̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э ICS67.050 CCS C53 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T5648—2024 动物源食品中苯并烯氟菌唑残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of benzovindiflupyr foodstuffs of animal-origin— LC-MS/MS method 2024-12-31发布 2025-07-01实施 中华人民共和国海关总署发布̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э ̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本文件起草单位:中华人民共和国广州海关、中华人民共和国杭州海关。 本文件主要起草人:李菊、王岚、陈捷、吴舒悦、谢文、席静、黎天勇、陈文锐、李敏青、陈姿竹。 ⅠSN/T5648—2024̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э ̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 动物源食品中苯并烯氟菌唑残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 1 范围 本文件规定了动物源食品中苯并烯氟菌唑残留量测定的液相色谱-质谱/质谱法。 本文件适用于牛肉、鸡肉、罗非鱼、鸡肝、鸡蛋、蜂蜜、牛奶、猪脂肪、猪肠衣、蜂王浆和蜂胶等动物源 食品中苯并烯氟菌唑残留量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 方法提要 试样中的苯并烯氟菌唑用酸性乙腈(蜂胶用乙腈)提取,经固相萃取柱净化,采用液相色谱-质谱/质 谱仪测定,外标法定量。 5 试剂和材料 除非另有规定,仅使用分析纯试剂,试验用水应符合GB/T 6682中规定的一级水。 5.1 乙腈:色谱纯。 5.2 甲醇:色谱纯。 5.3 乙酸:色谱纯。 5.4 甲酸:色谱纯。 5.5 氢氧化钙。 5.6 甲酸铵:优级纯。 5.7 无水硫酸镁。 5.8 氯化钠。 5.9 柠檬酸钠二水合物(C6H5Na3O7·2H2O)。 5.10 柠檬酸二钠-盐倍半水合物(C6H6Na2O7·1.5H2O)。 5.11 1%酸性乙腈溶液:吸取1 mL乙酸(5.3),加乙腈(5.1)稀释至100 mL,混匀。 5.12 0.5%氢氧化钙溶液:称取5 g氢氧化钙(5.5),用水充分溶解后稀释至1 000 mL,过滤取滤液,现 1SN/T5648—2024̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 配现用。 5.13 5 mmol/L甲酸铵-0.1%甲酸水溶液:准确称取0.314 5 g甲酸铵(5.6)于小烧杯中,加少量水溶 解并转移至1 000 mL容量瓶中,准确加入1 mL甲酸(5.4),用水稀释至刻度,混匀。 5.14 苯并烯氟菌唑:C18H15C12F2N3O,CAS号1072957-71-1,纯度≥98%。 5.15 标准储备溶液(1 000 mg/L):准确称取10 mg苯并烯氟菌唑(5.14)于小烧杯中,加少量乙腈(5. 1)溶解,移入10 mL容量瓶中,用乙腈定容至刻度,摇匀,-18 ℃避光保存,有效期为6个月。 5.16 标准中间溶液(100.0 mg/L):吸取1 mL标准储备溶液(5.15)于10 mL容量瓶中,用乙腈(5.1) 定容至刻度,摇匀,-18 ℃避光保存,有效期为1个月。 5.17 基质标准工作溶液:准确量取适量标准中间溶液(5.16),用空白基质提取液稀释成1.0 μg/L、 2.0 μg/L、5.0 μg/L、10.0 μg/L、20.0 μg/L、50.0 μg/L和100.0 μg/L的系列浓度基质标准工作溶液, 现配现用。 5.18 去磷脂PPR固相萃取柱:200 mg,3 mL,或相当者。 5.19 滤膜:0.22 μm,有机相。 6 仪器和设备 6.1 液相色谱-质谱/质谱仪:配有电喷雾离子源(ESI)。 6.2 电子天平:感量为0.01 g和0.1 mg。 6.3 组织捣碎机。 6.4 均质器。 6.5 涡旋混合器。 6.6 网筛:0.425 mm。 6.7 冷冻高速离心机:转速≥10 000 r/min。 6.8 超声清洗仪。 6.9 摇床。 