̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э I C S6 7.0 5 0 C C SX0 4 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 S N/T5 5 1 2—2 0 2 3 出口动物源食品中那西肽残留量的测定 液相色谱 -质谱/质谱法 D e t e r m i n a t i o n o f n o s i h ept i d e r e s i d u e i n f o o d s t u f f s o f a n i m a l o r igi n f o r e xpo r t— L C - M S/M S m e t h o d 2 0 2 3-1 1-0 1发布 2 0 2 4-0 5-0 1实施 中华人民共和国海关总署 发 布̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э ̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 前 言 本文件按照 G B/T 1. 1—2 0 2 0《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则 》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别专利的责任 。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口 。 本文件起草单位 :中华人民共和国深圳海关 、深圳职业技术学院 、中华人民共和国杭州海关 。 本文件主要起草人 :赵凤娟、沈金灿、郭伟杰、康海宁、岳振峰、朱萍萍、蒋沁婷、林伟坚、华红慧。 ⅠS N/T5 5 1 2—2 0 2 3̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э ̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 出口动物源食品中那西肽残留量的测定 液相色谱 -质谱/质谱法 1 范围 本文件规定了动物源食品中那西肽残留量的液相色谱 -质谱/质谱检测和确证方法 。 本文件适用于猪肉 、猪肝、牛肉、牛肝、鸡肉、鸡肝、鸡蛋、鱼、虾、牛奶等动物源食品中那西肽残留量 的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件 ;不注日期的引用文件 ,其最新版本 (包括所有的修改单 )适用于 本文件。 G B/T 6 6 8 2 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义 。 4 方法提要 试样用乙腈提取 ,正己烷脱脂 ,HL B固相萃取柱净化 ,氮吹浓缩 ,酸化乙腈定容 。采用高效液相色 谱-质谱/质谱测定 ,外标法定量 。 5 试剂与材料 除非另有说明 ,本方法所用试剂均为分析纯 ,水为G B/T 6 6 8 2规定中的一级水 。 5.1 试剂 5.1.1 乙腈(CH3CN) :色谱纯。 5.1.2 甲酸(HCOOH ) 。 5.1.3 甲醇(CH3OH) :色谱纯。 5.1.4 二甲基亚砜 (CH3)2S O。 5.1.5 乙酸铵(CH3COONH 4) :色谱纯。 5.1.6 正己烷(CH3(CH2)4CH3) 。 5.1.7 无水硫酸钠 (N a2S O4) :5 0 0 ℃烘4 h,置于干燥器中备用 。 5.2 试剂配制 5.2.1 1%甲酸乙腈溶液 :准确吸取 5. 0 0 mL甲酸(5. 1. 2)于5 0 0 mL 容量瓶中 ,用乙腈(5. 1. 1)稀释到 1S N/T5 5 1 2—2 0 2 3̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 刻度,混合混匀 。 5.2.2 2%甲酸乙腈溶液 :准确吸取 1. 0 0 mL甲酸(5. 1. 2)于5 0 mL 容量瓶中 ,用乙腈(5. 1. 1)稀释到 刻度,混合混匀 。 5.2.3 乙腈饱和正己烷 :量取2 0 0 mL正己烷(5. 1. 6)于2 5 0 mL分液漏斗中 ,加入适量乙腈后 ,剧烈振 摇数分钟 ,待分配平衡后 ,弃去下层乙腈层即得 。 5.2.4 乙腈-水(4+1,体积比) :量取8 0 mL乙腈和2 0 mL水,混匀。 5.3 标准品 那西肽标准物质 :C5 1H4 3N1 3O1 2S6,CA S号5 6 3 7 7 - 7 9 - 8 ,纯度7 7. 6%;或经国家认证并授予标准物 质证书的标准物质 。 5.4 标准溶液配制 5.4.1 标准储备溶液 (2 0 0 μg/mL) :准确称取经折算相当于 1 0 mg(精确到0. 1 mg)的那西肽 ,用 2 5 0 μL二甲基亚砜 (5. 1. 4)溶解,乙腈定容至 5 0 mL,配成标准储备溶液 。-2 0 ℃下避光保存 ,有效期 为2个月。 