̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э ICS67.050 CCSX04 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T5644.3—2023 出口食品中农用化学物质的快速检测方法 拉曼光谱法 第3部分:恩诺沙星和环丙沙星 Rapid determination of agricultural chemicals in export food— Raman spectroscopy—Part 3: Enrofloxacin and ciprofloxacin 2023-12-29发布 2024-07-01实施 中华人民共和国海关总署发布̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э ̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规 定起草。 本文件是SN/T 5644《出口食品中农用化学物质的快速检测方法 拉曼光谱法》的第3部分。 SN/T 5644已经发布了以下部分: ———第1部分:总则; ———第2部分:孔雀石绿和结晶紫; ———第3部分:恩诺沙星和环丙沙星; ———第4部分:多菌灵; ———第5部分:噻菌灵; ———第6部分:腈菌唑; ———第7部分:毒死蜱; ———第8部分:三唑磷; ———第9部分:地虫硫磷; ———第10部分:亚胺硫磷。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本文件起草单位:上海海关动植物与食品检验检疫技术中心、上海体育学院、合肥海关技术中心、上 海如海光电科技有限公司、上海安谱实验科技股份有限公司。 本文件起草人:曹晨、邓晓军、赵超敏、霍忆慧、任硕、王敏、伊雄海、郭德华、宋伟、韩芳、 于永爱、张翘楚。 ⅠSN/T5644.3—2023̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 引 言 出口食品中农用化学物质的快速检测方法是为进一步确保出口食品质量安全,为农用化学物质的 风险研判提供现场监测技术手段的方法。建立出口食品中农用化学物质的快速检测标准方法体系是出 口食品监管机构的重要任务。本系列标准SN/T 5644《出口食品中农用化学物质的快速检测方法 拉曼 光谱法》旨在建立基于拉曼光谱法的出口食品中农用化学物质的快速定性筛查方法,拟由10个部分 组成。 ———第1部分:总则。目的在于为出口食品中农用化学物质的拉曼光谱快速检测方法的建立提供 通用要求。 ———第2部分:孔雀石绿和结晶紫。目的在于为出口水产品中的孔雀石绿和结晶紫提供快速定性 筛查方法。 ———第3部分:恩诺沙星和环丙沙星。目的在于为出口动物源性食品中的恩诺沙星和环丙沙星提 供快速定性筛查方法。 ———第4部分:多菌灵。目的在于为出口水果、蔬菜中的多菌灵提供快速定性筛查方法。 ———第5部分:噻菌灵。目的在于为出口水果、蔬菜中的噻菌灵提供快速定性筛查方法。 ———第6部分:腈菌唑。目的在于为出口植物源性食品中的腈菌唑提供快速定性筛查方法。 ———第7部分:毒死蜱。目的在于为出口植物源性食品中的毒死蜱提供快速定性筛查方法。 ———第8部分:三唑磷。目的在于为出口植物源性食品中的三唑磷提供快速定性筛查方法。 ———第9部分:地虫硫磷。目的在于为出口水果中的地虫硫磷提供快速定性筛查方法。 ———第10部分:亚胺硫磷。目的在于为出口水果中的亚胺硫磷提供快速定性筛查方法。 ⅡSN/T5644.3—2023̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 出口食品中农用化学物质的快速检测方法 拉曼光谱法 第3部分:恩诺沙星和环丙沙星 1 范围 本文件规定了动物源性食品中恩诺沙星、环丙沙星药物残留量的快速测定方法。 本文件适用于猪肉、牛肉、鱼、液态奶中恩诺沙星、环丙沙星残留量的快速测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 21312 动物源性食品中14种喹诺酮药物残留检测方法 液相色谱-质谱/质谱法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 原理 不同物质具有与其分子结构相对应的特征拉曼光谱。猪肉、牛肉、鱼、牛奶样品经溶剂提取,离心, 用基于表面增强拉曼试剂对信号增强后,进行拉曼光谱扫描。以736 cm-1±5 cm-1、785 cm-1± 5 cm-1、1 345 cm-1±5 cm-1、1 395 cm-1±5 cm-1处的拉曼特征峰作为恩诺沙星、环丙沙星特征峰进 行快速筛查定性分析。 