7 试样的制备与保存 7.1 在制样的操作过程中,应防止样品污染或发生残留量含量的变化。 7.2 牛肉、鸡肉、罗非鱼、猪脂肪、鸡肝、鸡蛋、肠衣:取有代表性样约500 g,用组织捣碎机捣碎,装入洁 净容器作为试样,密封并做好标识,于-18 ℃下保存。 7.3 牛奶、蜂蜜和蜂王浆:取有代表性样约500 g,混合均匀,装入洁净容器作为试样,密封并做好标识, 于4 ℃ 下保存。 7.4 蜂胶:取有代表性样品500 g,-20 ℃冷冻后经组织捣碎机捣碎,充分混匀,过网筛后装入洁净容 器中。密封并做好标记,于4 ℃下保存。 8 测定步骤 8.1 提取 8.1.1 牛肉、鸡肉、罗非鱼 准确称取5 g试样(精确至0.01 g)置于50 mL离心管中,加入10 mL 1%酸性乙腈溶液(5.11)后 置均质器中10 000 r/min下均质15 s。另取一洁净50 mL离心管,加入10 mL 1%酸性乙腈溶液,清洗 2SN/T5648—2024̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 均质器刀头10 s,洗涤液合并至前一离心管中,涡旋混合20 s后加入 4 g 无水硫酸镁(5.7)、1 g 氯化钠 (5.8)、1 g 柠檬酸钠二水合物(5.9)和0.5 g 柠檬酸二钠-盐倍半水合物(5.10),迅速手摇混匀后置摇床 振荡提取10 min,4 000 r/min下离心5 min。吸取上清液待净化。 8.1.2 鸡肝、猪脂肪、牛奶、猪肠衣 准确称取5 g试样(精确至0.01 g)置于50 mL离心管中,加入10 mL 1%酸性乙腈溶液(5.11),涡 旋混匀1 min后加4 g 无水硫酸镁(5.7)、1 g 氯化钠(5.8)、1 g 柠檬酸钠二水合物(5.9)和0.5 g 柠檬 酸二钠-盐倍半水合物(5.10),迅速手摇混匀后置摇床振荡提取10 min,4 000 r/min下离心5 min。吸 取上清液待净化。 8.1.3 蜂蜜、蜂王浆、鸡蛋 准确称取蜂蜜、蜂王浆2 g、鸡蛋5 g(精确至0.01 g)置于50 mL离心管中,加5 mL水,涡旋混匀 1 min,加入10 mL 1%酸性乙腈溶液(5.11),涡旋混匀1 min,再加2 g~3 g的氯化钠(5.8),迅速手摇 混匀后置摇床振摇提取10 min,4 000 r/min下离心5 min。吸取上清液待净化。 8.1.4 蜂胶 准确称取0.2 g试样(精确至0.001 g)置于50 mL离心管中,加入10 mL乙腈(5.1)涡旋混匀 1 min,置超声仪提取10 min,加入10 mL 0.5%氢氧化钙溶液(5.12),涡旋混匀2 min后再加4 g~6 g 氯化钠(5.8),涡旋混匀2 min,0 ℃条件10 000 r/min下离心10 min。吸取上清液待净化。 8.2 净化 8.2.1 牛肉、鸡肉、罗非鱼、猪脂肪、蜂蜜、蜂王浆、牛奶、猪肠衣、鸡蛋 吸取上清液2 mL(脂肪提取液-18 ℃冷冻1 h后吸取2 mL)至去磷脂小柱(5.18)内,过柱,收集流 出液至收集管中,涡旋混匀后过0.22 μm滤膜(5.19),装瓶,供LC-MS/MS测定。 8.2.2 鸡肝 吸取上清液2 mL至去磷脂小柱(5.18)内,过柱,收集流出液至收集管中,涡旋混匀后取1 mL流出 液至一洁净小试管内,加入1 mL水涡旋混合,过0.22 μm滤膜(5.19),装瓶,供LC-MS/MS测定。 8.2.3 蜂胶 吸取上清液2 mL至去磷脂小柱(5.18)内,过柱,收集全部流出液至收集管中,45 ℃氮吹近干后立 即加入1 mL乙腈定容,涡旋混匀后过0.22 μm滤膜(5.19),装瓶,供LC-MS/MS测定。 8.3 空白基质提取液 取经测定不含被测组分的试样按8.1和8.2操作,获得空白基质提取液。 8.4 测定 8.4.1 液相色谱条件 由于测试结果取决于所使用的仪器,因此不可能给出液相色谱分析的通用参数。设定的参数应保 证色谱分析时被测组分与其他组分能得到有效的分离,下列给出的参数可供参考。 液相色谱参考条件如下: a) 色谱柱:C18柱,150 mm ×2.1 mm(内径),粒度2.6 μm或性能相当者; 3SN/T5648—2024̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э b) 流动相:A:甲醇,B:5 mmoL甲酸铵-0.1%甲酸水溶液,梯度洗脱程序见表1; c) 流速:0.3 mL/min; d) 进样量:2 μL; e) 柱温:45 ℃。 表1 梯度洗脱程序 时间/min 流动相A/% 流动相B/% 0 20 80 5 90 10 8 90 10 9 20 80 10 20 80 8.4.2 质谱条件