ICS67.050 CCSX04 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T5444—2022 出口植物源食品中咪鲜胺及其代谢产物 的测定 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of prochloraz and its metabolites in plant-origin foodstuffs for export—LC-MS/MS 2022-03-14发布 2022-10-01实施 中华人民共和国海关总署发布 以正式出版文本为准以正式出版文本为准前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本文件起草单位:中华人民共和国重庆海关技术中心、中国检验检疫科学研究院。 本文件主要起草人:莫敏、唐柏彬、郗存显、曹淑瑞、郑小玲、李贤良、张雷、王国民、张峰。 ⅠSN/T5444—2022 以正式出版文本为准以正式出版文本为准出口植物源食品中咪鲜胺及其代谢产物 的测定 液相色谱-质谱/质谱法 1 范围 本文件规定了出口植物源食品中咪鲜胺及其代谢产物的液相色谱-质谱/质谱测定方法。 本文件适用于蔬菜、水果、食用菌、谷物、油料、坚果、香辛料、茶叶、石斛中咪鲜胺及其代谢物N-丙 基-N-[2-(2,4,6-三氯苯氧基) 乙基]脲(BTS44595)、N-醛基-N-丙基-N-[2-(2,4,6-三氯苯氧基)乙基]脲 (BTS44596)、2,4,6-三氯苯酚(BTS45186)的定量测定和确证,其他植物源性食品也可参照使用。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB 2763 食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 方法原理 试样经酸化乙腈溶液提取,提取液经QuEChERS/固相萃取柱净化,液相色谱-质谱/质谱仪检测, 外标法定量。 5 试剂和材料 除另有规定外,试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的一级水。 5.1 乙腈:色谱纯。 5.2 乙酸:优级纯。 5.3 甲苯:色谱纯。 5.4 甲酸。 5.5 无水硫酸镁。 5.6 氯化钠。 5.7 乙酸铵。 5.8 乙酸钠。 5.9 1%酸化乙腈溶液(V/V):990 mL乙腈(5.1)中加入10 mL乙酸(5.2)溶液,混匀。 5.10 乙腈-甲苯溶液(3+1,V/V):100 mL甲苯(5.3)加入300 mL乙腈(5.1)中,混匀。 1SN/T5444—2022 以正式出版文本为准5.11 2 mmol/L乙酸铵(含0.1 %甲酸):称取0.154 g乙酸铵(5.7),用950 mL水溶解,加入1.0 mL 甲酸(5.4),用水稀释至1 000 mL。 5.12 乙二胺-N-丙基硅烷化硅胶(PSA):40 μm~60 μm。 5.13 石墨化碳黑(GCB):40 μm~60 μm。 5.14 标准物质:咪鲜胺、N-丙基-N-[2-(2,4,6-三氯苯氧基) 乙基]脲(BTS44595)、N-醛基-N-丙基-N- [2-(2,4,6-三氯苯氧基)乙基]脲(BTS44596)、2,4,6-三氯苯酚(BTS45186),纯度均大于等于98%。化 合物详细信息参见表A.1。 5.15 混合标准储备液(1.0 mg/mL):准确称取适量的咪鲜胺及其代谢物标准物质(5.14),用乙腈 (5.1)溶解并配制成浓度为1.0 mg/mL的混合标准储备液。-18 ℃以下避光保存6个月。 5.16 混合标准中间液(10.0 mg/L):移取上述1.0 mg/mL混合标准储备液(5.15)0.1 mL至10 mL 容量瓶中,用乙腈(5.1)稀释并定容至刻度,配制成10.0 mg/L混合标准中间液。0 ℃~4 ℃避光保存 1个月。 5.17 混合标准工作液:临用前分别取适量10.0 mg/L混合标准中间液(5.16),用乙腈(5.1)稀释至 2 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL混合标准工作液,临用现配。 5.18 微孔滤膜:有机系,0.22 μm。 5.19 固相萃取柱:石墨化炭黑-氨基复合柱,500 mg/500 mg,容积6 mL。 5.20 均质子。 