̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э ICS67.050 CCS C53 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T5649—2023 动物源食品中克百威及代谢物3-羟基克百 威残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of carbofuran and its metabolites residues 3-Hydroxycarbofuran in foods of animal origin—LC-MS/MS method 2023-11-01发布 2024-05-01实施 中华人民共和国海关总署发布̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 中华人民共和国出入境检验检疫 行 业 标 准 动物源食品中克百威及代谢物3-羟基克百 威残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 SN/T 5649—2023 * 中国海关出版社有限公司出版发行 北京市朝阳区东四环南路甲1号(100023) 编辑部:(010)65194242-7530 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷 * 开本880×12301/16 印张1 字数29千字 2024年4月第一版 2024年4月第一次印刷 印数 1—500 * 书号: 155175·1021 定价18.00元̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本文件起草单位:中华人民共和国广州海关、中华人民共和国南宁海关、中华人民共和国拉萨海关、 中华人民共和国合肥海关。 本文件主要起草人:席静、李菊、黎天勇、曹晓钢、徐娟、司露露、宋伟、吴舒悦。 ⅠSN/T5649—2023̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э ̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 动物源食品中克百威及代谢物3-羟基克百 威残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 1 范围 本文件规定了动物源食品中克百威及代谢物3-羟基克百威残留量的液相色谱-质谱/质谱测定 方法。 本文件适用于动物组织、蛋、乳、蜂蜜、蜂王浆、蜂胶和肠衣中克百威及代谢物3-羟基克百威残留量 的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 方法提要 试样中残留的克百威与3-羟基克百威用乙腈提取,分散固相萃取方法净化,采用液相色谱-质谱/质 谱仪检测,外标法定量。 5 试剂和材料 除非另有说明,所用试剂均为分析纯,试验用水应符合GB/T 6682中规定的一级水。 5.1 乙腈:色谱纯。 5.2 甲醇:色谱纯。 5.3 甲酸:色谱纯。 5.4 氢氧化钙。 5.5 无水硫酸镁:于500 ℃马弗炉内烘烤约4 h,冷却后贮于密闭容器中备用。 5.6 氯化钠。 5.7 柠檬酸钠二水合物。 5.8 柠檬酸二钠-盐倍半水合物。 5.9 甲酸铵:优级纯。 5.10 5 mmol/L甲酸铵-0.1%甲酸水溶液:准确称取0.314 5 g甲酸铵于小烧杯中,加少量水溶解并转 移至1 000 mL容量瓶中,准确加入1 mL甲酸,用水稀释至刻度,混匀。 1SN/T5649—2023̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 5.11 0.5%氢氧化钙溶液:称取5 g氢氧化钙,用水充分溶解稀释至1 000 mL,过滤取滤液,现配现用。 5.12 克百威标准物质(C12H15NO3,CAS号1563-66-2):纯度≥98%。 5.13 3-羟基克百威标准物质(C12H15NO4,CAS号16655-82-6):纯度≥98%。 5.14 克百威标准储备溶液,1 000 mg/L。精密称取10 mg克百威标准品于小烧杯中,加少量甲醇溶 解,移入10 mL容量瓶中,用乙腈定容,摇匀,-18 ℃避光保存,有效期为6个月。 5.15 3-羟基克百威标准储备溶液,1 000 mg/L。精密称取10 mg 3-羟基克百威标准品于小烧杯中,加 少量甲醇溶解,移入10 mL容量瓶中,用乙腈定容,摇匀,-18 ℃避光保存,有效期为6个月。 