ICS 67.050 SN CCS X 04 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 5597—2024 大麻二酚和 出口食品中四氢大麻酚、 大麻酚的测定 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of tetrahydrocannabinol, cannabidiol and cannabinol in food t-LC-MS/MS method 2024-12-31 发布 2025-07-01实施 中华人民共和国海关总署发 布 SN/T 5597—2024 前言 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本文件起草单位：中华人民共和国福州海关、中华人民共和国拉萨海关、中华人民共和国杭州海关、 中华人民共和国长春海关、中国标准化研究院、福建工程学院、吉林紫鑫药业股份有限公司 本文件主要起草人：唐庆强、杨方、叶洪、曹晓钢、王君、兰韬、曹丹、陈金凤、张勋、胡婷婷、封有顺、 齐安乔。 以正式出版文本为准 SN/T 5597—2024 出口食品中四氢大麻酚、大麻二酚和 大麻酚的测定 液相色谱-质谱／质谱法 1范围 本文件描述了食品中四氢大麻酚、大麻二酚和大麻酚的液相色谱-质谱/质谱测定方法。 本文件适用于火麻油、橄榄油、火麻仁、大豆、牛肉、面包、面粉、牛奶、蜂蜜、巧克力、啤酒和饮料中四 氢大麻酚、大麻二酚和大麻酚的测定和确证。 规范性引用文件 2 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 。其中,注日期的引用文 本文件。 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 6682 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定 4方法提要 5 试剂和材料 除另有规定外,所用试剂均为分析纯。水为 GB/T 6682 规定的一级水。 5.1甲醇:色谱纯 5.2 乙腈:色谱纯。 5.3乙酸铵:色谱纯 5.4氯化钠。 5.5三氯乙酸。 5.6²50%甲醇水溶液:量取 50 mL甲醇（5.1）,用水定容至100mL。 5.775%甲醇水溶液:量取 75 mL甲醇(5.1),用水定容至100 mL。 5.810 mmol/L 乙酸铵水溶液:准确称取 0.77 g 乙酸铵（5.3）,加适量水溶解后,用水定容至1 L 5.9四氢大麻酚标准物质（△9-Tetrahydrocannabinol,△9-THC):C21 H3oO2，CAS No.1972-08-3，含量 ≥0.1 mg/mL. 5.10大麻二酚标准物质(Cannabidiol,CBD):C21 H2sO2,CAS No.13956-29-1,含量≥0.1 mg/mL。 5.11大麻酚标准物质（Cannabinol,CBN）:C21H3oO2,CAS No.521-35-7,含量≥0.1 mg/mL。 1 SN/T 5597—2024 5.12同位素内标标准物质（△9-Tetrahydrocannabinol-d3，△9-THC-d3）:C21 H27 D;O2，CAS No.81586- 39-2,含量≥0.1 mg/mL。 5.13混合标准储备液（10.0 mg/L):分别准确吸取适量 3 种大麻标准物质（5.9～5.11)于同一 25 mL 容量瓶中，用甲醇(5.1)定容至刻度。此溶液于一20℃避光条件下可储存6个月。 5.14内标储备液（10.0 mg/L）:准确吸取适量同位素内标标准物质（5.12)于 25 mL 容量瓶中,用甲醇 （5.1）定容至刻度。此溶液于一20℃避光条件下可储存6个月。 5.15混合标准中间液（1.0 mg/L）:准确移取 10.0 mL 混合标准储备液（5.13）于 100 mL 容量瓶中，用 甲醇(5.1)定容至刻度。现用现配。 5.16内标中间液（1.0 mg/L）:准确移取 10.0 mL内标储备液（5.14)于100 mL 容量瓶中,用甲醇（5.1) 定容至刻度。现用现配。 （9)（ /)/0/0/0/0/0) 标)的混合标准工作曲线。现用现配。 5.18Captiva EMR-Lipid 固相萃取柱:100 mg,3 mL,或相当者。使用前用 2 mL 乙腈活化,并保持柱 体湿润。 5.19 二乙烯苯-N-乙烯基吡咯烷酮(HLB)固相萃取柱：60 mg,3 mL,或相当者。使用前依次用 5 mL 甲醇(5.1）、5 mL水活化,并保持柱体湿润。 5.20滤膜:有机系,0.22μm。 6仪器和设备 6.1 电喷雾离子源（ESI）。 天平：感量0.01g。 6.2 6.3 组织捣碎机。 6.4 超声恒温水浴仪 6.5 氮吹仪。 