5.4.2 标准中间溶液 (5 μg/mL) :准确吸取 1. 2 5 mL 那西肽标准溶液 (5. 4. 1)用乙腈定容至 5 0 mL。 该溶液于 -2 0℃保存,有效期为 1个月。 5.4.3 标准使用液 (2 0 0 ng/mL) :准确吸取 0. 4 0 0 mL那西肽标准中间溶液 (5. 4. 2)用1%甲酸乙腈溶 液(5. 2. 1)定容至1 0 mL,现用现配 。 5.4.4 基质标准工作溶液 :根据那西肽的灵敏度和仪器线性范围 ,吸取一定量的标准使用液 (5. 4. 3) , 用空白样品提取液配成系列浓度的基质标准工作溶液 ,配制浓度为 1. 0 ng/mL、2. 0 ng/mL、5. 0 ng/ mL、1 0. 0 ng/mL、2 0. 0 ng/mL,现用现配 。 5.5 材料 固相萃取柱 :亲脂性二乙烯苯 -亲水性N -乙烯基吡咯烷酮共聚物 (O a s i s HL B固相萃取 )小柱, 3 mL/6 0 mg,或相当者 。使用前先用 3 mL甲醇活化 ,再用3 mL乙腈-水(5. 2. 4)平衡柱子 ,保持柱体 湿润。 6 仪器和设备 6.1 液相色谱 -质谱/质谱仪。 6.2 涡旋混合器 。 6.3 离心机:转速不低于 9 5 0 0 r/m i n。 6.4 高速组织捣碎机 。 6.5 氮气浓缩装置 。 6.6 分析天平 :感量为0. 1 mg和0. 0 1 g。 6.7 移液枪:1 0 0 μL、1 mL、5 mL。 6.8 固相萃取装备 。 6.9 超纯水仪 。 6.1 0 玻璃管:1 5 mL,带刻度。 6.1 1 聚丙烯离心管 :1 5 mL、5 0 mL,具塞。 6.1 2 微孔滤膜 :聚四氟乙烯亲水型 ,0. 2 2 μm。 2S N/T5 5 1 2—2 0 2 3̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 7 试样制备与保存 7.1 动物组织 、内脏 猪肉、猪肝、牛肉、牛肝、鸡肉、鸡肝、鸡蛋、鱼、虾等原始样品 ,经高速组织捣碎机均匀捣碎 ,用四分法 缩分出适量试样 ,均分成两份 ,分别装入干净容器内 ,加封后做出标记 ,一份作为试样 ,一份作为留样 。 将试样于 -2 0 ℃下保存。 7.2 牛奶 从原始样品中取出代表性样品 ,用组织捣碎机充分混匀 ,均分成两份 ,分别装入干净容器中 ,加封后 做出标记 ,一份作为试样 ,一份作为留样 。将试样于 4 ℃避光保存 。 8 测定步骤 8.1 提取 8.1.1 肌肉、内脏、鱼、虾和牛奶 准确称取 2 g(精确到0. 0 1 g)样品,于5 0 mL 具螺旋盖聚丙烯离心管中 ,加入8 mL乙腈,涡旋振荡 1 0 m i n,9 5 0 0 r/m i n离心5 m i n,取上清液于另一 5 0 mL离心管中 ,加入8 mL乙腈重复提取一次 ,合并 提取液,加入水定容至 2 0 mL,涡旋混合 1 m i n。准确吸取 1 0 mL混合提取液 ,加入3 mL乙腈饱和正己 烷(5. 2. 3) ,上下轻摇 2 0次,9 5 0 0 r/m i n离心5 m i n,收集乙腈层 ,备用。 8.1.2 鸡蛋 准确称取 2 g(精确到0. 0 1 g)样品,于5 0 mL 具螺旋盖聚丙烯离心管中 ,加入8 mL 1%甲酸乙腈提 取液(5. 2. 1) ,涡旋振荡 1 0 m i n,于9 5 0 0 r/m i n离心5 m i n,取上清液于另一 5 0 mL离心管中 ,加入 8 mL 1%甲酸乙腈提取液 (5. 2. 1)重复提取一次 ,合并提取液 ,加水定容至 2 0 mL,涡旋混合 1 m i n。准 确吸取1 0 mL混合提取液于 1 5 mL 具螺旋盖聚丙烯离心管中 ,加入3 mL乙腈饱和正己烷 (5. 2. 3) ,上 下轻摇2 0次,9 5 0 0 r/m i n离心5 m i n,收集乙腈层 ,备用。 8.2 净化 取备用液 ,以1滴/s的速度过 HL B固相萃取柱 (5. 5) ,待样液完全流出后 ,抽干,收集全部流出液 。 流出液中加入 1 g无水硫酸钠 ,涡旋混合 1 m i n,9 5 0 0 r/m i n离心5 m i n,静置分层 ,取上清液于 1 5 mL 刻度玻璃管中 。将上清液 5 0 ℃下吹氮浓缩至 0. 5 mL左右,加入2%甲酸乙腈溶液 (5. 2. 2)定容至 1 mL,混匀,过0. 2 2 μm微孔滤膜 ,供高效液相色谱 -质谱/质谱测定 。 用阴性样品按照 8. 1和8. 2操作步骤 ,制备用于配置系列基质标准工作溶液的样品空白提取液 。 8.3 测定 8.3.1 液相色谱条件 液相色谱参考条件如下 : a) 色谱柱: C1 8,1 0 0 mm×2. 1 mm(内径) ,粒度2. 6 μm,或相当者 ; b) 柱温:3 0 ℃; c) 进样量:2 0 μL; 3S N/T5 5 1 2—2 0 2 3̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э d) 流速:0. 2 mL/m i n;