5.16 混合标准中间溶液:分别量取1 mL标准储备溶液(5.14与5.15),用乙腈稀释并定容至10 mL, 混合标准中间溶液浓度相当于100.0 mg/L,-18 ℃避光保存,有效期为1个月。 5.17 混合标准工作溶液:准确量取适量混合标准中间液(5.16),用空白基质稀释成0.001 mg/L、 0.002 mg/L、0.005 mg/L、0.010 mg/L、0.020 mg/L、0.050 mg/L和0.100 mg/L的系列浓度标准工 作溶液,现配现用。 5.18 乙二胺-N-丙基硅烷化硅胶(PSA):粒径40 μm~60 μm。 5.19 十八烷基硅烷键合硅胶(C18):粒径40 μm~60 μm。 5.20 微孔滤膜:0.22 μm,有机相。 6 仪器和设备 6.1 液相色谱-质谱/质谱仪:配有电喷雾离子源(ESI)。 6.2 电子天平:感量为0.01 g和0.1 mg。 6.3 组织捣碎机。 6.4 均质器:10 000 r/min。 6.5 摇床。 6.6 涡旋混合器。 6.7 移液器:100 μL~1 000 μL。 6.8 离心机:转速≥4 000 r/min。 6.9 高速冷冻离心机:转速≥12 000 r/min。 6.10 超声清洗仪。 6.11 氮吹仪。 7 试样的制备与保存 7.1 牛肉、鸡肉、猪肝脏、罗非鱼、鸡蛋、猪脂肪 取样品中具有代表性的可食部分500 g,经组织捣碎机捣碎后充分混匀,装入洁净容器中。密封并 做好标记,于-18 ℃以下保存。 7.2 蜂蜜 取代表性样品500 g,对于无结晶的样品将其搅拌均匀,对于有结晶析出的样品,在密闭情况下,将 样品置于不超过60 ℃的水浴中温热,待样品全部融化后搅拌均匀,迅速冷却至室温。在融化时应注意 防止水分挥发,装入洁净容器中。密封并做好标记,室温避光保存。 7.3 牛奶、蜂王浆 取有代表性样品500 g,搅拌均匀,装入洁净容器中,密封并做好标记,于-18 ℃以下保存。 2SN/T5649—2023̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 7.4 蜂胶 取有代表性样品500 g,-20 ℃冷冻后经组织捣碎机捣碎,充分混匀,装入洁净容器中。密封并做 好标记,于-18 ℃以下保存。 7.5 猪肠衣 取有代表性样品500 g,用剪刀剪至5 mm或以下长度,用组织捣碎机捣碎后充分混匀,装入洁净容 器中。密封并做好标记,于-18 ℃以下保存。 8 测定步骤 8.1 样品提取 8.1.1 牛肉、鸡肉、罗非鱼 称取5 g试样(精确至0.01 g)置于50 mL离心管中,加入10 mL乙腈,用均质器以10 000 r/min 均质20 s~30 s,再取10 mL乙腈清洗均质器刀头上的残渣,合并乙腈提取液后,涡旋混合器上混合提 取20 s~30 s,加入4 g无水硫酸镁、1 g氯化钠、1 g柠檬酸钠二水合物、0.5 g柠檬酸二钠-盐倍半水合 物,混匀后放入摇床振荡提取10 min,以4 000 r/min离心5 min,取出1 mL上清液待净化。 8.1.2 猪肝脏、牛奶、猪脂肪和猪肠衣 称取5 g试样(精确至0.01 g)置于50 mL离心管中,加入10 mL乙腈,涡旋混合器上混匀20 s~ 30 s,加入4 g无水硫酸镁、1 g氯化钠、1 g柠檬酸钠二水合物、0.5 g柠檬酸二钠-盐倍半水合物,混匀后 放入摇床振荡提取10 min,以4 000 r/min离心5 min,取出1 mL上清液待净化(猪脂肪提取上清液吸 取前先在-18 ℃冷冻1 h去除冻结的脂肪)。 8.1.3 鸡蛋、蜂蜜、蜂王浆 称取鸡蛋5 g,蜂蜜、蜂王浆2 g(精确至0.01 g),置于50 mL离心管中,加5 mL水,涡旋混合器混 匀1 min,静置5 min。加入10 mL乙腈,涡旋混匀1 min,摇床提取10 min,加2 g~3 g氯化钠涡旋混 匀1 min,以4 000 r/min离心5 min,取出1 mL上清液待净化。 8.1.4 蜂胶 称取0.2 g试样(精确至0.001 g)于50 mL离心管中,加入10 mL乙腈,涡旋混匀1 min,置超声清 洗仪提取10 min,加入10 mL 0.5% Ca(OH)2水溶液,涡旋混匀2 min后再加4 g~6 g氯化钠,涡旋混 匀2 min,0 ℃条件下以10 000 r/min离心10 min,取出4 mL上清液待净化。 8.2 净化 8.2.1 牛肉、鸡肉、罗非鱼、猪肝脏、牛奶、猪脂肪、猪肠衣、鸡蛋、蜂蜜、蜂王浆 取8.1.1、8.1.2、8.1.3中待净化液分别转移至内含150 mg无水硫酸镁,50 mg PSA和50 mg C18 的塑料离心管中,涡旋混匀1 min,以12 000 r/min离心5 min,取上清液过0.22 μm有机相微孔滤膜, 供LC-MS/MS测定。 8.2.2 蜂胶 取8.1.4