̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э ICS71.100.70 CCSY42 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T1781—2023 代替SN/T 1781—2006 进出口化妆品中咖啡因的测定 Determination of caffeine in cosmetics for import and export 2023-05-05发布 2023-12-01实施 中华人民共和国海关总署发布̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э ̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件代替了SN/T 1781—2006《进出口化妆品中咖啡因的测定 液相色谱法》,与SN/T 1781— 2006相比,除编辑性修改以外,主要技术内容变化如下: ———优化了液相色谱法的前处理方法,增加了样品的净化步骤; ———增加了液相色谱-质谱/质谱法。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本文件起草单位:中华人民共和国广州海关。 本文件主要起草人:吴映璇、董洁、陈思敏、邵琳智、邹游、蓝草。 本文件于2006年首次发布,本次为第一次修订。 ⅠSN/T1781—2023̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э ̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 进出口化妆品中咖啡因的测定 1 范围 本文件规定了进出口化妆品中咖啡因的液相色谱和液相色谱-质谱/质谱测定方法。 本文件第一法适用于液态水基类、膏霜类、乳液类、香波类、固态散粉类、唇膏类等进出口化妆品中 咖啡因的液相色谱法测定;第二法适用于液态水基类、膏霜类、乳液类、香波类、固态散粉类、唇膏类等进 出口化妆品中咖啡因的液相色谱-质谱/质谱法测定和确证。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 第一法 高效液相色谱法(HPLC法) 4 方法提要 试样采用甲醇-水-正己烷超声提取净化后,经高效液相色谱仪测定,外标法定量。 5 试剂和材料 除特殊注明外,所有试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的一级水。 5.1 甲醇,色谱级。 5.2 正己烷,分析纯。 5.3 甲醇-水溶液:量取50 mL 甲醇和 50 mL水置于具塞三角瓶中,摇匀备用。 5.4 咖啡因标准溶液(Coffein):CAS:58-08-2;纯度大于95%。 5.5 咖啡因标准储备液(500 mg/L):准确吸取适量咖啡因标准溶液(5.4),置于10 mL容量瓶中,用甲 醇定容至刻度,混匀。该溶液于0 ℃~4 ℃保存。 5.6 咖啡因标准中间液(10 mg/L):准确吸取适量咖啡因标准溶液(5.5),置于100 mL容量瓶中,用甲 醇定容至刻度,混匀。该溶液于0 ℃~4 ℃保存。 5.7 咖啡因标准工作液:准确移取咖啡因中间液(10 mg/L)(5.6)0.2 mL、0.5 mL、1 mL、2 mL、 5 mL、10 mL至10 mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,即得0.2 mg/L、0.5 mg/L、1.0 mg/L、 1SN/T1781—2023̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 2.0 mg/L、5.0 mg/L、10 mg/L的系列标准工作溶液;于0 ℃~4 ℃保存。 5.8 滤膜:0.2 μm,聚四氟乙烯滤膜。 5.9 比色管:具塞,10 mL。 5.10 离心管:具塞,15 mL,50 mL。 6 仪器和设备 6.1 高效液相色谱仪配紫外或二极管阵列检测器。 6.2 超声波清洗仪。 6.3 漩涡振荡器。 6.4 高速离心机。 7 测定步骤 7.1 试样的处理 7.1.1 液态水基类、膏霜类、乳液类和香波类化妆品 称取试样约0.5 g(精确到0.001 g),置于10 mL具塞比色管中,加入8 mL甲醇(5.1),超声提取 20 min,冷却至室温,用甲醇定容至刻度,混匀。准确吸取1 mL样品提取液至15 mL离心管中,加入 1 mL水,涡旋振荡0.5 min。加入5 mL正己烷(5.2),涡旋振荡0.5 min,3 500 r/min 离心5 min。弃 去上层正己烷,下层清液经滤膜过滤后,供液相色谱仪测定。 