̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э ICS67.050 CCSX04 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T5655.6—2023 商品化试剂盒检测方法 预包装食品致敏原免疫分析法 第6部分:乳 Commercial kit test method— Immunoassay of food allergens in prepackaged foods— Part 6: Milk 2023-11-01发布 2024-05-01实施 中华人民共和国海关总署发布̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э ̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件为SN/T 5655 《商品化试剂盒检测方法 预包装食品致敏原免疫分析法》的第6部分。 SN/T 5655已经发布了以下部分: ———第1部分:麸质; ———第2部分:甲壳纲类动物; ———第3部分:蛋类; ———第4部分:花生; ———第5部分:大豆; ———第6部分:乳; ———第7部分:扁桃仁; ———第8部分:腰果; ———第9部分:榛子; ———第10部分:巴西坚果; ———第11部分:夏威夷果; ———第12部分:开心果; ———第13部分:胡桃。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本文件起草单位:中华人民共和国广州海关、中华人民共和国沈阳海关、沈阳国际旅行卫生保健中 心、大连民族大学。 本文件主要起草人:王金玲、陈文锐、张莹、李莎、吴渺渺、李思德、刘津、梁颖婕、郑秋月。 ⅠSN/T5655.6—2023̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э ̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 引 言 食品致敏原是普通食品中正常存在的天然或人工添加物质,被过敏体质人群消耗后能够诱发过敏 反应。SN/T 5655《商品化试剂盒检测方法 预包装食品致敏原免疫分析法》规定了预包装食品中致敏 原成分的酶联免疫吸附定量检测和胶体金免疫层析定性检测方法,旨在满足预包装食品致敏原标识、生 产质控和食品安全检验监管的检测需求。 SN/T 5655《商品化试剂盒检测方法 预包装食品致敏原免疫分析法》拟由下列13个部分构成。 ———第1部分:麸质。 ———第2部分:甲壳纲类动物。 ———第3部分:蛋类。 ———第4部分:花生。 ———第5部分:大豆。 ———第6部分:乳。 ———第7部分:扁桃仁。 ———第8部分:腰果。 ———第9部分:榛子。 ———第10部分:巴西坚果。 ———第11部分:夏威夷果。 ———第12部分:开心果。 ———第13部分:胡桃。 ⅢSN/T5655.6—2023̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э ̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 商品化试剂盒检测方法 预包装食品致敏原免疫分析法 第6部分:乳 1 范围 本文件规定了预包装食品中乳、酪蛋白、β-乳球蛋白致敏原的酶联免疫吸附和乳致敏原的胶体金免 疫层析测定方法。 第一法乳酶联免疫吸附法适用于预包装食品中乳致敏原成分的定量检测。 第二法酪蛋白酶联免疫吸附法适用于预包装食品中酪蛋白致敏原成分的定量检测。 第三法β-乳球蛋白夹心酶联免疫吸附法适用于未经发酵或水解的预包装食品中β-乳球蛋白致敏原 成分的定量检测。 第四法β-乳球蛋白竞争酶联免疫吸附法适用于经过发酵或水解的预包装食品中β-乳球蛋白致敏原 成分的定量检测。 第五法乳胶体金免疫层析法适用于预包装食品中乳致敏原的定性检测,也适用于预包装食品生产 过程中为监控乳致敏原目的对生产原料和环境采样的定性检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 AOAC Guidelines for Collaborative Study Procedures to Validate Characteristics of a Method of Analysis. Appendix M: Validation procedures for quantitative food allergen ELISA methods: com- munity guidance and best practices 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 乳 milk 哺乳动物分娩后从乳腺分泌的一种白色或带微黄色不透明液体。以生乳为原料可加工制成乳粉。 乳中含有的酪蛋白和β-乳球蛋白在具有营养价值的同时也具有致敏性。 3.2 酶联免疫吸附测定 enzyme-linked immunosorbent assay;ELISA 可溶性抗原或抗体结合到微孔板等固相载体上,基于免疫反应和酶催化显色的一种定性或定量检 测方法。 1SN/T5655.6—2023̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 3.3 胶体金免疫层析 colloidal gold immunochromatography assay;GICA 以胶体金作为示踪标志物的一种免疫层析检测技术。 注: 通常为试纸条形式。 第一法 乳 酶联免疫吸附法 4 原理 检测的原理是抗原抗体反应。微孔板中包被有针对乳致敏原的特异性抗体。样品中含有的乳致敏 原和特异性抗体结合形成抗体-抗原复合物。加入过氧化物酶标记的抗体后,形成抗体-抗原-抗体复合 物,其他物质在洗涤步骤中被除去。加入底物/发色剂呈显色反应。通过测定450 nm波长下吸光度值 得出样品中乳致敏原含量。样品中乳致敏原含量与吸光度值成正比。 5 试剂和材料 除特别说明外,实验用水应符合GB/T 6682规定的三级水,所有试剂均为分析纯。 5.1 乳致敏原酶联免疫吸附检测试剂盒:试剂盒按照AOAC Guidelines for Collaborative Study Pro- cedures to Validate Characteristics of a Method of Analysis Appendix M: Validation procedures for quantitative food allergen ELISA methods: community guidance and best practices进行评价,评价结 果见附录A。 注: 试剂盒详细信息见附录B。 5.2 1 mol/L氢氧化钠(NaOH):称取40.00 g NaOH,加水溶解并定容至1 L。 5.3 1 mol/L盐酸(HCl):取8.4 mL浓盐酸(37%),用水定容至100 mL。 5.4 1×致敏原提取缓冲液:按照1∶10比例稀释10×致敏原提取缓冲液浓缩液[见B.1e)],稀释后的 1×致敏原提取缓冲液可贮于2 ℃~8 ℃条件下保存12周。稀释前,若10×致敏原提取缓冲液浓缩液 中有结晶,则先将其置于37 ℃水浴中温育,直至结晶完全消失,充分混匀后使用。 5.5 含添加剂1的致敏原提取缓冲液:称取1.35 g添加剂1[见B.1g)],溶解于15 mL 1 mol/L氢氧 化钠(NaOH)(5.2)中,搅拌直至完全溶解,加入700 mL 1×致敏原提取缓冲液(5.4),用1 mol/L盐酸 (HCl)(5.3)将pH值调至9,再用1×致敏原提取缓冲液(5.4)定容到750 mL,该提取缓冲液,可用于提 取约45个样品。可在室温(20 ℃~25 ℃)条件下保存3周,不应冷藏,若出现晶体析出情况则即刻 弃用。 5.6 1×提取液2:按照1∶2比例用蒸馏水稀释2×提取液2浓缩液[见B.1f)]。稀释后的1×提取液 2可用于提取约45个样品,可在室温(20 ℃~25 ℃)条件下保存约3个月。 5.7 1×洗涤缓冲液:按照1∶10比例稀释10×洗涤缓冲液浓缩液[见B.1d)],稀释后的1×洗涤缓冲 液可贮于2 ℃~8 ℃条件下保存4周。1条微孔板需约15 mL 1×洗涤缓冲液洗涤。 5.8 1×酶标记物:用酶标记物缓冲液[见B.1c)]按照1∶11比例稀释11×酶标记物浓缩液[见 B.1b)],现配现用。如移取100 μL 11×酶标记物浓缩液到1 mL的酶标记物缓冲液[见B.1c)]中稀释 混匀,足够1条微孔板使用。 6 仪器和设备 6.1 酶标仪:具450 nm波长。 2SN/T5655.6—2023