ICS 65.020.01 CCS B 16 15 内蒙古自治区 地方 标准 DB15/T 4106—2025 马铃薯黑胫病室内抗性鉴定技术规程 Code of practice technical for indoor evaluation of potato resistance to bla ck leg disease 2025-07-10发布 2025-08-10实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发布 DB15/T 4106 —2025 I 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由内蒙古自治区果蔬标准化技术委员会（ SAM/TC 25 ）归口。 本文件起草单位：内蒙古农业大学、内蒙古自治区农牧业科学院、准格尔旗农牧局。 本文件主要起草人：孙平平、李正男、张磊、席先梅、雷雪峰、黄秀梅、杨永青、廉勇、付崇毅、 霍宏丽、张溪、王金泉、牟英男、吴若晨。 DB15/T 4106 —2025 1 马铃薯黑胫病室内抗性鉴定技术 规程 1 范围 本文件规定了马铃薯黑胫病室内抗性鉴定的术语和定义、培养基制备、接种体制备、接种、病情调 查和抗病性评价等内容。 本文件适用于马铃薯品种在室内条件下对黑胫病抗性水平的鉴定。 2 规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件。 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 培养基制备 LBA培养基（病原细菌生长固体培养基）： 5 g酵母提取物， 10 g胰蛋白胨， 10 g氯化钠， 15 g琼脂 粉，1000 mL去离子水， 121 ℃灭菌15 min。 LB液体培养基（病原细菌生长液体培养基）：不加琼脂粉，其余同 LBA的制作方法。 5 接种体制备 病原物分离 取马铃薯黑胫病感病植株，采用组织分离结合单孢分离法从发病部位分离病原物，柯赫氏法则确定 致病菌，形态学、生理生化特性和分子序列对致病菌株进行鉴定，确定为马铃薯黑胫病病原菌 Pectobacterium atrosepticum ，保存备用。 菌悬液的 制备 取100μL在-80 ℃保存的分离病原菌涂抹于 LBA培养基上， 28 ℃培养48 h。挑取菌落于 100 mL LB 液体培养基中，置于 28 ℃、180 r/min 培养48 h，用无菌水调节菌悬液浓度至 106cfu/mL。 鉴定材料准备 选择形态完好、无明显伤病的马铃薯种薯，种植在装有无菌的细沙与腐殖土等量混匀的盆中，出苗 后在温室环境下生长。采用随机排列盆栽，待 马铃薯植株高约 10 cm用于接种 。 6 接种 DB15/T 4106 —2025 2 用无菌牙签在距土壤表面约 5 cm处戳伤植株的茎 部，吸取 10 μL菌悬液，注射于马铃薯植株茎部伤 口中，以接种等量 LB培养基的处理作为对照，每个品种处理 10株，重复 3次，将接种植株 置于25 ℃～ 28 ℃和90%以上湿度环境条件下培养。 7 病情调查 接种7天后，以接种点为中心测定上下各 5 cm范围内的发病面积占调查面积的比率进行分级和抗性 评价。 8 抗病性评价 计算抗病等级平均值，以抗病等级平均值评价抗病性： —— 调查范围内无病状发生，抗病等级为高抗（ HR）； —— 发病面积占调查面积 25%以下，抗病等级为抗病（ R）； —— 发病面积占调查面积 25%～50%，抗病等级为中抗（ MR）； —— 发病面积占调查面积 50%～75%，抗病等级为中感（ MS）； —— 发病面积占调查面积 75%～100%，抗病等级为高感（ HS）。