̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э ICS67.050 CCS X04 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T5644.4—2023 出口食品中农用化学物质的快速检测方法 拉曼光谱法 第4部分:多菌灵 Rapid determination of agricultural chemicals in export food— Raman spectroscopy—Part 4: Carbendazim 2023-12-29发布 2024-07-01实施 中华人民共和国海关总署发布̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э ̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件是SN/T 5644《出口食品中农用化学物质的快速检测方法 拉曼光谱法》的第4部分。 SN/T 5644已经发布了以下部分: ———第1部分:总则; ———第2部分:孔雀石绿和结晶紫; ———第3部分:恩诺沙星和环丙沙星; ———第4部分:多菌灵; ———第5部分:噻菌灵; ———第6部分:腈菌唑; ———第7部分:毒死蜱; ———第8部分:三唑磷; ———第9部分:地虫硫磷; ———第10部分:亚胺硫磷。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本文件起草单位:上海海关动植物与食品检验检疫技术中心、上海体育学院、合肥海关技术中心、上 海如海光电科技有限公司、上海安谱实验科技股份有限公司。 本文件起草人:陈念念、古淑青、时逸吟、赵超敏、周瑶、李晨、伊雄海、郭德华、邓晓军、韩芳、宋伟、 于永爱、江晨舟。 ⅠSN/T5644.4—2023̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 引 言 出口食品中农用化学物质的快速检测方法是为进一步确保出口食品质量安全,为农用化学物质的 风险研判提供现场监测技术手段的方法。建立出口食品中农用化学物质的快速检测标准方法体系是出 口食品监管机构的重要任务。本系列标准SN/T 5644《出口食品中农用化学物质的快速检测方法 拉曼 光谱法》旨在建立基于拉曼光谱法的出口食品中农用化学物质的快速定性筛查方法,拟由10个部分 组成。 ———第1部分:总则。目的在于为出口食品中农用化学物质的拉曼光谱快速检测方法的建立提供 通用要求。 ———第2部分:孔雀石绿和结晶紫。目的在于为出口水产品中的孔雀石绿和结晶紫提供快速定性 筛查方法。 ———第3部分:恩诺沙星和环丙沙星。目的在于为出口动物源性食品中的恩诺沙星和环丙沙星提 供快速定性筛查方法。 ———第4部分:多菌灵。目的在于为出口水果、蔬菜中的多菌灵提供快速定性筛查方法。 ———第5部分:噻菌灵。目的在于为出口水果、蔬菜中的噻菌灵提供快速定性筛查方法。 ———第6部分:腈菌唑。目的在于为出口植物源性食品中的腈菌唑提供快速定性筛查方法。 ———第7部分:毒死蜱。目的在于为出口植物源性食品中的毒死蜱提供快速定性筛查方法。 ———第8部分:三唑磷。目的在于为出口植物源性食品中的三唑磷提供快速定性筛查方法。 ———第9部分:地虫硫磷。目的在于为出口水果中的地虫硫磷提供快速定性筛查方法。 ———第10部分:亚胺硫磷。目的在于为出口水果中的亚胺硫磷提供快速定性筛查方法。 ⅡSN/T5644.4—2023̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 出口食品中农用化学物质的快速检测方法 拉曼光谱法 第4部分:多菌灵 1 范围 本文件规定了水果、蔬菜中多菌灵的的快速检测方法。 本文件适用于水果、蔬菜中多菌灵的筛查。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 20769 水果和蔬菜中450种农药及相关化学品残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 方法提要 不同物质具有与其分子结构相对应的特征拉曼光谱。样品经超声提取,有机溶剂反萃取,加表面增 强试剂对信号增强,进行拉曼光谱扫描。与标准谱图库中的多菌灵特征拉曼位移(630 cm-1±6 cm-1、 728 cm-1±6 cm-1、1 002 cm-1±6 cm-1、1 224 cm-1±6 cm-1、1 264 cm-1±6 cm-1、1 316 cm-1±6 cm-1)进行匹配识别,对样品中的多菌灵进行阴性阳性的初筛结果判定。 