ICS 67.050 SN CCS X 04 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 5596—2024 出口葡萄酒中多种吡唑类杀菌剂的测定 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of pyrazole fungicides in grape wine for export- 2024-12-31 发布 2025-07-01实施 中华人民共和国海关总署 发布 SN/T 5596—2024 前言 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本文件起草单位：中华人民共和国杭州海关、浙江树人学院。 本文件主要起草人：胡贝贞、李舟、雷美康、韩超、刘滨、陈祥准、张文华。 以正式出版文本为准 SN/T 5596—2024 出口葡萄酒中多种吡唑类杀菌剂的测定 液相色谱-质谱/质谱法 1范围 本文件描述了葡萄酒中6种吡唑类杀菌剂（呋吡菌胺、吡咪唑、氟唑菌酰胺、氟唑菌苯胺、联苯吡菌 胺、吡唑萘菌胺）残留量的液相色谱-质谱/质谱测定方法。 本文件适用于葡萄酒中呋吡菌胺、吡咪唑、氟唑菌酰胺、氟唑菌苯胺、联苯吡菌胺、吡唑萘菌胺残留 量的定量测定和确证。 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款， 。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3术语和定义 4方法提要 化后用液相色谱-质谱/质谱仪测定，外标法定量。 5 试剂与材料 除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682中规定的一级水。 5.1甲醇：色谱纯。 5.2乙腈：色谱纯。 5.3甲酸：色谱纯。 5.4甲醇/水混合溶液（V/V,2：3）：量取40mL甲醇到100mL量筒中，加水至刻度 5.5C 0.1%甲酸溶液：取1mL甲酸到1L量筒中,加水至刻度。 5.6标准品：吡菌胺（Furametpyr，Ci?H2oClN:O2，CAS号：123572-88-3）、吡咪唑（Rabenzazole， C12H12N4，CAS号：40341-04-6）、氟唑菌酰胺（Fluxapyroxad,Ci：H12F,N:O，CAS号：907204-31-3）、氟 唑菌苯胺（Penflufen，C18H24FNO，CAS号：494793-67-8）、联苯吡菌胺（Bixafen，C18H12Cl2F：N3O， CAS号：581809-46-3）、吡唑茶菌胺（Isopyrazam，C2oH23F2N;O，CAS号：881685-58-1），纯度≥95%。 5.7标准储备溶液：准确称取50mg的各标准物质（5.6），用甲醇（5.1）溶解并定容至100mL，分别配制 成质量浓度为500μg/mL的标准储备溶液，0℃～4℃保存，有效期为6个月。 1 SN/T 5596—2024 5.8混合标准中间溶液：各取0.2mL的各种储备溶液，用甲醇（5.1）稀释并定容至100mL，配制成 1.0μg/mL的混合标准中间溶液，此溶液在0℃～4℃保存，有效期为2周 5.9标准工作溶液：吸取一定量的混合标准中间溶液（5.8），用甲醇分别配制成5ug/L、10μg/L、 20μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L的系列质量浓度标准工作溶液，此工作溶液临用现配。 5.10N-乙烯基吡咯烷酮-二乙烯苯共聚材质的固相萃取柱（HLB柱）:200mg/6mL或相当者，使用前 依次用3mL甲醇、3mL水活化，保持柱体湿润 5.11微孔滤膜：0.22μm，有机相型。 6仪器和设备 6.1液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。 6.2 固相萃取装置。 6.3氮吹仪：控温范围为30℃～70℃。 6.4 涡旋混合器， 6.5 分析天平：感量分别为0.01mg和0.01g。 7 试样制备与保存 本为准 酒，开启后使用超声波去除气泡后待测，另一瓶未开封的作为留样样品，在干燥、阴凉、避光处保存。在 取样过程中，防止样品受到污染或发生残留物含量的变化 8测定步骤 8.1提取和净化 式出版 称取5g(精确至0.01g)葡萄酒样品于20mL玻璃烧杯中，加入3mL水稀释，此为待检液。将待 检液转移至固相萃取柱（5.10）内，以小于2mL/min流速滴下，待样品溶液全部流出后，再依次用6mL 水和6mL甲醇/水混合溶液（5.4）淋洗，将淋洗液抽干，用6mL甲醇洗脱（此过程流速小于2mL/min）。 洗脱液在40℃水浴中氮气吹至近干，加入2mL甲醇漩涡混合溶解，过微孔滤膜（5.11），此为样液，供液相 色谱-质谱/质谱测定。 