ICS 07.140 CCS C06 SF 中 华 人 民 共 和 国 司 法 行 政 行 业 标 准 SF/T 0136—2023 法医学非人源生物检材种属鉴定技术规范 Technical specification for species identification of forensic non -human biological sample 2023 - 10 - 07发布 2023 - 12 - 01实施 中华人民共和国司法部 发布 SF/T 0136 —2023 I 目次 前言 ................................ ................................ ................. II 1 范围 ................................ ................................ ............... 1 2 规范性引用文件 ................................ ................................ ..... 1 3 术语和定义 ................................ ................................ ......... 1 4 缩略语 ................................ ................................ ............. 1 5 原理 ................................ ................................ ............... 1 6 总体要求 ................................ ................................ ........... 2 7 检验程序 ................................ ................................ ........... 2 8 鉴定意见 ................................ ................................ ........... 4 9 鉴定文书 ................................ ................................ ........... 4 参考文献 ................................ ................................ .............. 5 SF/T 0136 —2023 II 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由 司法鉴定科学研究院 提出。 本文件由 司法部信息中心 归口。 本文件起草单位： 司法鉴定科学研究院、复旦大学、中国科学院昆明动物研究所、中山大学、深圳 海关动植物检验检疫技术中心。 本文件主要起草人： 张素华、李成涛、孔庆鹏、孙宏钰、李玉春、郑晓聪、于力、史秀杰、夏若成。 SF/T 0136 —2023 1 法医学非人源生物检材 种属鉴定技术规范 1 范围 本文件规定了基于 DNA条形码技术对非人源生物检材 （以下简称“检材”） 进行种属鉴定的 总体要 求以及检验程序、鉴定意见和鉴定文书的要求。 本文件适用于实验室采用 DNA条形码技术对检材进行种属鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 SF/T 0069 法医物证鉴定实验室管理规范 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 种属鉴定 species identification 基于形态学、血清学或 DNA分析等方法甄别种属特征、种属特异性成分或种属特异性 DNA序列等，实 现对植物、动物 和微生物进行 分类地位（科、属、种）的认定 。 注： 本文件中专指基于 DNA分析方法对动物和植物进行分类地位（科、属、种）的认定。 参考序列 reference sequence 测序序列对应的物种基因组序列 。 DNA条形码 DNA barcode 生物体一段公认的能够代表该物种的、标准的、有足够变异的、易扩增且相对较短的 DNA片段。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件 。 BOLD：生命条形码数据系统（ The Barcode of Life Data System ） bp：碱基对（ Base Pair） COI：细胞色素氧化酶 I（Cytochrome Oxidase I） DNA：脱氧核糖核酸（ Deoxyribonucleic Acid ） NCBI：美国国立生物技术信息中心（ National Center for Biotechnology Information ） PCR：聚合酶链式反应（ Polymerase Chain Reaction ） QV：质量评分（ Quality Value） rRNA：核糖体RNA（Ribosomal RNA ） Tm：熔解温度（ Melting Temperature ） 5 原理 SF/T 0136 —2023 2 运用DNA条形码技术，根据检材类型选择合适的 DNA条形码引物，扩增 目标区域 并进行双向测序， 再 将测序结果与现有数据库中序列进行比对和分析， 确定检材的分类地位（科、属、种） 。 注： DNA条形码技术指采用测序技术对物种的 DNA条形码进行识别，利用其种间多样性和种内特异性来实现对物种的 快速鉴定的一种方法 。 6 总体要求 鉴定机构 应具有从事法医物证的执业范围，且应满足以 下要求： a) 对所有影响鉴定结 果的人员岗位规定相应的能力要求，包括教育、资质、培训、专业知识和 技 能等,并保留相关记录，制定适宜的培训计划并组织实施； b) 依据第7章～第9章的规定， 对鉴定人以及参与鉴定工作的人员进行监督，以评价其鉴定工 作的符合性和满意程度，监督的结果作为培训需求评价的依据之一； c) 具有能识别样本的标识系统，并确保样本在鉴定过程期间能得到持续的识别； d) 建立样本的运输、接收、处置、保护、存储、保留和 /或清理的规定，能对接收、内部传递、 处置、保留、返还和清理等过程进行记录，确保记录的完整性和可追溯性。 鉴定人应具有法医物证鉴定执业资 格，熟悉并掌握测序技术的原理和操作，并能正确使用相关分 析软件对检测结果进行分析与评价。 鉴定活动应包括检验 （采样、 DNA制备、 目标区域扩增、 PCR产物纯化、 PCR产物测序、 结果分析） 、 鉴定意见出具 和鉴定文书撰写等环节。鉴定活动完毕后，应将各个环节的记录进行归档。 实验室的基本要求以及样本管理、设备管理、质量管理等应符合 SF/T 0069 的规定。 7 检验程序 实验设置 检材提取宜设置 2个重复（样本量允许的情况下） 。 DNA样本的PCR扩增宜设置 2个重复（ DNA样本量允许的情况下） ，PCR过程中应同步设置阴性模板对 照（不加 DNA）和空白检材对照（无菌双蒸水） 。 采样 检材的采集、包装和保存要求如下： a) 动物检材 应包括血液（斑）、唾液（斑）、 表皮拭子、 毛发、软组织、骨骼、牙齿、趾甲 、甲 醛固定动物组织和石蜡包埋动物组织 等；植物检材 应包括叶片、花 和果实等组织或干品。有条 件的情况下， 宜选择新鲜的检材； b) 检材应分别包装，外包装袋上注明检材编号、检材外观及状态、采样地点、采样时间和采样人 等； c) 动物血液、唾液 和软组织等应冷藏或冷冻保存，其余类型检材采集后应干燥保存； d) 植物检材采集后应干燥保存。 DNA制备 检材宜采用商业化动物 /植物DNA提取试剂盒进行 DNA提取。其中，甲醛固定动物组织应先脱醛，石 蜡包埋动物组织应先脱蜡，然后再通过物理和 /或化学的方法，将待检检材处理成粉末或匀浆，悬浮在 生理盐水或磷酸缓冲液中，振荡混匀后采用相应的试剂盒进行 DNA的提取。含有自溶酶的动物组织样本 （如海参），应经过超高压处理灭活自溶酶以后再按照动物组织样本进行后续处理。 检材DNA宜采用荧光定量试剂盒进行定量。具体操作步骤 应按照相应的试剂盒说明书及仪器使用指 南执行。 目标区域扩增 7.4.1 引物 SF/T 0136 —2023 3 宜采用DNA条形码通用引物进行目标区域的扩增 。推荐用于法医学检材种属鉴定 的通用引物信息 见 表1。经通用引物 扩增检测后 无法获取准确的物种信息时，宜采用已发表文献或实验室自行设计并验证 过的其它通用引物或 物种特异性引物。