ICS 67.050 SN CCS C 53 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 5594—2024 出口动物源食品中加米霉素残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of gamithromycin residue in foodstuffs of animal origin for export- 2024-12-31 发布 2025-07-01实施 中华人民共和国海关总署 发布 SN/T 5594—2024 前言 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本文件起草单位：中华人民共和国石家庄海关、中华人民共和国拱北海关。 本文件主要起草人：张海超、田浩、贾海涛、王敬、艾连峰、马育松、李玮。 以正式出版文本为准 SN/T55942024 出口动物源食品中加米霉素残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 1范围 本文件描述了出口动物源食品中加米霉素残留量的液相色谱-质谱/质谱测定方法 本文件适用于猪肉、猪脂肪、猪肝、猪肾、猪皮、牛肉、牛脂肪、牛肝、牛肾、牛奶、羊肉、羊脂肪、羊肝、 羊肾、鸡肉、鸡脂肪、鸡肝、鸡肾和鸡蛋等动物源食品中加米霉素残留量的测定。 2 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于 本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定 4方法提要 测定，内标法定量。 5 试剂和材料 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水。 5.1甲醇：色谱级。 5.22 乙睛：色谱级。 5.3甲酸：色谱级。 5.4 氨水：色谱级，含量为25%～28%。 5.5 无水硫酸钠：650℃烘烤4h，在干燥器内冷却至室温，贮于密封瓶中备用。 5.6 5%氨水甲醇溶液：量取5.0mL氨水（5.4），用甲醇（5.1)定容至100mL，混匀。 5.70.1%甲酸水溶液：量取1.0mL甲酸（5.3），用水定容至1000mL，混匀。 混匀。 5.9加米霉素标准物质（C4Hz6NzO12，CAS号：145435-72-9）：纯度大于或等于99%。 5.10加米霉素-D4标准物质（C40H72D4N2O12）：纯度大于等于95%。 5.11加米霉素标准储备液：准确称取加米霉素标准物质（5.9)10mg（精确至0.0001g），用甲醇（5.1） 1 SN/T5594—2024 溶解，配制成质量浓度为1.0mg/mL的标准储备液，一18℃以下避光保存，有效期12个月。 5.12加米霉素-D内标储备液：准确称取加米霉素-D，标准物质（5.10)10mg（精确至0.0001g），用甲 醇（5.1）溶解，配制成质量浓度为1.0mg/mL的标准储备液，一18℃以下避光保存，有效期12个月。 配制成质量浓度为1μg/mL的标准中间溶液，于0℃～4℃冰箱内储存，有效期3个月。 5.14加米霉素-D4内标工作溶液：根据需要准确移取适量加米霉素-D4内标储备液（5.12），用甲醇 （5.1)稀释，配制成质量浓度为1μg/mL的标准中间溶液，于0℃～4℃冰箱内储存，有效期3个月 5.15标准工作溶液：根据需要，用初始流动相稀释标准中间溶液（5.13）成适合质量浓度的工作溶液， 并保证加米霉素-D4内标质量浓度为10ng/mL。 5.17 微孔滤膜：0.22μm，通用型。 6仪器和设备 6.1 液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。 6.2分析天平：感量为0.0001g和0.01g。 6.3组织捣碎机。 6.4均质器：转速不低于10000r/min。 6.5振荡器。 6.6涡旋混匀器。 6.7 离心机：转速不低于10000r/min 6.8氮气吹干仪 6.9 离心管：聚乙烯，具塞，50mL 7试样制备与保存 7.1通则 正式出版文本为准 在样品制备和保存的操作过程中，应防止样品污染或发生待测物含量的变化。 7.2肌肉、内脏、脂肪、猪皮 从所取全部样品中取出有代表性样品约500g，切成小块，放入组织捣碎机均质制成肉糜状，充分混 匀，均分成2份，分别装入清洁容器内，并标明标记。将试样置于一18℃冷冻保存。 7.3鸡蛋 从所取全部样品中取出有代表性样品，取可食部分约500g，搅拌混，均分成2份，分别装人清洁 容器内，并标明标记。将试样置于一18℃冷冻保存。 7.4奶 从所取全部样品中取出代表性样品约500g，充分混匀，均分成2份，装入洁净容器作为试样，密封， 标明标记。