̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э ICS67.050 CCSX04 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T5511—2023 出口调味料、调味面制品及肉制品中罂粟碱、 那可丁、蒂巴因、吗啡和可待因的测定 液 相色谱-质谱/质谱法 Determination of papaverine, noscapine, thebaine, morphine and codeine in flavoring, seasoned flour products and meat products for export —LC-MS/MS method 2023-05-05发布 2023-12-01实施 中华人民共和国海关总署发布̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э ̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》、 GB/T 20001.4—2015《标准编写规则 第4部分:试验方法标准》和SN/T 0001—2016《出口食品、化妆 品理化测定方法标准编写的基本规定》的规定起草。 请注意文件的某些内容可能涉及专利,本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本文件起草单位:银川海关技术中心、西安海关技术中心、合肥海关技术中心、宁夏回族自治区食品 检测研究院、宁夏农产品质量标准与检测技术研究所、杭州海关技术中心。 本文件主要起草人:王芳焕、李子豪、宋伟、陈林、马桂娟、贺生芳、杨春霞、李婧、郝俊虎、孙敏、 李竹岩、谢文。 ⅠSN/T5511—2023̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э ̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 出口调味料、调味面制品及肉制品中罂粟碱、 那可丁、蒂巴因、吗啡和可待因的测定 液 相色谱-质谱/质谱法 1 范围 本文件规定了出口调味料、调味面制品及肉制品中罂粟碱、那可丁、蒂巴因、吗啡和可待因的液相色 谱-质谱/质谱检测方法。 本文件适用于固体调味料、调味面制品、肉制品、火锅调味料、调味油及含有固体调味粉的汤料等等 食品中罂粟碱、那可丁、蒂巴因、吗啡和可待因的定性鉴别及定量测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 方法原理(提要) 采用盐酸溶液提取样品中的罂粟碱五项,用正己烷脱油脂,固相萃取柱净化,液相色谱-质谱/质谱 仪测定,罂粟碱、那可丁和蒂巴因采用外标法定量,吗啡和可待因采用内标法定量。 5 试剂和材料 除非另有说明,所用试剂均为分析纯,水为 GB/T 6682 规定的一级水。 5.1 甲醇:色谱纯。 5.2 乙腈:色谱纯。 5.3 氨水。 5.4 浓盐酸。 5.5 乙酸铵。 5.6 正己烷:色谱纯。 5.7 盐酸溶液(0.1 mol/L):量取盐酸 8.33 mL(5.4),加水至1 L,摇匀备用。 5.8 氨化甲醇溶液(5+95,v/v):量取氨水(5.3) 5 mL,加甲醇(5.1)至100 mL,摇匀备用。 5.9 乙酸铵溶液(5 mmol/L):准确称取0.77 g乙酸铵(5.5)溶解于适量水中,定容至2 L,混匀备用。 1SN/T5511—2023̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 5.10 乙腈-5 mmol/L乙酸铵溶液(95+5,v/v):量取95 mL乙腈和5 mL 5 mmol/L乙酸铵溶液 (5.10),混匀。 5.11 甲醇-水溶液(1+1,v/v):量取 50 mL甲醇和50 mL水,混匀。 5.12 罂粟碱标准物质(Papaverine):C20H21NO4,CAS NO.58-74-2;吗啡标准物质(Noscapine): C22H23NO7,CAS NO.128-62-1;蒂巴因(Thebaine):C19H21NO3,CAS NO.115-37-7;、吗啡标准物质 (Morphine):C22H23NO7,CAS NO.57-27-2;可待因标准物质(Codeine):C18H21NO3,CAS NO.76-57- 3;吗啡-D3(Morphine-D3):C17H16D3NO3,CAS NO.67293-88-3;可待因-D3(Codeine-D3): C18H18D3NO3,CAS NO.105843-36-5。纯度均大于等于98%。 