ICS07.100.30
CCSX04
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/T5366.1—2022
商品化试剂盒检测方法
肠杆菌科计数 方法一
Commercial
kit
method—Enterobacteriaceae
count—Test
method
Ⅰ
2022-03-14发布 2022-10-01实施
中华人民共和国海关总署发布
以正式出版文本为准中华人民共和国出入境检验检疫
行 业 标 准
商品化试剂盒检测方法
肠杆菌科计数 方法一
SN/T
5366.1—2022
*
中国海关出版社有限公司出版发行
北京市朝阳区东四环南路甲1号(100023)
编辑部:(010)65194242-7530
网址
www.customskb.com/book
中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷
*
开本880×12301/16 印张0.75 字数22千字
2022年 月第一版 2022年 月第一次印刷
印数
1—
*
书号:
155175·700 定价12.00元
以正式出版文本为准前 言
本文件按照GB/T
1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规
定起草。
本文件是SN/T
5366《商品化试剂盒检测方法 肠杆菌科计数》的第1部分。SN/T
5366已经发
布了以下部分:
———第1部分:商品化试剂盒检测方法 肠杆菌科计数 方法一。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。
本文件起草单位:中国海关科学技术研究中心、中华人民共和国福州海关。
本文件主要起草人:曾静、张西萌、付溥博、魏海燕、魏咏新、郑晶。
ⅠSN/T5366.1—2022
以正式出版文本为准以正式出版文本为准商品化试剂盒检测方法
肠杆菌科计数 方法一
1 范围
本文件规定了食品中肠杆菌科计数(3M
PetrifilmTM
Enterobacteriaceae
Count)的检测方法。
本文件适用于食品中肠杆菌科计数。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文
件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于
本文件。
GB
4789.41—2016 食品安全国家标准
食品微生物学检验
肠杆菌科检验
GB/T
6682 分析实验室用水规格和试验方法
GB
19489 实验室
生物安全通用要求
SN/T
2775 商品化食品检测试剂盒评价方法
SN/T
3266 食品微生物检验方法确认技术规范
3 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4 生物安全措施
为了保护实验室人员的安全和防止污染,应由具备资格的工作人员检测肠杆菌科。所有培养物和
废弃物应按照GB
19489中的有关规定执行。
5 技术概要
肠杆菌科测试片(3M
PetrifilmTM
Enterobacteriaceae
Count)是一种预先制备好的培养基系统,含
有标准的培养基和指示剂。肠杆菌科细菌在测试片培养基上的表现为:红色菌落无黄色晕圈、有气泡,
红色菌落有黄色晕圈、无气泡,红色菌落有黄色晕圈、有气泡,以上3种情况均为肠杆菌科细菌典型
菌落。
6 试剂
除有特殊说明外,所有实验室用试剂均为分析纯,实验用水符合GB/T
6682中一级水的规定。
6.1 肠杆菌科测试片(3M
PetrifilmTM
Enterobacteriaceae
Count)
测试片储存于2
℃~8
℃,有效期为18个月,在使用前应将测试片温度平衡至室温。
1SN/T5366.1—2022
以正式出版文本为准本标准使用的肠杆菌科测试片由3M有限公司生产,参考SN/T
2775和SN/T
3266对测试片进行
技术性评价。具体评价结果参见附录B。
注:
如肠杆菌科测试片关键技术指标发生变动时,以测试片说明书操作为准。
6.2 缓冲蛋白胨水(BPW)
配制方法按照附录A。
6.3 1
mol/L氢氧化钠(NaOH)
称取
40
g
NaOH
溶于1
000
mL蒸馏水中。
6.4 1
mol/L
盐酸(HCl)
移取浓盐酸
90
mL,用蒸馏水稀释到1
000
mL。
7 设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下:
a) 恒温培养箱:36
℃±1
℃;
b) 冰箱:2
℃~5
℃;
c) 天平:感量0.1
g;
d) 均质器;
e) 漩涡混匀器;
f) 无菌移液管:1
mL(具0.01
mL刻度)、10
mL(具0.1
mL刻度)或微量移液器及吸头;
g) 无菌锥形瓶或等效容器:容量500
