̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э I C S6 7.0 5 0 C C SX0 4 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 S N/T5 6 3 9—2 0 2 4 出口畜禽肉中松香酸和脱氢松香酸的测定 D e t e r m i n a t i o n o f a b i e t i c a c i d a n d d e hyd r o a b i e t i c a c i d i n l i v e s t o c k a n d po u l t ry m u s c l e s f o r e xpo r t 2 0 2 4-1 2-1 6发布 2 0 2 5-0 6-0 1实施 中华人民共和国海关总署 发 布̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э ̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 前 言 本文件按照 G B/T 1. 1—2 0 2 0《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则 》的规 定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别专利的责任 。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口 。 本文件起草单位 :中华人民共和国广州海关 、中国肉类食品综合研究中心 、中国海关科学技术研究 中心。 本文件主要起草人 :李菊、谢建军、曾广丰、古瑾、王璐、韩深、席静、董洁、陈文锐、王志元、侯颖烨。 ⅠS N/T5 6 3 9—2 0 2 4̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э ̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 出口畜禽肉中松香酸和脱氢松香酸的测定 1 范围 本文件规定了出口畜禽肉中松香酸和脱氢松香酸含量的高效液相色谱测定方法及液相色谱 -质谱/ 质谱确证方法 。 本文件适用于鸡肉 、鸭肉、鹅肉、猪肉、牛肉、羊肉中松香酸及脱氢松香酸残留量的测定和确证 ,其他 畜禽肉类食品可参照执行 。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件 ;不注日期的引用文件 ,其最新版本 (包括所有的修改单 )适用于 本文件。 G B/T 6 6 8 2 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义 。 4 原理 试样中的松香酸和脱氢松香酸用乙腈提取 ,经硅胶键合 C1 8净化剂净化 ,用液相色谱二极管阵列或 紫外检测器测定 ,外标法定量 ,液相色谱 -质谱/质谱法确证 。 5 试剂和材料 除非另有规定 ,仅使用分析纯试剂 ,试验用水应符合 G B/T 6 6 8 2中规定的一级水 。 5.1 乙腈:色谱纯。 5.2 甲醇:色谱纯。 5.3 甲酸:色谱纯 5.4 磷酸:优级纯。 5.5 无水硫酸镁 。 5.6 氯化钠。 5.7 柠檬酸钠 。 5.8 柠檬酸氢二钠 。 5.9 0. 1% 磷酸水溶液 :吸取1 mL磷酸(5. 4) ,加水定容至 1 0 0 0 mL,混匀。 5.1 0 松香酸 :纯度大于等于 9 8%,松香酸标准物质的信息见附录 A中表A. 1。 5.1 1 脱氢松香酸 :纯度大于等于 9 8%,脱氢松香酸标准物质的信息见附录 A中表A. 1。 5.1 2 松香酸标准储备溶液 (1 0 0 0 mg/L) :准确称取 1 0 mg松香酸标准品 (5. 1 0)于小烧杯中 ,加少量 1S N/T5 6 3 9—2 0 2 4̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 甲醇(5. 2)溶解,移入1 0 mL容量瓶中 ,用甲醇定容至刻度 ,摇匀,-1 8 ℃避光保存 ,有效期为 6个月。 5.1 3 脱氢松香酸标准储备溶液 (1 0 0 0 mg/L) :精密称取 1 0 mg脱氢松香酸标准品 (5. 1 1)于小烧杯 中,加少量甲醇 (5. 2)溶解,移入1 0 mL容量瓶中 ,用甲醇定容至刻度 ,摇匀,-1 8 ℃避光保存 ,有效期为 6个月。 5.1 4 标准中间溶液 (1 0 0. 0 mg/L) :分别量取 1 mL标准储备溶液 (5. 1 2和5. 1 3) ,用乙腈(5. 1)稀释并 定容至1 0 mL,摇匀,-1 8 ℃避光保存 ,有效期为 1个月。 5.1 5 标准工作溶液 :准确量取标准中间溶液 (5. 1 4) ,用乙腈提取液稀释成 0. 1 0 mg/L、0. 2 0 mg/L、0. 5 0 mg/L、1. 0 0 mg/L、2. 