6.6 高速离心机:转速≥1 0 000 r/min。 涡旋振荡器。 6.7 6.8 固相萃取装置。 7试样制备与保存 7.1试样制备 火麻仁、牛肉、大豆、面包等食品试样放人组织捣碎机中搅碎混匀，巧克力等糖果试样于一70℃或 液氮中冷冻后放入组织捣碎机中均质。样品充分混匀，均分成两份，分别装入清洁容器内，密封并做标 记；火麻油、面粉、橄榄油、牛奶、蜂蜜、饮料和啤酒等试样分别装人清洁容器内，含二氧化碳的饮料和酒 应先在超声波水浴中超声15 min去除气体,密封并做标记 7.2试样保存 制备后的试样均在一4℃下保存。 2 SN/T 5597—2024 8测定步骤 8.1提取 8.1.1火麻油、橄榄油试样 称取约2 g试样（精确至 0.01 g）于 50 mL离心管中,加人 100 μL同位素内标中间液（5.16）和 10 mL 乙腈（5.2），混匀后用涡旋振荡器振荡 30 s，50℃超声波提取 15 min，10 000 r/min 下离心 5 min,必要时置于一18 ℃冰箱中冷冻 2 h 以进一步去除油脂。准确移取 5 mL上层溶液,待净化。 8.1.2火麻仁、大豆、牛肉、面包、蜂蜜、巧克力、面粉等试样 称取 2 g试样（精确至 0.01g)于 50 mL离心管中,加人 100 μL同位素内标中间液（5.16)和 10 mL 甲醇（5.1）,混匀后用涡旋振荡器振荡 30 s,50℃超声波提取 15 min，于 10 000 r/min下离心5 min,准 确移取 5 mL上层溶液于另一 50 mL离心管 A 中,并加人 5 mL水稀释后涡旋混匀 30 s,10 000 r/min 下离心5min。移取全部上清液于另一50 mL离心管B中,向离心管 A残渣中加人 1 mL 50%甲醇水 溶液（5.6)后涡旋混匀30 s,10000 r/min下离心5min，合并全部上清液于离心管B中,待净化 8.1.3牛奶试样 称取2g试样（精确至 0.01g)于 50 mL离心管中,加人100μL同位素内标中间液（5.16）、5g氯化 钠（5.4)和 10 mL甲醇（5.1）,混匀后用涡旋振荡器振荡 30 s,50℃超声波提取 15 min,再加人 1g 三氯 乙酸（5.5）,静置 15 min～20 min沉淀蛋白质后，于 10 000 r/min下离心5 min,准确移取5 mL上层溶 液于另一 50 mL离心管 A 中,并加人 5 mL水稀释后涡旋混匀 30 s,10 000 r/min 下离心5min。移取 全部上清液于另一50 mL离心管B中,向离心管 A残渣中加人 1mL 50%甲醇水溶液（5.6)后涡旋混 匀30 s,10000 r/min下离心5min,合并全部上清液于离心管B中，待净化。 8.1.4饮料、啤酒等液体试样 称取2g试样（精确至0.01g)于 50 mL离心管中,加人100μL同位素内标中间液（5.16）、5g氯化 钠（5.4)和10mL甲醇（5.1）,混匀后用涡旋振荡器振荡30 s,50℃超声波提取15 min，于 10000 r/min 下离心5 min,准确移取 5 mL上层溶液,加人5 mL水混匀后待净化 8.2净化 8.2.1火麻油、橄榄油试样净化 5 mL 乙（5.2)以 1 mL/min 流速洗脱于 10 mL玻璃试管或合适容器中,减压抽干 30 s。收集全部流 出液和洗脱液，于 40℃下用氮气吹干后，立即加入1 mL 75%甲醇水溶液（5.7），涡旋混合1 min，经微 孔滤膜(5.20)后，供液相色谱-质谱/质谱测定。 8.2.2其他试样净化 后,用 5 mL50%甲醇水溶液（5.6)以 1 mL/min 流速淋洗小柱,弃去全部淋洗液,并负压抽干小柱。用 干后，立即加人1 mL 75%甲醇水溶液（5.7）,涡旋混合1 min,经微孔滤膜（5.20)后，供液相色谱-质谱/ 质谱测定。 3 SN/T 5597—2024 8.3测定 8.3.1 液相色谱条件 8.3.1.1 色谱柱:C18,50 mmX2.1 mm(内径）,1.7 μm,或性能相当者。 8.3.1.2 柱温:室温。 8.3.1.3 流动相:10 mmol/L乙酸铵水溶液十甲醇（2十8,体积比）。 8.3.1.4 流速:0.2 mL/min。 8.3.1.5 进样量:10 μL。 8.3.2 质谱条件 8.3.2.1 离子源：电喷雾离子源（ESI）。 8.3.2.2 扫描方式：正离子扫描 8.3.2.3检测方式：多反应监测模式(MRM）。 8.3.2.4雾化气、气帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气及其他合适气体；使用前应调节各气体流量 以使质谱灵敏度达到检测要求。喷雾电压、去集簇电压、碰撞能等电压值应优化至最佳灵敏度，其他参 考质谱参数见附录 A。 8.3.3液相色谱-质谱/质谱测定 8.3.3.1定性测定 版文本