5 试剂和材料 除另有规定外,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的二级水。 5.1 试剂 5.1.1 乙醇(C2H6O):色谱纯。 5.1.2 乙醇溶液(5%):准确移取5.0 mL乙醇于100 mL容量瓶中,用水定容至刻度,混匀后备用。 5.1.3 乙醇溶液(20%):准确移取2.0 mL乙醇于10 mL容量瓶中,用水定容至刻度,混匀后备用。 5.1.4 二氯甲烷(CH2Cl2):色谱纯。 5.1.5 表面增强试剂:金纳米粒子溶胶,或相当者。金纳米粒子溶胶的粒径分布均匀,无团聚现象,粒 子分散性较好。表面增强试剂的参考配制方法:纳米金溶胶:在100 mL圆底烧瓶中加入聚四氟乙烯磁 力搅拌子和50 mL的0.01%氯金酸溶液,将圆底烧瓶中溶液加热至沸腾后迅速加入0.4 mL的1%柠 檬酸三钠水溶液,保持沸腾状态,加热回流30 min即可制得金纳米粒子,反应结束后冰浴冷却,装入棕 1SN/T5644.4—2023̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 色试剂瓶中,0 ℃~4 ℃冷藏保存,有效期1个月。 注: 本方法所述纳米表面增强试剂及促凝剂信息及操作步骤是为给方法使用者提供方便,在使用本方法时不做限 定。方法使用者在使用替代试剂或操作步骤前,对其进行考察,满足本方法规定的各项性能指标。 5.1.6 促凝剂:1 mol/L氯化钠溶液。称取5.85 g氯化钠,溶于100 mL水中,摇匀,备用,或配制成其 他相当的无机盐溶液。 5.2 参考物质 5.2.1 标准物质 多菌灵参考物质中文名称、英文名称、CAS号、分子式、相对分子质量见表1,纯度≥99%。 表1 多菌灵中文名称、英文名称、CAS号、分子式、相对分子质量 中文名称 英文名称 CAS号 分子式 相对分子质量 多菌灵 Carbendazim 10605-21-7 C9H9N3O2 191.20 注: 或等同可溯源物质。 5.2.2 标准溶液配制 5.2.2.1 多菌灵标准储备液(1 000 μg/mL):准确称取100 mg(精确至0.1 mg)多菌灵标准物质于烧 杯中,用60 mL乙醇完全溶解后,转移至100 mL容量瓶中,用乙醇定容至刻度,摇匀,0 ℃~4 ℃条件下 保存,有效期3个月。 5.2.2.2 多菌灵标准工作液(100 μg/mL):吸取1.0 mL多菌灵储备溶液(5.2.2.1)于10 mL容量瓶 中,用乙醇定容至刻度,混匀,0 ℃~4 ℃条件下保存,有效期1个月。 6 仪器和设备 6.1 便携式拉曼光谱仪 稳频激光光源:发射波长为785 nm±1 nm,线宽<0.1 nm,能量≥250 mW; 光谱分辨率≤15 cm-1;光谱响应范围300 cm-1~1 800 cm-1,或大于该响应范围。 6.2 移液器:100 μL、1 mL和5 mL。 6.3 涡旋振荡器。 6.4 离心机:转速≥4 000 r/min。 6.5 电子天平:感量为0.01 g、0.000 1 g。 6.6 均质器。 6.7 氮吹仪。 6.8 超声仪。 6.9 塑料具塞离心管:2 mL、5 mL、15mL。 7 测定步骤 7.1 提取 称取切碎后的试样2.0 g于15 mL具塞离心管中,加入5 mL 5%乙醇溶液(5.1.2),混匀,于超声 仪中超声3 min,在4 000 r/min下离心5 min。取上清液2 mL于5 mL离心管中,待净化。 2SN/T5644.4—2023̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 7.2 净化 提取液见(见7.1)中加入2 mL二氯甲烷,振荡混匀,萃取后取下层溶液1mL于洁净试管中,于氮 吹仪下吹干,准确加入0.6 mL 20%乙醇溶液(5.1.3),混匀后取上层清液待测。 7.3 测定 7.3.1 拉曼光谱仪器参考条件 拉曼光谱仪器条件如下: a) 激光能量≥250 mW; b) 数据采集时间:3 s; c) 平均次数:2次。 7.3.2 表面增强和测定 在仪器样品池中依次加入400 μL表面增强试剂(5.1.5),50 μL促凝剂(5.1.6),50 μL样品(见7.2), 快速摇晃均匀,上机检测(检测需在样品加入后1 min内完成)。 7.3.3 质控试验 7.3.3.1 阴性对照 称取空白试样,按照第7章与样品同法操作。 7.3.3.2 阳性对照 准确称取空白试样2 g置于15 mL具塞离心管中,加入10 μL多菌灵标准工作液(5.2.2.2),使多 菌灵浓度为0.5 mg/kg,按照第7章与样品处理同法操作。 8 结果计算和表述 8.1 定性 仪器软件将测试结果与标准谱图库中的多菌灵进行匹配识别,根据谱图630 cm-1±6 cm-1、 728 cm-1±6 cm-1、1 002 cm