mL;
h) 无菌试管:18
mm×180
mm;
i) pH计或精密pH试纸。
8 检测程序
肠杆菌科测试片(3M
PetrifilmTM
Enterobacteriaceae
Count)检测程序见图1。
2SN/T5366.1—2022
以正式出版文本为准图1 肠杆菌科测试片(3M
PetrifilmTM
Enterobacteriaceae
Count)检测程序
9 操作步骤
9.1 样品稀释
9.1.1 固体和半固体样品:称取25
g样品放入盛有225
mL
BPW的无菌均质杯中,以8
000
r/min~
10
000
r/min均质1
min~2
min,或放入盛有225
mL
BPW的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打
1
min~2
min,制成1∶10的样品匀液。
9.1.2 液体样品:
以无菌移液管吸取25
mL样品放入盛有225
mL
BPW的无菌锥形瓶(瓶内预置适
当数量的无菌玻璃珠)中,充分混匀,制成1∶10的样品匀液。
9.1.3 样品匀液的pH值应在6.5~7.5之间,必要时用1
mol
/L
NaOH或1
mol/L
HCl调节
pH值。
9.1.4 用1
mL无菌移液管或用1
mL微量移液器吸取1∶10样品匀液1
mL,沿管壁缓缓注入盛有
9
mL
BPW的无菌试管中(注意移液管或吸头尖端不应触及稀释液面),振摇试管,或使用漩涡混匀器,
使其混合均匀,制成1∶100的样品匀液。
9.1.5 按9.1.4
操作程序,依次制成10倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释1次,换用1支1
mL
无菌移液管或微量移液器吸头。从制备样品稀释液到样品接种完毕,全过程不得超过15
min。
9.2 接种
根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计,选择2个~3个适宜连续稀释度进行接种。将
肠杆菌科测试片置于平坦表面,揭开上层膜,用无菌移液管或微量移液器吸取样品匀液1
mL,垂直加在
肠杆菌科测试片的中央,将上层膜盖下,将压板放置在上层膜中央处,轻轻按压,切勿扭转压板,使样品
匀液均匀覆盖于圆形压板面积内,拿起压板,静置1
min。每个稀释度接种两张肠杆菌科测试片。同
时,吸取1
mL空白稀释液加入肠杆菌科测试片,作为空白对照。
3SN/T5366.1—2022
以正式出版文本为准9.3 培养
将肠杆菌科测试片正面向上、水平置于培养箱内,于36
℃±1
℃条件下培养24
h±2
h。测试片最
多可堆叠至20片。
9.4 典型菌落计数
9.4.1 肠杆菌科细菌在测试片上的典型菌落为:1)
红色菌落无黄色晕圈、有气泡;2)
红色菌落有黄色
晕圈、无气泡;3)
红色菌落有黄色晕圈、有气泡。选取菌落数在15
CFU~150
CFU
之间,无蔓延生长的
测试片进行计数,计数以上3种典型菌落。菌落计数以菌落形成单位(colony
forming
units,CFU)
表示。
9.4.2 当细菌浓度很高时,背景颜色变浅,有很多小菌落或很多小气泡。结果记录为“多不可计”或者
TNTC(too
numerous
to
count,TNTC)。
9.4.3 某些种类的微生物会液化凝胶,造成局部扩散或菌落模糊的现象。如果液化现象干扰计数,可
以计数未液化的面积来估算菌落浓度。
9.4.4 当菌落数量过多、计数困难时,可选择几个有代表性的小方格,计算平均菌落数,再乘以20,即
可得到整个测试片估算的菌落数(圆形生长面积为20
cm2)。例如,计数2个小方格的菌落数,求平均,
再乘以20即为1个测试片的计数结果。
10 结果计算
10.1 若只有一个稀释度测试片上的菌落数在适宜计数范围内,计算两个测试片菌落数的平均值,再将
平均值乘以相应稀释倍数,作为每
g(mL)样品中肠杆菌科菌落总数结果。
10.2 若有两个连续稀释度的测试片菌落数在适宜计数范围内时,按式(1)计算:
N=∑C
(n1+0.1n2)d…………………………(
1
)
式中:
N
———样品中菌落数;
∑C———测试片(含适宜范围菌落数的测试片)菌落数之和;
n1———第一稀释度(低稀释倍数)测试片个数;
n2———第二稀释度(高稀释倍数)
测试片个数;
d———稀释因子(第一稀释度)。
10.3 若所有稀释度的测试片上菌落数均大于150
CFU,则对稀释度最高的测试片进行计数,其他测
试片可记录为“多不可计”,结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。
10.4 若所有稀释度的测试片上菌落数均小于
SN-T 5366.1-2022 商品化试剂盒检测方法 肠杆菌科计数 方法一
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