̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э ICS67.050 CCS X04 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T5655.10—2023 商品化试剂盒检测方法 预包装食品致敏原免疫分析法 第10部分:巴西坚果 Commercial kit test method— Immunoassay of food allergens in prepackaged foods— Part 10: Brazil Nut 2023-11-01发布 2024-05-01实施 中华人民共和国海关总署发布̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э ̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件为SN/T 5655 《商品化试剂盒检测方法 预包装食品致敏原免疫分析法》的第10部分。 SN/T 5655已经发布了以下部分: ———第1部分:麸质; ———第2部分:甲壳纲类动物; ———第3部分:蛋类; ———第4部分:花生; ———第5部分:大豆; ———第6部分:乳; ———第7部分:扁桃仁; ———第8部分:腰果; ———第9部分:榛子; ———第10部分:巴西坚果; ———第11部分:夏威夷果; ———第12部分:开心果; ———第13部分:胡桃。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本文件起草单位:中华人民共和国广州海关、中华人民共和国拱北海关、珠海粤港食品安全检测有 限公司。 本文件主要起草人:梁颖婕、高东微、冯家望、冼钰茵、刘津、吴本培。 ⅠSN/T5655.10—2023̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э ̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 引 言 食品致敏原是普通食品中正常存在的天然或人工添加物质,被过敏体质人群消耗后能够诱发过敏 反应。SN/T 5655《商品化试剂盒检测方法 预包装食品致敏原免疫分析法》规定了预包装食品中致敏 原成分的酶联免疫吸附定量检测和胶体金免疫层析定性检测方法,旨在满足预包装食品致敏原标识、生 产质控和食品安全检验监管的检测需求。 SN/T 5655《商品化试剂盒检测方法 预包装食品致敏原免疫分析法》拟由下列13个部分构成。 ———第1部分:麸质。 ———第2部分:甲壳纲类动物。 ———第3部分:蛋类。 ———第4部分:花生。 ———第5部分:大豆。 ———第6部分:乳。 ———第7部分:扁桃仁。 ———第8部分:腰果。 ———第9部分:榛子。 ———第10部分:巴西坚果。 ———第11部分:夏威夷果。 ———第12部分:开心果。 ———第13部分:胡桃。 ⅢSN/T5655.10—2023̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э ̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 商品化试剂盒检测方法 预包装食品致敏原免疫分析法 第10部分:巴西坚果 1 范围 本文件规定了预包装食品中巴西坚果致敏原的胶体金免疫层析测定方法。 本文件适用于预包装食品中巴西坚果致敏原的胶体金免疫层析定性检测,也适用于预包装食品生 产过程对生产原料和环境样品中巴西坚果致敏原的定性监测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 AOAC Guidelines for Collaborative Study Procedures to Validate Characteristics of a Method of Analysis. Appendix M: Validation procedures for quantitativefood allergen ELISA methods: commu- nity guidanceand best practices 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 巴西坚果 Brazil nut 玉蕊科巴西栗属植物(Bertholletia excelsa)的可食用种仁。 注: 又称巴西栗、鲍鱼果、巴西果。 3.2 胶体金免疫层析 colloidal gold immunochromatography assay;GICA 以胶体金作为示踪标志物的一种免疫层析检测技术。 注: 通常为试纸条形式。 4 原理 利用抗原-抗体特异性结合反应,对样品中的巴西坚果致敏原进行胶体金免疫层析试纸条检测。样 品中的巴西坚果致敏原与预包被在反应管内的标记抗体发生反应,形成抗原-抗体结合物。此抗原-抗 体结合物被预包被在免疫层析试纸条上的特异性抗体捕获,形成抗体-抗原-抗体的夹心复合物,并在检 测区显色,通过目测判读检测结果。 1SN/T5655.10—2023̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 5 试剂和材料 除特别说明外,实验用水应符合GB/T 6682规定的三级水,所有试剂均为分析纯。 5.1 巴西坚果致敏原胶体金免疫层析检测试剂盒:试剂盒按照AOAC Guidelines for Collaborative Study Procedures to Validate Characteristics of a Method of Analysis Appendix M: Validation proce- dures for quantitative food allergen ELISA methods: community guidance and best practices进行评 价,评价结果见附录A。 注: 试剂盒详细信息见附录B。 5.2 吸附缓冲液,按照附录C执行。 5.3 PBS-吐温缓冲液:8.0 g NaCl,0.2 g KCl,1.44 g Na2HPO4,0.24 g KH2PO4,2 mL 吐温-20,调 pH至7.2~7.4,用蒸馏水定容至1 L。 5.4 氯化钠(NaCl)。 5.5 棉签拭子。 6 仪器和设备 6.1 分析天平:感量0.01 g。 6.2 匀浆机。 6.3 涡旋混匀仪。 6.4 离心机:转速≥4 000 r/min。 6.5 单道移液器:100 μL~1 000 μL,500 μL~5 000 μL。 7 分析步骤 7.1 环境拭子的采样 7.1.1 吸取1 mL PBS-吐温缓冲液(5.3)到洁净的2 mL离心管中,浸润棉签拭子(5.5)。 7.1.2 用浸润的棉签拭子(7.1.1)的棉头,擦拭大约10 cm×10 cm面积的待检测环境表面。若无法 实现10 cm×10 cm的待检测环境表面擦拭,请自行定义合理及合适的待检测环境表面范围并记录。 7.1.3 将擦拭取样后的棉签拭子(7.1.2)放回装有PBS-吐温缓冲液的离心管中,充分浸洗并挤压使棉 头与缓冲液充分融合和释放,取出挤干的棉签拭子。 7.1.4 从离心管中取0.1 mL用于检测。 注: 若棉签采样拭子(7.1.2)含有肉眼清晰可见的致敏原颗粒,则可能含有的致敏原超过1 000 mg/kg,建议将棉签 拭子采样处理后的离心管中样品液,进一步稀释后,再用于检测。 7.2 清洁用水的采样 直接取0.1 mL清洁用水用于检测。 7.3 食品样品前处理和提取 7.3.1 液体样品:量取不少于5 mL样品,进行充分均质。 7.3.2 固体样品:称取50.00 g样品,向其中加入450 mL水和4.00 g氯化钠(5.4)后均质。置离心机 中4 000 r/min室温(20 ℃~25 ℃)离心5 min,取上清液用于检测。无离心条件时,可用粗滤纸过滤, 2SN/T5655.10—2023