ICS67.050 CCSX 04 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T5442—2022 出口植物源食品中丙硫菌唑及其代谢物 残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of prothioconazole and its metabolite residues in foodstuffs of plant origin for export— LC-MS/MS method 2022-03-14发布 2022-10-01实施 中华人民共和国海关总署发布 以正式出版文本为准以正式出版文本为准前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》、 GB/T 20001.4—2015《标准编写规则 第4部分:试验方法标准》和SN/T 0001—2016《出口食品、化妆 品理化测定方法标准编写的基本规定》的规定起草。 请注意文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本文件起草单位:中华人民共和国合肥海关技术中心、中华人民共和国银川海关技术中心、中华人 民共和国杭州海关技术中心、中国民航大学。 本文件主要起草人:宋伟、韩芳、王芳焕、陈达、楼成杰、吕亚宁、刘宇欣、周典兵、丁磊、许曼曼、王钰、 贾学颖、侯建波、郑平。 ⅠSN/T5442—2022 以正式出版文本为准以正式出版文本为准出口植物源食品中丙硫菌唑及其代谢物 残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 1 范围 本文件规定了出口植物源食品中丙硫菌唑及其代谢物脱硫丙硫菌唑残留量的液相色谱-质谱/质谱 检测方法。 本文件适用于小麦、大麦、燕麦、黑麦、玉米、赤豆、油菜籽、大豆、花生仁、葵花籽、甜菜、生菜、番茄、 黄瓜、马铃薯、梨、葡萄、草莓等植物源食品中丙硫菌唑及其代谢物脱硫丙硫菌唑残留量的定性鉴别及定 量测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB 2763 食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 方法原理 样品中丙硫菌唑及其代谢物脱硫丙硫菌唑残留采用含0.1%甲酸的乙腈溶液提取,基质分散固相 萃取净化后,采用液相色谱-质谱/质谱测定,外标法定量。 5 试剂和材料 除非另有说明,所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的一级水。 5.1 乙腈:色谱纯。 5.2 乙酸:色谱纯。 5.3 甲酸:色谱纯。 5.4 乙酸铵:色谱纯。 5.5 正己烷:色谱纯。 5.6 抗坏血酸。 5.7 氯化钠。 5.8 无水硫酸镁:经650 ℃灼烧4 h,储于干燥器中,冷却后备用。 5.9 1%甲酸乙腈溶液:取1.0 mL甲酸(5.3)至100 mL容量瓶中,并用乙腈(5.1)定容至刻度,充分混 1SN/T5442—2022 以正式出版文本为准匀,备用。 5.10 1.5%抗坏血酸溶液:取15 g抗坏血酸(5.6),用水稀释并定容至1 000 mL。 5.11 20%乙腈溶液:取20 mL乙腈(5.1),用水稀释并定容至100 mL。 5.12 丙硫菌唑标准物质(prothioconazole):C14H15Cl2N3OS,CAS号178928-70-6;脱硫丙硫菌唑标准 物质(prothioconazole-desthio):C14H15Cl2N3O,CASNO.120983-64-4。纯度均大于等于98%。 5.13 标准储备溶液的配制:准确称取适量丙硫菌唑、脱硫丙硫菌唑标准品(精确至0.1 mg),分别用乙 腈溶解,配制成浓度为1.0 mg/mL标准贮备溶液,0 ℃~4 ℃下避光保存,可使用6个月。 5.14 中间混合标准溶液:分别吸取1.00 mL丙硫菌唑标准储备液及1.00 mL脱硫丙硫菌唑标准储备 液(5.13),移入100 mL棕色容量瓶,用乙腈定容,该溶液浓度为10 μg/mL。0 ℃~4 ℃冷藏避光保存, 可使用3个月。 5.15 标准工作溶液:根据需要,吸取适量标准中间溶液(5.14),配制成1.25 μg/L、2.5 μg/L、5 μg/L、 25 μg/L、50 μg/L的混合标准溶液,使用前配制。 5.16 十八烷基键合硅胶(C18),50 μm。 