ICS71.100.70 CCSY42 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T5706—2023 化妆品微生物检验方法 大肠埃希氏菌检验 Cosmeticsmicrobiology—Detectionofescherichiacoli 2023-12-29发布 2024-07-01实施 中华人民共和国海关总署发布前 言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本文件起草单位:中华人民共和国广州海关、中华人民共和国深圳海关、中华人民共和国厦门海关、 中华人民共和国烟台海关。 本文件主要起草人:凌莉、涂晓波、彭小莉、黄成栋、董洁、袁慕云、冼钰茵、刘婧文、陈碧玲、廖荣军、 陈梦琪、席静、段效辉。 ⅠSN/T5706—2023化妆品微生物检验方法 大肠埃希氏菌检验 1 范围 本文件描述了化妆品中大肠埃希氏菌的定性检验方法。 本文件适用于化妆品中大肠埃希氏菌的检验。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 SN/T5075 化妆品微生物检验制样规范 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 方法提要 本方法利用大肠埃希氏菌具有β-葡萄糖醛酸苷酶的活性,能分解5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-葡萄糖醛 酸苷,在胰蛋白胨胆盐X-葡萄糖醛酸苷琼脂平板上形成蓝绿色菌落,对其进行定性检验。 注:本方法不适用于少部分β-葡萄糖醛酸苷酶阴性的大肠埃希氏菌,如O157。 5 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下。 5.1 恒温培养箱:36℃±1℃。 5.2 恒温装置:48℃±2℃。 5.3 冰箱:2℃~8℃。 5.4 均质器或乳液分散机(转速1000r/min以上)。 5.5 电子天平:感量0.1g。 5.6 无菌锥形瓶:250mL或300mL。 5.7 无菌吸管:10mL(具0.1mL刻度)。 5.8 无菌培养皿:直径90mm。 5.9 无菌均质袋或均质杯。 5.10 无菌接种环:10μL(直径约3mm)。 5.11 pH计或精密pH试纸。 5.12 质控菌株:大肠埃希氏菌ATCC25922或CGMCC1.2385或等效菌株作为阳性对照;弗氏柠檬酸 1SN/T5706—2023杆菌ATCC43864或CICC10296或等效菌株作为阴性对照。 6 培养基和试剂 6.1 大豆酪蛋白卵磷脂吐温80(SCDLP)液体培养基:按A.1。 6.2 胰蛋白胨胆盐X-葡萄糖醛酸苷(TryptoneBileX-glucuronide,TBX)琼脂:按A.2。 7 检验程序 7.1 化妆品中大肠埃希氏菌检验程序 化妆品中大肠埃希氏菌的检验程序见图1。 图1 化妆品中大肠埃希氏菌检验程序 7.2 样品前处理和稀释 待测的样品应在室温下保存,不要温育、冷藏和冷冻样品。样品的制样处理按SN/T5075的规定 执行。 7.3 增菌培养 吸取1∶10稀释的样品匀液10mL接种到90mLSCDLP增菌液中,置于36℃±1℃培养箱培养 18h~24h。 7.4 分离培养 用无菌接种环挑取一环增菌培养液,划线接种于TBX平板培养基,倒置于36℃±1℃培养箱培养 18h~24h。在TBX平板培养基上出现蓝绿色菌落者,判断为大肠埃希氏菌阳性。 8 结果报告 TBX平板培养基上有蓝绿色菌落,报告每克(毫升)样品中检出大肠埃希氏菌。否则,报告每克(毫 升)样品中未检出大肠埃希氏菌。 2SN/T5706—2023附 录 A (规范性) 主要培养基和试剂 A.1 大豆酪蛋白卵磷脂吐温80(SCDLP)液体培养基 A.1.1 成分 酪蛋白胨 17.0g 大豆蛋白胨 3.0g 氯化钠 5.0g 磷酸氢二钾 2.5g 葡萄糖 2.5g 卵磷脂 1.0g 吐温80 7.0g 蒸馏水 1000mL A.1.2 制法 先将卵磷脂在少量蒸馏水中加温溶解后,再与其他成分混合,加热溶解,每瓶90mL,于121℃高压 灭菌15min。注意振荡,使沉淀于底层的吐温80充分混合,冷却至25℃左右使用。灭菌后的培养基 在25℃时的pH为7.2±0.2。 A.2 胰蛋白胨胆盐X-葡萄糖醛酸苷(TBX)琼脂 A.2.1 成分 胰蛋白胨 20.0g 3号胆盐 1.5g 5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-葡萄糖醛酸苷(BCIG) 75.0mg 琼脂 8.0g~18.0g 蒸馏水 1000mL A.2.2 制法 在2.5mL95%的乙醇中加入0.5mL1mol/L的氢氧化钠溶液,然后加入BCIG的环己胺氢溴酸 盐并混匀,与其他成分一并加入蒸馏水。或者将BCIG的钠盐,与其他成分一并加入蒸馏水。加热至完 全溶解,必要时调节pH。121℃高压灭菌15min,灭菌后培养基在25℃时的pH为7.2±0.2。灭菌后 的培养基可在冰箱2℃~8℃密封避光保存不超过1个月。SN/T5706—2023