5.13 标准储备液(1.0 mg/mL):精密称取盐酸罂粟碱、那可丁、吗啡、可待因和蒂巴因标准品适量 (5.12),用甲醇(5.1)配制成罂粟碱、那可丁、可待因、吗啡和可待因的浓度均为1.0 mg/mL的溶液,作 为标准储备液。4 ℃避光保存,有效期六个月。 5.14 混合标准品溶液:精密吸取浓度为1.0 mg/mL的罂粟碱、那可丁、蒂巴因储备液各1.0 mL和浓 度为1.0 mg/mL的吗啡、可待因储备液各5 mL于20 mL容量瓶中,用甲醇(5.1)定容至刻度,摇匀,即 得含有罂粟碱、那可丁、蒂巴因浓度为50 μg/mL和吗啡、可待因浓度为250 μg/mL的混合标准品溶 液。4 ℃避光保存,有效期三个月。 5.15 同位素内标工作溶液(5.0 μg/mL):分别精密称取内标物质(5.12)适量,用甲醇(5.1)配制成浓 度为5.0 μg/mL的混合标准溶液。4 ℃避光保存,有效期三个月。 5.16 标准工作溶液的配制:分别精密吸取上述混合标准品溶液(5.14)和同位素内标工作溶液(5.15) 适量,用乙腈-5 mmol/L乙酸铵溶液(5.10)稀释成罂粟碱、那可丁、蒂巴因浓度为1 ng/mL、2 ng/mL、 5 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL,吗啡、可待因浓度分别为5 ng/mL、10 ng/mL、25 ng/mL、50 ng/mL、 100 ng/mL的系列标准工作溶液,内标溶液浓度均为20.0 ng/mL。临用新配。 5.17 固相萃取柱:N-乙烯基吡咯烷酮-二乙烯基苯共聚物基质-SO3H,60 mg,3 mL或相当者。使用 前用5 mL 甲醇(5.1),5 mL 0.1 mol/L盐酸(5.7)活化。 5.18 微孔滤膜:0.22 μm,有机相针式过滤器。 6 仪器和设备 6.1 液相色谱-质谱/质谱仪:配电喷雾离子源(ESI)。 6.2 分析天平:感量为0.01 g和0.000 1 g。 6.3 离心机,转速不小于4 000 r/min。 6.4 固相萃取装置。 6.5 氮吹仪。 7 分析步骤 7.1 样品制备与保存 7.1.1 固体调味料、调味面制品、肉制品、火锅调味料 取出有代表性样品约500 g,用粉碎机全部粉碎后充分混匀,均匀分成二份作为试样,分装入洁净的 容器内,密封并做好标记,于-18 ℃ 以下温度保存。 7.1.2 调味油、含有固体调味粉的汤料 取代表性样品约500 g,装入洁净的容器中,密封并标识,于-18 ℃以下温度保存。 2SN/T5511—2023̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 7.2 提取 称取约2 g试样(精确至0.01 g),置于50 mL离心管中,加入8 μL同位素内标工作液(5.15),加入 10 mL 0.1 mol/L盐酸溶液(5.7)超声10 min,4 000 r/min离心5 min后,加入2 mL 正己烷(5.6),静 置,待净化。 7.3 净化 分别用5 mL 甲醇(5.1),5 mL 0.1 mol/L盐酸(5.7)活化固相萃取柱(5.17),移取5 mL提取液 (7.2)通过固相萃取柱,再加5 mL 0.1 mol/L盐酸(5.7),5 mL甲醇-水溶液(5.11)淋洗固相萃取柱,吹 干,最后用5 mL氨化甲醇(5.8)洗脱,收集全部流出液,35 ℃氮气吹干。用1 mL乙腈-5 mmol/L乙 酸铵溶液(5.10)溶解残渣,涡旋2 min,过0.22 μm有机相微孔滤膜后(5.18),供LC-MS/MS 测定。 7.4 测定 7.4.1 液相色谱条件 液相色谱条件如下: a) 液相色谱柱:HILIC色谱柱,100 mm×2.1 mm(内径),1.7 μm,或性能相当者。 b) 流动相:A为乙腈,B为5 mmol/L乙酸铵溶液。 c) 柱温:35 ± 1℃。 d) 进样量:5.0 μL。 e) 流速:0.3 mL/min。 f) 流动相及梯度洗脱条件:见表1。 表1 液相色谱梯度洗脱程序 时间/min 乙腈/% 5 mmol/L乙酸铵溶液/% 0.00 95 5 2.00 95 5 4.00 85 15 6.50 70 30 7.00 95 5 9.00 95 5 7.4.2 质谱参考条件 质谱条件如下: a) 离子源:电喷雾离子源(ESI); b) 扫描方式:正离子扫描; c) 检测方式:多反应监测(MRM); d) 雾化气、干燥气、辅助气为高纯氮气、碰撞气为高纯氩气;使用前应调节各参数使质谱灵敏度 达到检测要求。参考条件见附录A。 7.4.3 定性测定 按照液相色谱-质谱/质谱条件测定样品和标准工作溶液,如果检测的的质量色谱峰保留时间与标 3SN/T5511—2023̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 准品保留时间相差不