6 仪器和设备 6.1 液相色谱-质谱/质谱仪:配电喷雾离子源(ESI)。 6.2 分析天平:感量分别为0.01 g和0.1 mg。 6.3 均质器。 6.4 离心机:转速不低于5 000 r·min-1。 6.5 超声波清洗器。 6.6 氮吹仪。 6.7 涡旋混合器。 6.8 强力振荡器。 6.9 组织搅拌机。 6.10 高速粉粹机。 6.11 水浴旋转蒸发仪。 6.12 具塞离心管:聚丙烯,15 mL和50 mL。 7 试样的制备与保存 7.1 蔬菜、水果和食用菌 取有代表性样品约500 g,样品取样部位按照GB 2763的规定执行,用组织搅拌机充分绞碎,装入 洁净容器,密闭并标明标记,于-18 ℃保存。 7.2 谷物、油料、坚果、香辛料、茶叶和石斛 取有代表性样品约500 g,样品取样部位按照GB 2763的规定执行,用高速粉碎机充分粉碎,装入 洁净容器,密闭并标明标记,于阴凉干燥处保存。 2SN/T5444—2022 以正式出版文本为准8 测定步骤 8.1 提取 8.1.1 蔬菜、水果和食用菌 准确称取10 g(精确至0.01 g)试样,置于50 mL具塞离心管中,加入20 mL酸化乙腈(5.9)、6.0 g 氯化钠(5.6)及1颗均质子(5.20),盖上离心管盖,置于强力振荡器(6.8)剧烈振荡提取10 min后 4 000 r·min-1离心5 min,待净化。 注: 对于干制样品,称取1 g试样(精确至0.01 g)于50 mL具塞离心管中,加9 mL水涡旋混匀,静置30 min后按上 述方式处理。 8.1.2 谷物、油料、坚果、香辛料和石斛 准确称取5 g(精确至0.01 g)试样,置于50 mL具塞离心管中,加入10 mL水涡旋混匀,静置 20 min,加入20 mL酸化乙腈(5.9)、6.0 g氯化钠(5.6)及1颗均质子(5.20),盖上离心管盖,置于强力 振荡器(6.8)剧烈振荡提取10 min后4 000 r·min-1离心5 min,待净化。 8.1.3 茶叶 准确称取2 g(精确至0.01 g)试样,置于50 mL具塞离心管中,加入10 mL水涡旋混匀,静置 20 min,加入20 mL酸化乙腈(5.9)、6.0 g硫酸镁(5.5)、1.5 g乙酸钠(5.8)及1颗均质子(5.20),盖上 离心管盖,置于强力振荡器(6.8)剧烈振荡提取10 min后4 000 r·min-1离心5 min。吸取10 mL上 清液于100 mL茄型瓶中,40 ℃水浴旋转蒸发至1 mL左右,氮吹至近干,待净化。 8.2 净化 8.2.1 QuEChERS前处理 吸取待净化液(8.1.1、8.1.2)10 mL加到内含900 mg硫酸镁(5.5)、100 mgPSA(5.12))和10 mg GCB(5.13)的15 mL塑料离心管中,涡旋混匀5 min后4 000 r·min-1离心5 min,准确吸取5 mL上 清液于10 mL试管中,氮吹至干,加入2 mL乙腈(5.1)溶解残渣,过微孔滤膜(5.18),供高效液相色谱- 质谱/质谱仪测定。 8.2.2 固相萃取前处理 用5 mL乙腈-甲苯溶液(5.10)预洗固相萃取柱(5.19),弃去流出液。用3 mL乙腈-甲苯溶液 (5.10)洗涤待净化试样(8.1.3)至固相萃取柱中,再用3mL乙腈-甲苯溶液(5.10)重复洗涤操作1次; 用20 mL乙腈-甲苯溶液(5.10)淋洗固相萃取柱。收集所有流出液,于40 ℃水浴旋转蒸发至干,加入 1 mL乙腈(5.1)溶解残渣,过微孔滤膜(5.18),供高效液相色谱-质谱/质谱仪测定。 8.3 基质混合标准溶液的制备 空白基质样品按照8.1、8.2部分进行前处理至氮吹至干或旋转蒸发至干,加入相应质量浓度的混 合标准工作溶液(5.17)复溶,过微孔滤膜(5.18),基质混合标准工作溶液应现用现配。 注: 空白基质溶液取样量应与相应的试样处理取样量一致。 3SN/T5444—2022 以正式出版文本为准8.4 样品测定 8.4.1 液相色谱-质谱/质谱参考条件 8.4.1.1 ESI+模式液相色谱条件 8.4.1.1.1 色谱柱:C18柱,100 mm×2.1 mm(内径),粒径1.7 μm,或相当者。 8.4.1.1.2 流动相:流动相A为乙腈(5.1),流动相B为水,梯度洗脱程序见表1。 8.4.1.1.3 流速:0.3 mL/min。 8.4.1.1.4 进样量:1 μL。 8.4.1.1.5 柱温:40 ℃。 表1 ESI+模式液相色谱梯度洗脱程序 梯度时间/min