将试样置于4℃冷藏保存。 2 SN/T 5594—2024 8 测定步骤 8.1提取 8.1.1肌肉、内脏、脂肪、猪皮 准确称取2g试样（精确至0.01g)置于50mL离心管中，加人40μL加米霉素-D4内标工作溶液 （5.14），加人20mL乙腈和2g无水硫酸钠，以10000r/min均质1min，10000r/min离心5min。取 上清液5mL，待净化。 8.1.2 鸡蛋和牛奶 准确称取2g试样（精确至0.01g）置于50mL离心管中，加人40uL加米每系-D4内标工作溶液 （5.14），加人20mL乙腈和5g无水硫酸钠，用振荡器振摇提取20min后，10000r/min离心5min。 取上清液5mL，待净化。 8.2净化 将MCX柱置于固相萃取架上，依次用3mL甲醇、3mL水活化，取上清液（8.1.1和8.1.2)过柱，控 制流速小于1mL/min，依次用3mL水、3mL甲醇淋洗，抽干；再用5%的氨水甲醇（5.6)4mL洗脱，于 40℃氮气吹干。残余物用0.1%甲酸水-乙腈溶液（5.8)1mL溶解，涡旋混匀，过0.22μm微孔滤膜后供 液相色谱-质谱/质谱仪测定。 8.3测定 8.3.1 液相色谱条件 液相色谱条件参考如下。 a) 色谱柱:C1s色谱柱,100 mm X <2.1mm(内径）,1.7μm，或性能相当者。 b) 柱温：30℃。 c) 流动相：A为0.1%甲酸水溶液;B为乙腈。梯度洗脱程序见表1。 d) 流速:0.4 mL/min。 e) 进样量:5 μL。 表1梯度洗脱条件 时间/min 流动相A/% 流动相B/% 0.00 90 10 0.50 90 10 3.00 10 06 5.00 10 90 5.10 90 10 7.00 06 10 8.3.2 质谱条件 质谱参考条件如下。 3 SN/T5594—2024 离子源：电喷雾离子源。 b) 扫描方式：正离子扫描。 c) 检测方式：多反应监测模式。 其他参考质谱条件见附录A。 8.3.3 液相色谱-质谱/质谱测定 8.3.3.1定性测定 按照上述色谱和质谱条件进行测定，试液中待测物色谱峰保留时间与标准工作液保留时间偏差在 土2.5%之内，各离子对的相对丰度与标准品的相对丰度一致，且样品中各离子对的相对丰度与质量浓 度相近的标准工作液中对应的离子对的相对丰度进行比较，偏差均不超过表2规定的范围，则可判断样 品中存在对应的被测物。 表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度/% >50 >20~50 >10~20 ≤10 允许的相对偏差/% ±20 ±25 ±50 X 8.3.3.2定量测定 在仪器最佳工作条件下，根据试样中被测物的含量情况，选取响应值相近的标准工作液一起进行色 谱分析。标准工作液和样液中加米霉素的响应值应在仪器线性响应范围内（参考线性质量浓度范围为： 0ng/mL～100ng/mL）。在上述仪器条件下，加米霉素的参考保留时间为2.98min，加米霉素标准溶 液的多反应监测(MRM)色谱图见附录B。 8.4 空白试验 除不称取试样外,均按上述步骤进行。 9结果计算和表述 采用内标法定量，试样中加米霉素的含量用液相色谱-质谱/质谱仪的数据处理软件或按式（1)计 算，计算结果需扣除空白值： 1000 1000 ..(1) 式中： x 试样中加米霉素的含量，单位为微克每千克（μg/kg)； c 标准工作溶液中被测物的质量浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）； A 试样溶液中被测物的色谱峰面积； As 标准工作溶液中被测物的色谱峰面积； P: 试样溶液中内标物的质量浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）； Ps; 标准工作溶液中内标物的质量浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）； As; 标准工作溶液中内标物的色谱峰面积； A; 试样溶液中内标物的色谱峰面积； V 试样溶液最终体积，单位为毫升（mL）； 4 SN/T 5594—2024 1000 换算系数； m 试样溶液所代表的试样质量，单位为克（g）。 测定结果保留3位有效数字。 10 检出限、定量限和回收率 10.1 检出限和定量限 本方法的检出限（LOD)为2μg/kg，定量限（LOQ)为5μg/kg。 10.2 回收率 本方法对猪肉、猪脂肪、猪肝、猪肾、猪皮、牛肉、牛脂肪、牛肝、牛肾、牛奶、羊肉、羊脂肪、羊肝、羊肾 鸡肉、鸡脂肪、鸡肝、鸡肾和鸡蛋基质进行添加回收率试验，加米霉素在不同添加水平 平下的回收率见附 录C。 以正式出版文本为准 5