̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э ICS67.050 CCS X04 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T5655.8—2023 商品化试剂盒检测方法 预包装食品致敏原免疫分析法 第8部分:腰果 Commercial kit test method— Immunoassay of food allergens in prepackaged foods— Part 8: Cashew 2023-11-01发布 2024-05-01实施 中华人民共和国海关总署发布̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э ̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件为SN/T 5655 《商品化试剂盒检测方法 预包装食品致敏原免疫分析法》的第8部分。 SN/T 5655已经发布了以下部分: ———第1部分:麸质; ———第2部分:甲壳纲类动物; ———第3部分:蛋类; ———第4部分:花生; ———第5部分:大豆; ———第6部分:乳; ———第7部分:扁桃仁; ———第8部分:腰果; ———第9部分:榛子; ———第10部分:巴西坚果; ———第11部分:夏威夷果; ———第12部分:开心果; ———第13部分:胡桃。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本文件起草单位:拱北海关技术中心、中华人民共和国广州海关、珠海粤港食品安全检测有限公司。 本文件主要起草人:姚丽锋、刘津、王小玉、周昱晨、张晴阳、冯家望、游淑珠、黄成栋、梁颖婕、周 青敏。 ⅡSN/T5655.8—2023̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э ̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 引 言 食品致敏原是普通食品中正常存在的天然或人工添加物质,被过敏体质人群消耗后能够诱发过敏 反应。SN/T 5655《商品化试剂盒检测方法 预包装食品致敏原免疫分析法》规定了预包装食品中致敏 原成分的酶联免疫吸附定量检测和胶体金免疫层析定性检测方法,旨在满足预包装食品致敏原标识、生 产质控和食品安全检验监管的检测需求。 SN/T 5655《商品化试剂盒检测方法 预包装食品致敏原免疫分析法》拟由下列13个部分构成。 ———第1部分:麸质。 ———第2部分:甲壳纲类动物。 ———第3部分:蛋类。 ———第4部分:花生。 ———第5部分:大豆。 ———第6部分:乳。 ———第7部分:扁桃仁。 ———第8部分:腰果。 ———第9部分:榛子。 ———第10部分:巴西坚果。 ———第11部分:夏威夷果。 ———第12部分:开心果。 ———第13部分:胡桃。 ⅣSN/T5655.8—2023̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э ̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 商品化试剂盒检测方法 预包装食品致敏原免疫分析法 第8部分:腰果 1 范围 本文件规定了预包装食品中腰果致敏原酶联免疫吸附和胶体金免疫层析测定方法。 第一法酶联免疫吸附法适用于预包装食品中腰果致敏原成分的定量检测。 第二法胶体金免疫层析法适用于预包装食品中腰果致敏原的定性检测,也适用于预包装食品生产 过程中为监控腰果致敏原目的对生产原料和环境采样的定性检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 AOAC Guidelines for Collaborative Study Procedures to Validate Characteristics of a Method of Analysis. Appendix M: Validation procedures for quantitative food allergen ELISA methods: com- munity guidance and best practices 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 腰果 cashew 漆树科腰果属腰果树(Anacardium occidentale L.)所产坚果。 注: 别名鸡腰果、介寿果。 3.2 酶联免疫吸附测定 enzyme-linked immunosorbent assay;ELISA 可溶性抗原或抗体结合到微孔板等固相载体上,基于免疫反应和酶催化显色的一种定性或定量检 测方法。 3.3 胶体金免疫层析 colloidal gold immunochromatography assay;GICA 以胶体金作为示踪标志物的一种免疫层析检测技术。 注: 通常为试纸条形式。 1SN/T5655.8—2023̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 第一法 酶联免疫吸附法 4 原理 利用抗原-抗体特异性结合反应,对样品中腰果致敏原含量进行酶联免疫吸附测定。样品中游离的 腰果蛋白被微孔中预包被的腰果特异性抗体捕获,形成抗原-抗体复合物。加入过氧化物酶标记抗体 后,形成酶标记抗体-抗原-抗体夹心复合物,其他物质在洗涤步骤被除去。加入底物/发色剂呈显色反 应。通过测定450 nm波长下吸光度值得到样品中腰果致敏原含量。样品中腰果致敏原含量与吸光度 值成正比。 5 试剂和材料 除特别说明外,实验用水应符合GB/T 6682规定的三级水,所有试剂均为分析纯。 5.1 腰果致敏原酶联免疫吸附检测试剂盒:试剂盒按照AOAC Guidelines for Collaborative Study Procedures to Validate Characteristics of a Method of Analysis Appendix M: Validation procedures for quantitative food allergen ELISA methods: community guidance and best practices进行评价,评价结 果见附录A。 注: 试剂盒详细信息见附录B。 5.2 脱脂奶粉(不含腰果致敏原)。 5.3 液体鱼胶(不含腰果致敏原)。 5.4 1×洗涤缓冲液:按照1∶10比例稀释10×洗涤缓冲液浓缩液[见B.1 c)],稀释后的1×洗涤缓冲 液可贮于2 ℃~8 ℃条件下保存4周。1条微孔板需约15 mL 1×洗涤缓冲液洗涤。 5.5 1×致敏原提取缓冲液:按照1∶10比例稀释10×致敏原提取缓冲液浓缩液[见B.1 d)],稀释后 的1×致敏原提取缓冲液可贮于2 ℃~8 ℃条件下保存12周。稀释前,若10×致敏原提取缓冲液浓缩 液中有结晶,则先将其置于37 ℃水浴中温育,直至结晶完全消失,充分混匀后使用。 5.6 1×酶标记物:用水按照1∶11比例稀释11×酶标记物浓缩液[见B.1 b)],现配现用。如移取 100 μL 11×酶标记物浓缩液(见附录B)至1 mL水中稀释混匀,足够1条微孔板反应用。 5.7 鱼胶-致敏原提取缓冲液:称取1.25 g液体鱼胶(5.3),用1×致敏原提取缓冲液(5.5)定容至 100 mL,混合均匀。配制好后可贮于2 ℃~8 ℃下保存7 d。 5.8 脱脂奶粉-致敏原提取缓冲液:称取5.00 g脱脂奶粉(5.2),用1×致敏原提取缓冲液(5.5)定容至 100 mL,混合均匀。配制好后可贮于2 ℃~8 ℃下保存1 d。 6 仪器和设备 6.1 酶标仪:具450 nm波长。 6.2 分析天平:感量0.01 g。 6.3 涡旋混匀仪。 6.4 冷冻离心机:转速≥4 000 r/min,温度≤4 ℃。 6.5 水浴锅:37 ℃,60 ℃。 6.6 单道移液器:20 μL~200 μL,100 μL~1 000 μL。 6.7 八道移液器:30 μL~300 μL。 2SN/T5655.8—2023