5.17 N-丙基乙二胺(PSA),40 μm ~60 μm。 5.18 滤膜:0.22 μm,有机系。 6 仪器和设备 6.1 液相色谱-质谱/质谱仪:配电喷雾离子源(ESI)。 6.2 分析天平:感量为0.01 g和0.000 1 g。 6.3 粉碎机。 6.4 组织捣碎机。 6.6 样品筛:孔径为2 mm。 6.6 均质器:15 000 r/min。 6.7 涡旋振荡器。 6.8 高速冷冻离心机:转速不低于10 000 r/min。 7 分析步骤 7.1 样品制备与保存 7.1.1 小麦、大麦、燕麦、黑麦、玉米、赤豆、油菜籽、大豆、花生仁、葵花籽 取出有代表性样品500 g,用粉碎机全部粉碎后充分混匀,均匀分成2份作为试样,分装入洁净的容 器内,密封并做好标记,于-18 ℃以下温度避光保存。 7.1.2 甜菜、生菜、番茄、黄瓜、葡萄、草莓、梨、马铃薯 按GB 2763的规定取样执行。对于个体较小的样品,取样后全部处理;对于个体较大的基本均匀 样品,可在对称轴或对称面上分割或切成小块后处理;对于细长、扁平或组分含量在各部分有差异的样 品,可在不同部位切取小片或截成小段后处理;取后的样品将其切碎,充分混匀,用四分法取样或直接放 入组织捣碎机中捣碎成匀浆,均匀分成2份作为试样,装入洁净容器内,密封并做好标记,于-18 ℃以 下温度保存。 2SN/T5442—2022 以正式出版文本为准7.2 提取 7.2.1 小麦、大麦、燕麦、黑麦、大豆、玉米、赤豆、马铃薯 称取约5 g试样(精确至0.01 g),置于50 mL具塞棕色离心管中,快速加入10 mL抗坏血酸溶液 (5.10),涡旋1 min使试样完全润湿,然后加入10 mL1% 甲酸乙腈溶液(5.9),涡旋振荡后超声提取 10 min;向离心管中加入5 g氯化钠(5.7),涡旋振荡1 min;8 000 r/min 4℃离心5 min,取1.0 mL上 层清液待净化。 7.2.2 甜菜、生菜、番茄、黄瓜、葡萄、梨、草莓 称取约5 g试样(精确至0.01 g),置于50 mL具塞棕色离心管中,快速加入10 mL抗坏血酸溶液 (5.10),涡旋1 min;加入10 mL 1%甲酸乙腈溶液(5.9)涡旋振荡提取2 min,之后向离心管中加入5 g 氯化钠(5.7),涡旋振荡1 min;8 000 r/min 4 ℃离心5 min,取1.0 mL上层清液待净化。 7.2.3 油菜籽、花生仁、葵花籽 称取约5 g试样(精确至0.01 g),置于50 mL具塞棕色离心管中,快速加入10 mL抗坏血酸溶液 (5.10),涡旋1 min使试样完全润湿,然后加入10 mL 1%甲酸乙腈溶液(5.9),涡旋振荡后超声提取 10 min;向离心管中加入5 g氯化钠(5.7),涡旋振荡1 min;8 000 r/min 4 ℃离心5 min,取2.0 mL上 层清液,之后加入乙腈饱和的正己烷溶液除油数次,取1.0 mL下层乙睛溶液待净化。 7.3 净化 7.3.1 小麦、大麦、燕麦、黑麦、玉米、赤豆、大豆、甜菜、生菜、番茄、黄瓜、葡萄、草莓、马铃薯、梨 将1.0 mL上清液放入装有50 mgC18(5.16)、50 mg PSA(5.17)和150 mg无水硫酸镁(5.8)的 2 mL离心管中,涡旋30 s,10 000 r/min 4 ℃离心5 min;取0.5 mL上清液,加入0.5 mL 20%乙腈溶 液(5.11)稀释后过有机系滤膜至棕色样品瓶,供HPLC-MS/MS检测。 7.3.2 油菜籽、花生仁、葵花籽 将1.0 mL上清液放入装有150 mg C18(5.16)、50 mg PSA(5.17)和150 mg无水硫酸镁(5.8)的 2 mL离心管中;涡旋30 s,10 000 r/min 4 ℃离心5 min;取0.5 mL上清液,加入0.5 mL 20%乙腈溶 液(5.11)稀释后过有机系滤膜(如有浑浊,可10 000 r/min 4 ℃离心5 min,再取上清液过有机系滤膜) 至棕色样品瓶,供HPLC-MS/MS检测。 7.4 测定 7.4.1 液相色谱参考条件 7.4.1.1 液相色谱柱:C18色谱柱,50 mm×2.0 mm(内径),1.8 μm,或性能相当者。 7.4.1.2 流动相:A为纯水,B为乙腈。 7.4.1.3 柱温:35 ℃±1 ℃。 7.4.1.4 进样量:10.0 μL。 7.4.1.5 流速:0.4 mL/min。 7.4.1.6 流动相及梯度洗脱条件:见表1。 3SN/T5442—2022 以正式出版文本为准表1 流动相及梯度洗脱条件