7.1.2 固态散粉和唇膏等彩妆类化妆品 称取试样约0.5 g(精确到0.001 g),置于50 mL 离心管中,加入20 mL正己烷,涡旋分散均匀后, 准确加入20 mL甲醇水溶液(5.3),超声提取20 min,3 500 r/min 离心5 min。弃去上层正己烷,下层 清液经滤膜过滤后,供液相色谱仪测定。 7.2 测定 7.2.1 液相色谱测定条件 液相色谱参考条件如下: a) 色谱柱:C18柱,5 μm,4.6 mm(内径)×250 mm,或相当者; b)流动相:甲醇+水,梯度洗脱,见表1; c)流速:1.0 mL/min; d)柱温:40 ℃; e)进样量:10 μL; f)检测波长:275 nm; 2SN/T1781—2023̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 表1 流动相梯度洗脱程序 梯度时间/min 甲醇/% 水/% 0 50 50 2 50 50 3 10 90 5 10 90 5.1 50 50 15 50 50 7.2.2 定量测定 将标准工作溶液(5.7)与试样溶液按色谱条件(7.2.1)进行测定,以标准溶液浓度为横坐标,对应的 峰面积为纵坐标,绘制标准工作曲线,根据峰面积对应标准工作曲线上的溶液浓度定量。试样溶液中待 测物的响应值应在标准工作曲线的线性范围内,超出线性范围则应稀释后再进行分析。必要时,阳性样 品需经液相色谱-质谱/质谱法进行确证试验。咖啡因的标准物质液相色谱图参见附录A.1。 7.2.3 空白试验 除不称取试样外,均按上述步骤进行。 8 结果计算和表述 用色谱数据处理机或按式(1)计算试样中咖啡因的含量,计算结果须扣除空白值: Xi=(c-c0)×V m×1 000 1 000…………………………( 1 ) 式中: Xi———试样中被测组分含量,单位为毫克每千克(mg/kg); c———由标准曲线得到的样液中被测组分的浓度,单位为微克每毫升(μg/mL); c0———由标准曲线得到的空白试验中被测组分的浓度,单位为微克每毫升(μg/mL); V ———样液最终定容体积,单位为毫升(mL); m ———最终样液所代表的试样质量,单位为克(g)。 计算结果保留三位有效数字。 9 定量限 本方法的定量限为10 mg/kg。 10 回收率 化妆品中咖啡因的添加浓度及回收率数据见附录B.1。 3SN/T1781—2023̾ൣयѢྟ஠ఴ˝э 第二法 液相色谱-质谱/质谱法(LC-MS/MS法) 11 方法提要 试样采用甲醇-水-正己烷提取净化后,离心,取清液稀释后供液相色谱-质谱/质谱仪测定,外标法 定量。 12 试剂和材料 除特殊注明外,所有试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的一级水。无特别说明,其他试剂和材 料的要求与5 一致。 12.1 乙腈,色谱级。 12.2 甲酸,色谱级。 12.3 5 mmol/L甲酸溶液:吸取96 μL甲酸(12.2)至 500 mL水中,摇匀备用。 12.4 咖啡因标准使用液(500 μg/L):准确移取咖啡因标准中间液(5.6)2.5 mL至50 mL容量瓶中, 用甲醇稀释至刻度,摇匀。该溶液于0 ℃~4 ℃保存。 12.5 咖啡因标准工作液:分别准确移取咖啡因标准使用液(500 μg/L)(12.4)0.2 mL、0.5 mL、 1.0 mL、2.0 mL和5.0 mL至50 mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,即得2.0 μg/L、5.0 μg/L、 10 μg/L、20 μg/L和50 μg/L的系列标准工作溶液,现配现用。 13 仪器和设备 除检测仪器按照13.1规定外,其他仪器和设备的要求与6一致。 13.1 液相色谱-质谱/质谱仪:三重四级杆串联质谱仪,配电喷雾离子源(ESI)。 14 测定步骤 14.1 试样的处理 14.1.1 液态水基类、膏霜类、乳液类和香波类化妆品 称取试样约0.5 g(精确到0.001 g),置于10 mL具塞比色管中,加入8 mL甲醇(5.1),超声提取 20 min,冷却至室温,用甲醇定容刻度,摇匀。准确吸取1 mL样品提取液至15 mL离心管中,加入 1 mL水,涡旋振荡0.5 min。加入5 mL正己烷(5.2),涡旋振荡0.5 min,3 500 r/min 离心5 min。弃 去上层正己烷,准确吸取1 mL下层清液至10 mL容量瓶中,用甲醇水溶液(5.3)稀释至刻度,摇匀。经 滤膜过滤后,供液相色谱-质谱/质谱仪测定。 14.1.2 固态散粉类和唇膏类等彩妆类化妆品 称取试样约0.5 g(精确到0.001 g),置于50 mL 离心管中,加入20 mL正己烷(5.2),涡旋分散均 匀后,准确加入20 mL甲醇水溶液(5.3),超声提取20 min,3 500 r/min 离心5 min。弃去上层正己烷,