8.2 2测定 8.2.1 液相色谱-质谱/质谱条件 8.2.1.1 液相参考条件为： a) 色谱柱：C1g柱，100mm×2.1mm，粒径2um，或相当者。 b） 柱温：40℃。 流动相：梯度洗脱程序见表1。 d) 流速:0.3mL/min。 e）进样量:l μL。 2 SN/T 5596—2024 表1梯度洗脱条件 时间/min 乙腈/% 0.1%甲酸/% 0 30 70 3.0 80 20 6.0 80 20 6.01 30 70 7.5 30 70 8.2.1.2 质谱条件为： a) 电离方式：电喷雾电离，正离子模式。 b） 扫描方式：多反应监测（MRM）。 c） 其他质谱条件见附录A。 为准 8.2.2基质匹配工作曲线 选择与被测样品性质相同或相近的阴性样品2份，按照8.1的步骤进行前处理，共制得空白基质液 4mL。分别取制得的空白基质液6份，每份0.5mL，于5mL尖底玻璃离心管中，40℃水浴中氮气吹 干，再依次吸取5μg/L、10μg/L、20μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L的系列质量浓度标准工作溶液 (5.9)各0.5mL，涡旋复溶后制得5μg/L、10μg/L、20μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L的基质匹配 标准工作溶液，供液相色谱-质谱/质谱测定。！ 以农药的定量离子对峰面积为纵坐标，相对应的基质匹配 标准工作溶液质量浓度为横坐标，绘制基质匹配工作曲线。6种杀菌剂标准溶液的多反应监测质量色 谱图见附录B。 8.2.3 定量测定 按8.2.1的仪器条件测定基质匹配标准工作溶液和样液，以基质匹配外标曲线法计算样液中吡唑 类杀菌剂的含量。如果样液中吡唑类杀菌剂的含量超出标准曲线范围，应用甲醇稀释后再进行分析。 8.2.4 定性测定 标准偏差在土2.5%之内；样液中目标化合物的定性离子的相对丰度与质量浓度相当的基质匹配标准工 作溶液一致，相对丰度偏差不超过表2规定的范围，则可判断样品中存在对应的待测物。 表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度/% >50 >20～50 >10~20 ≤10 允许的最大偏差/% ±20 ±25 ±30 ±50 8.3空白试验 除不加样品外，均按上述操作步骤进行。 9 结果计算和表述 按式（1)计算样品中呋吡菌胺、吡咪唑、氟唑菌酰胺、氟唑菌苯胺、联苯吡菌胺、吡唑茶菌胺的含量， 3 SN/T 5596—2024 并保留3位有效数字。 _(C-C。)×V×1 000 X= (1) mX1000 式中： 样品中呋吡菌胺、吡咪唑、氟唑菌酰胺、氟唑菌苯胺、联苯吡菌胺、吡唑萘菌胺的含量，单 位为微克每千克（μg/kg）； C 根据标准曲线得出的样液中呋吡菌胺、吡咪唑、氟唑菌酰胺、氟唑菌苯胺、联苯吡菌胺、吡 唑萘菌胺的质量浓度，单位为微克每升（μg/L)； C。 根据标准曲线得出的空白试液中呋吡菌胺、吡咪唑、氟唑菌酰胺、氟唑菌苯胺、联苯吡菌 胺、吡唑萘菌胺的质量浓度，单位为微克每升（μg/L)； V 样液最终定容体积，单位为毫升（mL）； 1 000- 换算系数； m 样品的质量，单位为克（g）。 10 定量限、检出限和正确度（加标回收率） 10.1 定量限 本方法的定量限(LOQ):5.0 μg/kg。 10.2检出限 本方法的检出限（LOD)：2.0μg/kg 10.3 正确度（加标回收率） 葡萄酒中6种杀菌剂的回收 SN/T 5596—2024 附录A （资料性） 参考质谱条件1) 参考质谱条件如下： a) 离子源接口电压：4.0kV； b) 雾化气（氮气/空气）：3.0L/min； c) 加热气（空气）：10L/min； d) 干燥气（氮气）：10L/min； e) 碰撞气（氩气）：270kPa； f) 离子源温度：300℃； g) 脱溶剂温度：250℃； h) 加热块温度：400℃； i) 检测器电压：2.12kV； j) 母离子、子离子、保留时间及离子对质谱参数见表A.1。 本为准 表A.1 母离子、子离子、保留时间及离子对质谱参数 化合物 母离子（m/） 子离子（m/） 保留时间/min Q1电压/V 碰撞电压/eV Q3电压/V 157* 3.15 16 32 16 呋吡菌胺 334 290 -16 -20 -20 172* -10 22 -18 吡咪唑 213 3.24 118 -21 36 20 362 -18 -15 -17 氟唑菌酰胺 382 3.76 342 19 -21 -16 234* 15 -18 -16 氟唑菌苯胺 318 4.10 141 -15 -31 - 27 394* 12 -16 -19 联苯吡菌胺 414 4