓶、试剂瓶、分注器等。 5.2.4灭菌室：鼓风干燥箱、压力蒸汽灭菌器、微波炉、紫外线灯等。 5.2.5仪器室：光照培养箱、人工气候箱、冰箱等。 5.2.6接种室：臭氧消毒机、移动式空气自净器、空调、超净工作台、体视显微镜（双筒解剖镜）、 数显接种器械灭菌器、白瓷盘、酒精灯、培养皿、解剖刀（手术刀）、解剖针、接种针、长