̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э ICS67.050 CCS X04 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T5645—2024 出口食品中索马甜的测定 液相色谱法 Determination of thaumatin in food for export— Liquid chromatography method 2024-12-31发布 2025-07-01实施 中华人民共和国海关总署发布̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э ̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规 定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本文件起草单位:中华人民共和国济南海关、中华人民共和国青岛海关。 本文件主要起草人:王乐、项海波、郑新华、陈晞、李晓明、李建勇、常晨阳。 ⅠSN/T5645—2024̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э ̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 出口食品中索马甜的测定 液相色谱法 1 范围 本文件规定了出口食品中索马甜的液相色谱测定方法。 本文件适用于饮料、糖粉、冰淇淋、核桃仁、蛋糕中索马甜的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB/T 6682 分析实验用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 方法提要 试样中索马甜用三氟乙酸水溶液提取,高脂肪样品经正己烷脱脂,经固相萃取柱净化、富集后经大 孔径反相C18色谱柱分离,液相色谱-紫外检测器或液相色谱-二极管阵列检测器检测,根据保留时间定 性,外标法定量。 5 试剂和材料 除另有规定外,所有试剂均为分析纯,水为符合GB/T 6682中规定的一级水。 5.1 试剂 5.1.1 乙腈:色谱纯。 5.1.2 三氟乙酸:色谱纯。 5.1.3 甲醇:色谱纯。 5.1.4 氨水:含量为25%~28%。 5.2 标准品 索马甜标准物质:分子结构见附录A, CAS号.53850-34-3, 纯度≥97.8%。 5.3 溶液配制 5.3.1 0.1%三氟乙酸溶液:量取1 mL三氟乙酸,用水定容至1 L。 1SN/T5645—2024̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 5.3.2 25%氨水甲醇溶液:量取25 mL氨水和75 mL甲醇,混匀。 5.4 标准溶液配制 5.4.1 索马甜标准储备液:准确称取按其纯度折算为100 %质量的索马甜100 mg(精确到0.1 mg), 用水溶解并定容至100 mL,配制成浓度为1 000 mg/L的标准储备液,于0 ℃~ 4 ℃冰箱中保存,有效 期6个月。 5.4.2 索马甜标准工作溶液:准确移取一定体积的索马甜标准储备液(5.4.1),用水配制成浓度为 2 mg/L、5 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、50 mg/L的标准工作溶液,现用现配。 5.5 材料 5.5.1 固相萃取柱:150 mg/6 mL,类型为N-乙烯基吡咯烷酮和二乙烯基苯亲水亲脂平衡性填料,或 相当者。 5.5.2 微孔滤膜:0.45 μm,有机相滤膜。 5.5.3 玻璃纤维滤纸:快速、高载量、液体中颗粒保留1.6 μm。 6 仪器和设备 6.1 液相色谱仪:配有紫外检测器(VWD)或二极管阵列检测器(DAD)。 6.2 组织匀浆机。 6.3 粉碎机。 6.4 分析天平:感量0.001 g和0.000 1 g。 6.5 涡旋振荡器。 6.6 超声波清洗仪:工作频率35 kHz。 6.7 离心机: 6 000 r/min,14 000 r/min。 7 分析步骤 7.1 试样制备 均匀的液体样品直接混合;非均匀的液态、半固态样品用组织匀浆机匀浆;固体样品粉碎并搅拌均 匀,取其中的200 g装入玻璃容器中,密封,液体试样于4 ℃保存,其他试样于-18 ℃保存。 