0 0 mg/L和5. 0 0 mg/L的系列浓度标准工作溶液 ,现配现用 。 5.1 6 硅胶键合 C1 8净化剂:粒径5 0 μm。 5.1 7 0. 2 2 μm微孔滤膜 ,有机系。 6 仪器和设备 6.1 高效液相色谱仪 :配二极管阵列检测器 (P DA)或紫外检测器 。 6.2 高效液相色谱 -质谱/质谱仪:配有电喷雾离子源 (E S I) 。 6.3 电子天平 :感量为0. 0 1 g和0. 1 mg。 6.4 组织捣碎机 。 6.5 涡旋混合器 。 6.6 高速离心机 :转速不低于 4 0 0 0 r/m i n。 6.7 微型高速离心机 :转速不低于 1 0 0 0 0 r/m i n。 6.8 氮吹仪。 7 试样的制备与保存 7.1 在制样的操作过程中 ,应防止样品污染或发生残留量含量的变化 。 7.2 从所取样品中取出有代表性样品 (有皮畜禽肉类样品带皮 )约5 0 0 g,用组织捣碎机捣碎 ,装入洁净 容器,一份作为试样 ,一份作为留样 ,密封并做好标识 ,于-1 8 ℃下保存。 8 测定步骤 8.1 提取 称取约5 g试样(精确到0. 0 1 g)于5 0 mL离心管中 ,加入乙腈 (5. 1)1 0 mL、水1 0 mL,涡旋混匀 2 m i n后,加入无水硫酸镁 (5. 5)4. 5 g、氯化钠(5. 6)1 g、柠檬酸钠 (5. 7)0. 3 g、柠檬酸氢二钠 (5. 8) 0. 7 g,涡旋混合器中振摇 2 5 m i n,4 0 0 0 r/m i n离心5 m i n,待净化。 8.2 净化 取1 mL上清液(见8. 1)于装有1 0 0 mg C1 8(5. 1 6)的2 mL离心管中 ,涡旋摇匀 2 m i n,1 0 0 0 0 r/ m i n离心5 m i n,取上清液过滤膜 (5. 1 7) ,供高效液相色谱仪测定 。 8.3 测定 8.3.1 液相色谱条件 由于测试结果取决于所使用的仪器 ,因此不可能给出液相色谱分析的通用参数 。设定的参数应保 2S N/T5 6 3 9—2 0 2 4̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 证色谱分析时被测组分与其他组分能得到有效的分离 ,下列给出的参数可供参考 。 液相色谱参考条件如下 : a) 色谱柱:C1 8柱,1 0 0 mm ×2. 1 mm(内径) ,粒度3. 5 μm或性能相当者 ; b) 流动相:0. 1%磷酸水溶液和乙腈 ,梯度洗脱 ,洗脱程序见表 1; c) 流速:0. 5 mL/m i n; d) 进样量:1 0 μL; e) 柱温:3 5 ℃; f) 检测波长 :松香酸2 4 0 n m,脱氢松香酸 2 1 0 n m。 表1 梯度洗脱程序 时间/m i n A/%(0. 1%磷酸水溶液 ) B/%(乙腈) 0 7 0 3 0 4 7 0 3 0 1 5 1 0 9 0 1 7 1 0 9 0 1 7. 5 7 0 3 0 2 0 7 0 3 0 8.3.2 标准工作曲线的绘制 按8. 3. 1的测定条件 ,将标准工作溶液浓度由低到高依次进样测定 ,以目标物色谱峰的峰面积为纵 坐标,与其对应的溶液浓度为横坐标作图 ,绘制标准工作曲线 。高效液相色谱图见附录 B中的图B. 1 和图B. 2。 8.3.3 试样测定 按8. 3. 1的条件测定样品和标准工作溶液 ,如果检测的松香酸和脱氢松香酸的色谱峰保留时间与 标准品保留时间相差不超过 ±2. 5 %,则可初步确认样品中存在松香酸和脱氢松香酸 。必要时,阳性样 品需用液相色谱 -质谱/质谱法进行确认试验 (见附录C) ,松香酸或脱氢松香酸定性离子对的相对丰度 (是用相对于最强离子丰度的强度百分比表示 )与浓度相当基质标准工作溶液的相对丰度一致 ,相对丰 度允许偏差不超过表 C. 2规定的范围 ,且每个定性离子的信噪比均 ≥ 3,则可判断样品中存在松香酸和 脱氢松香酸 。松香酸和脱氢松香酸的多反应监测色谱图见附录 D中的图D. 1和图D. 2。选取响应值 相近的基质混合标准工作液一起进行色谱分析 ,基质混合标准工作液和待测液中松香酸和脱氢松香酸 的响应值在仪器线性范围内 ,超过线性范围则应稀释后再进样分析 。外标法定量 。 8.4 空白试验 试剂空白试验 :除不加试样外 ,均按上述步骤进行 。 试样空白试验 :取空白基质试样 ,除不加标准溶液外 ,均按上述步骤进行 。 9 计算结果与表述 试样中松香酸或脱氢松香酸含量由色谱数据处理软件或按公式 (1)计算获得 ,计算结果应扣除空 白值。 3S N/T5 6 3 9—2 0 2 4̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э X=C×V×1 0 0 0 m×1 0 0 0………………………………( 1 ) 式中: X— — —试样中松香酸或脱氢松香酸含量的数值 ,单位为毫克每千克 (mg/kg) ; C— — —从标准工作曲线得到的松香酸或脱氢松香酸浓度的数值 ,单位为微克每升 (μg/L) ; V— — —试样溶