5 试剂和材料 除另有规定外,本文件所用试剂均为分析纯或以上,水为GB/T 6682规定的一级水。 5.1 试剂 5.1.1 乙酸。 5.1.2 硫酸。 5.1.3 二氯甲烷。 5.1.4 碘化钾。 5.1.5 乙酸溶液(5%):准确吸取乙酸(5.1.1)50 mL于1 L容量瓶中,用水溶解并定容至刻度,混匀后 备用。 1SN/T5644.3—2023̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 5.1.6 碘化钾溶液(1 mol/L):准确称取8.3 g碘化钾于50 mL容量瓶中,用水溶解并定容至刻度,混 匀后备用。 5.1.7 硫酸溶液(1%):准确吸取硫酸(5.1.2)10 mL于1 L容量瓶中,用水溶解并定容至刻度,混匀后 备用。 5.1.8 表面增强试剂:纳米银溶胶:将100 mL 1 mmol/L硝酸银溶液加热至沸腾,沸腾后迅速加入 1.4 mL 1%柠檬酸三钠溶液,快速搅拌,反应20 min后取出冰浴冷却,冷却后装入棕色试剂瓶中, 0 ℃~4 ℃冷藏保存,有效期1个月。粒子制备完成后用紫外-可见分光光度计测试粒子最大吸收波长, 透射电子显微镜分析粒子形貌。 注: 本文件所述纳米表面增强试剂及促凝剂信息及操作步骤是为给方法使用者提供方便,在使用本文件时不做限 定。文件使用者在使用替代试剂或操作步骤前,对其进行考察,满足本文件规定的各项性能指标。 5.2 参考物质 5.2.1 恩诺沙星:CAS号93106-60-6,相对分子质量359.40。 5.2.2 环丙沙星:CAS号93107-08-5,相对分子质量331.35。 5.2.3 标准溶液配制:恩诺沙星和环丙沙星混合标准工作液(100 ng/mL):精密称取恩诺沙星、环丙沙 星标准品(5.2.1和5.2.2)适量,分别置于10 mL容量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,制成总浓 度为100 ng/mL(恩诺沙星和环丙沙星各50 ng/mL)的标准储备液。于4 ℃避光保存。 6 仪器和设备 6.1 便携式拉曼光谱仪:稳频激光光源:发射波长为785 nm±1 nm,线宽<0.1 nm,能量≥250 mW; 光谱分辨率≤15 cm-1;光谱响应范围0 cm-1~5 000 cm-1,或大于该响应范围。 6.2 移液器:20 μL、200 μL、1 mL和5 mL。 6.3 涡旋振荡器。 6.4 离心机:转速≥4 000 r/min。 6.5 电子天平:感量为0.01 g、0.000 1 g。 6.6 塑料具塞离心管:2 mL、15 mL。 7 样品处理 7.1 提取 取1.0 g样品加到15 mL离心管中,加入3 mL (液态奶为1 mL)5%乙酸溶液,涡旋30 s混匀,放 入离心机,4 000 r/min转速离心3 min。取500 μL上清液于2 mL离心管待净化。 7.2 净化 提取液(见7.1)中加入1 mL二氯甲烷;涡旋30 s后4 000 r/min转速离心1 min;取200 μL二氯 甲烷层于2 mL离心管中,加入200 μL 5%乙酸溶液,混匀后取上层清液待测。 8 拉曼光谱测定 8.1 测定参考条件 测定参考条件如下: 2SN/T5644.3—2023̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э a) 激光能量≥250 mW; b) 数据采集时间≥1 s。 8.2 表面增强和测定 在仪器样品池中依次加入100 μL待测液(见7.2)、200 μL表面增强试剂、20 μL 1 mol/L 碘化钾溶 液和20 μL1%硫酸溶液,快速均匀,静置30 s后上机检测。 8.3 质控试验 8.3.1 阴性对照 称取空白试样,按照6.1和6.2步骤与样品同法操作。 8.3.2 阳性对照 准确称取空白试样1 g置于15 mL具塞离心管中,加入0.5 mL混合标准工作液(100 ng/mL) (5.2.1),使恩诺沙星和环丙沙星浓度总和为50 ug/kg,按照第7章样品处理同法操作。 9 检测过程 9.1 定性判定 仪器软件将测试结果与标准谱图中的恩诺沙星和环丙沙星进行匹配计算,根据谱图736 cm-1± 5 cm-1、785 cm-1±5 cm-1、1 345 cm-1±5 cm-1、1 395 cm-1±5 cm-1处特征拉曼光谱,对样品中的恩 诺沙星、环丙沙星进行结果判定:显示测试结果并判定阴性或阳性。阴性代表该样品不含有恩诺沙星、 环丙沙星或低于50 μg/kg,阳性则代表该样品含有恩诺沙星、环丙沙星且大于或等于50 μg/kg。恩诺 沙星、环丙沙星标准溶液表面增强拉曼光谱图见附录