7.2 前处理 7.2.1 饮料、糖粉等一般性试样 称取2 g~5 g(精确到0.001 g)试样于15 mL具塞离心管中,加0.1 %三氟乙酸溶液(5.3.1) 10 mL涡旋混匀,超声波提取10 min,以6 000 r/min离心10 min,上清液待固相萃取柱净化。 7.2.2 冰淇淋等高蛋白试样 称取2 g(精确到0.001 g)试样于15 mL具塞离心管中,加0.1 %三氟乙酸溶液(5.3.1)10 mL涡 旋混匀(如样品黏稠,可增加0.1 %三氟乙酸溶液体积),超声波提取20 min,以14 000 r/min离心 10 min(或经玻璃纤维滤纸过滤(5.5.3),收集上清液。加入5 mL 0.1 %三氟乙酸溶液重复提取1次。 如经玻璃纤维滤纸过滤,两次提取后,用2 mL 0.1 %三氟乙酸溶液冲洗纤维滤纸,合并提取液和冲洗 液待固相萃取柱净化。 2SN/T5645—2024̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 7.2.3 核桃仁、蛋糕等高油脂试样 称取2 g(精确到0.001 g)试样于50 mL具塞离心管中,加正己烷10 mL,超声波5 min以溶解脂肪 (可不时轻摇),然后加入0.1 %三氟乙酸溶液(5.3.1)10 mL涡旋混匀,超声波提取20 min,于 6 000 r/min离心5 min,弃去有机相,收集水相提取液。残渣加入5 mL 0.1 %三氟乙酸溶液重复提取 1次,合并水相提取液待固相萃取柱净化。 7.3 固相萃取柱净化 依次用5 mL甲醇、5 mL水活化,弃去流出液;将待净化液移入固相萃取柱(5.5.1),控制液体流速 不超过每秒1滴;待样液完全流出后,用5 mL 水洗涤,继续保持液体流速为1滴/s;到柱中液体完全排 出后,用1 mL 25%氨水甲醇溶液(5.3.2)洗脱,收集洗脱液,用0.1%三氟乙酸溶液(5.3.1)定容至 2 mL,溶液过0.45 μm有机相滤膜(5.5.2),供液相色谱测定。 7.4 测定 7.4.1 仪器条件 液相色谱参考条件如下: a) 色谱柱:C18柱(250 mm × 4.6 mm,粒径5 μm,孔径300 Å),或同等性能色谱柱; b) 流动相A为0.1%三氟乙酸溶液(5.3.1),流动相B为乙腈(5.1.1),梯度洗脱,洗脱程序见 表1; c) 进样量:20 μL; d) 流速:1 mL/min; e) 检测波长:278 nm; f) 柱温:室温。 表1 流动相梯度洗脱程序 时间/min A/% B/% 0.0 95 5 16.0 50 50 20.0 50 50 20.1 95 5 25.0 95 5 7.4.2 液相色谱仪测定 7.4.2.1 标准曲线的绘制 参照7.4.1测定条件,对标准工作溶液(5.4.2)由低到高浓度依次进样测定。以浓度为横坐标,以 对应的峰面积为纵坐标,绘制标准工作曲线,拟合得到线性方程。索马甜的保留时间和典型液相色谱图 见附录B中图B.1,索马甜的典型紫外-可见吸收光谱图见图B.2。 7.4.2.2 测定 在相同的液相色谱条件下,将试样溶液注入液相色谱仪中,以保留时间定性,测得峰面积,待测样液 3SN/T5645—2024̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 中目标化合物的响应值应在仪器检测的定量测定线性范围之内,超过线性范围时应根据测定浓度进行 适当倍数稀释后再进行分析。 8 结果计算与表述 试样中索马甜的含量由色谱数据处理软件或按公式(1)计算获得: X=c×V×1 000 m×1 000…………………………( 1 ) 式中: X———试样中索马甜的含量,单位为毫克每千克(mg/kg); c———由标准曲线所得样液中索马甜的浓度,单位为毫克每升(mg/L); V———样液最终定容体积,单位为毫升(mL); m———试样质量,单位为克(g)。 测定结果用平行测定的算术平均值表示,保留三位有效数字。 9 方法的定量限、回收率 9.1 定量限 当称样量为2 g,定容至2 mL时,本方法检出限为0.6 mg/kg,定量限为2.0 mg/kg。 当称样量为5 g,定容至2 mL时,本方法检出限为0.24 mg/kg,定量限为0.8 mg/kg。 9.2 回收率 本方法添加浓度及回收率的实验数据见附录C。 4SN/T5645—2024