ICS 07.140 CCS C06 SF 中 华 人 民 共 和 国 司 法 行 政 行 业 标 准 SF/T 0172—2024 代替 SF/Z JD0107021 —2018 生物检材中钩吻素子、钩吻素甲和钩吻素 己的液相色谱 -质谱检验方法 Determination of koumine, gelsemine, and gelsenicine in biological samples by liquid chromatography -mass spectrometry 2024 - 12 - 30发布 2025 - 06 - 01实施 中华人民共和国司法部 发布 SF/T 0172 —2024 I 目次 前言 ................................ ................................ ................. II 1 范围 ................................ ................................ ............... 1 2 规范性引用文件 ................................ ................................ ..... 1 3 术语和定义 ................................ ................................ ......... 1 4 原理 ................................ ................................ ............... 1 5 试剂、仪器和设备 ................................ ................................ ... 1 6 定性分析 ................................ ................................ ........... 2 7 定量分析 ................................ ................................ ........... 4 8 分析结果评价 ................................ ................................ ....... 5 附录A（资料性） 钩吻素子、钩吻素甲和钩吻素己的相关资料 ............................... 7 附录B（资料性） 目标物的相关信息及方法线性范围、检出限与定量限 ....................... 8 SF/T 0172 —2024 II 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件代替 SF/Z JD0107021 —2018《生物检材中钩吻素子、钩吻素甲和钩吻素己的液相色谱 -串联 质谱检验方法》，与 SF/Z JD0107021 —2018相比，除结构调整和编辑性改动外，主要技术变化如下： —— 增加了目标物的“ CAS号”（见附录 B）。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由司法鉴定科学研究院提出。 本文件由司法部信息中心归口。 本文件起草单位：司法鉴定科学研究院、 上海市公安局物证鉴定中心、 河北医科大学 。 本文件主要起草人：刘伟、沈敏、向平、严慧、沈保华、王鑫、卓先义、吴何坚、 梁晨、文迪。 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为： —— 2018年首次发布为 SF/Z JD0107021 —2018； —— 本次为第一次修订。 SF/T 0172 —2024 1 生物检材中钩吻素子、钩吻素甲和钩吻素 己的液相色谱 -质谱检验方法 1 范围 本文件描述了生物检材（血液、尿液和组织等）中钩吻素子、钩吻素甲和钩吻素己的液相色谱 -串 联质谱检验方法， 包括原理，试剂、仪器和设备，定性分析 ，定量分析 以及分析结果评价 。 本文件适用于生物检材（血液、尿液和组织等）中钩吻素子、钩吻素甲和钩吻素己的定性分析和定 量分析。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。 4 原理 生物检材在碱性条件下经 乙酸乙酯 液液提取后，采用液相色谱 -串联质谱仪进行检测，经与平行操 作的空白样品和添加样品作对照， 以保留时间 、质谱特征离子 对峰和离子对丰度比进行 定性分析；以定 量离子对峰面积或峰面积比值 为依据， 采用外标法或内标法进行 定量分析。 5 试剂、仪器和 设备 试剂 试验用水应为符合GB/T 6682 规定的一级水。 所用试剂及 要求如下 。 a) 甲醇：色谱纯。 b) 乙酸铵：色谱纯。 c) 甲酸：含量≥ 98%，色谱纯。 d) 氢氧化钠：分析纯 。 e) 乙酸乙酯：分析纯 。 f) 含0.1%甲酸的20 mmol/L 乙酸铵缓冲 溶液：分别取乙酸铵 1.54 g和甲酸1 mL，置于1000 mL 容量瓶中，加水 溶解并定容 至刻度，摇匀备用， pH约为4。 g) 标准物质溶液 ： 1) 标准物质储备溶液：分别精密称取钩吻素子、钩吻素甲和钩吻素己标准物质 10 mg，置于 10 mL容量瓶中，加入适量甲醇溶解并定容至刻度，分别配制成 1.0 mg/mL钩吻素子、钩 吻素甲和钩吻素己标准物质储备溶液。密封，置于冰箱中冷冻保存，有效期 12个月，或 采用市售标准溶液 ； 2) 标准物质工作溶液：试验中所用其他浓度的标准物质工作溶液均由符合 5.1 g）1）的标 准物质储备溶液用甲醇稀释得到。密封，置于冰箱中冷藏保存，有效期 3个月。 h) 内标溶液 ： SF/T 0172 —2024 2 1) 内标储备溶液：精密称取士的宁（或其他合适内标物）标准物质 10 mg置于10 mL容量瓶 中，加入适量甲醇溶解并定容至刻度，配制成 1.0 mg/mL士的宁内标储备溶液。密封，置 于冰箱中冷冻保存，有效期 12个月，或采用市售标准溶液 ； 2) 内标工作溶液： 2 µg/mL的内标工作溶液 由符合5.1 h）1）的内标储备溶液用甲醇稀释 得到。密封，置于冰箱中冷藏保存， 有效期3个月。 仪器和设备 仪器和设备及要求如下。 a) 液相色谱 -串联质谱仪：配有电喷雾离子源 （ESI）。 b) 电子天平：分度值≤0.1 mg。 c) 旋涡混合器。 d) 离心机。 e) 恒温水浴锅。 f) 移液器。 6 定性分析 样品前处理 6.1.1 检材样品 6.1.1.1 体液样品 取血液（或尿液） 0.5 mL，加入内标工作溶液 10 μL，然后加入1%氢氧化钠溶液 50 μL，涡旋混匀， 再加入乙酸乙酯 3 mL，涡旋混匀， 2500 r/min 离心3 min，取上清液于 55 ℃水浴中吹干，残留物用甲 醇∶含0.1%甲酸的20 mmol/L乙酸铵缓冲溶液 （体积比 7∶3）100 μL复溶，供 液相色谱 -串联质谱仪 分 析。 6.1.1.2 组织样品 称取剪碎（或匀浆后）组织 0.5 g，加入内标工作溶液 10 μL，然后加入1%氢氧化钠溶液 800 μL，涡 旋混匀，再加入乙酸乙酯 3 mL，涡旋混合， 2500 r/min 离心3 min，取上清液于 55 ℃水浴中吹干，残留 物用甲醇 ∶含0.1%甲酸的20 mmol/L乙酸铵缓冲溶液 （体积比 7∶3）200 μL复溶，涡旋混匀后转移至 1.5 mL离心管中，置于 -20 ℃冰箱中放置 30 min，12000 r/min 离心3 min，取上清液，供 液相色谱 -串联质 谱仪分析。 6.1.2 空白样品 移取（或称取）空白血 液（或尿液） 0.5 mL（或相似空白组织 0.5 g）作为空白样品，按 6.1.1.1（或 6.1.1.2）的方法，与检材样品平行操作。 6.1.3 添加样品 移取（或称取）空白血液（或尿液） 0.5 mL（或相似空白组织 0.5 g），添加标准物质工作溶液， 配制成1 ng/mL的钩吻素子、钩吻素甲和 0.1 ng/mL钩吻素己的添加样品，然后按 6.1.1.1（或6.1.1.2） 的方法，与检材样品平行操作。 仪器检测 6.2.1 仪器条件 6.2.1.1 液相色谱条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器等实际情况进行调整。 a) 色谱柱： C18柱（150 mm×2.1 mm，5 μm）或其他等效柱 。 b) 流动相： 流动相A为含0.1%甲酸的20 mmol/L 乙酸铵缓