ICS 07.140 CCS C06 SF 中 华 人 民 共 和 国 司 法 行 政 行 业 标 准 SF/T 0134—2023 法医学生物检材核酸提取技术规范 Technical specification for nucleic acid extraction of forensic biological sample 2023 - 10 - 07发布 2023 - 12 - 01实施 中华人民共和国司法部 发布 SF/T 0134—2023 I 目次 前言 ................................ ................................ ................. II 1 范围 ................................ ................................ ............... 1 2 规范性引用文件 ................................ ................................ ..... 1 3 术语和定义 ................................ ................................ ......... 1 4 缩略语 ................................ ................................ ............. 1 5 总体要求 ................................ ................................ ........... 2 6 常用仪器和设备 ................................ ................................ ..... 2 7 常用试剂推荐配方 ................................ ................................ ... 2 8 DNA提取与纯化 ................................ ................................ ...... 2 9 RNA提取与纯化 ................................ ................................ ...... 8 10 核酸质量评估 ................................ ................................ ..... 12 11 样品保存与记录 ................................ ................................ ... 13 附录A（资料性） 常用试剂推荐配方 ................................ .................... 14 附录B（规范性） RNA提取注意事项 ................................ .................... 15 参考文献 ................................ ................................ ............. 16 SF/T 0134 —2023 II 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由 司法鉴定科学研究院 提出。 本文件由 司法部信息中心 归口。 本文件起草单位： 司法鉴定科学研究院、复旦大学。 本文件主要起草人： 李成涛、张素华、陶瑞旸、陈安琪、林源。 SF/T 0134 —2023 1 法医学生物 检材核酸提取技术规范 1 范围 本文件规定了法医学常见生物检材的核酸提取方法和质量评估方法。 本文件适用于实验室对生物检材进行核酸的提取 、纯化以及质量评估。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和 试验方法 GB/T 27025 检测和校准实验室能力的通用要求 JJG 646 移液器检定规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 核酸 nucleic acid 由核苷酸或脱氧核苷酸通过 3,5-磷酸二酯键连接而成的一类生物大分子 。 注： 包括脱氧核糖核酸（ DNA）和核糖核酸（ RNA）两类，是储存遗传信息和传递遗传信息的主要物质。 核酸完整度 integrity of nucleic acid 核酸（3.1）提取过程中一级结构（序列）保持完整而不发生改变的程度。 核酸纯度 purity of nucleic acid 核酸（3.1）提取物中目标核酸与残留杂质的相对含量。 注： 残留杂质包括来自于检材的蛋白质、多酚、多糖等，来自于提取溶剂的有机物、异硫氰酸盐等，以及 DNA提取时 残留的RNA、RNA提取时残留的 DNA。 提取产量 extraction yield 单位样品中提取到的核酸的总质量 。 注： 用于评估提取效率。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 CTAB：十六烷基三甲基溴化铵（ Cetyltrimethylammonium Bromide ） DNA：脱氧核糖核酸（ Deoxyribonucleic Acid ） DTT：二硫苏糖醇（ Dithiothreitol ） EDTA：乙二胺四乙酸（ Ethylenediaminetetraacetic Acid ） OD：光密度（ Optical Density ） PBS：磷酸缓冲盐溶液（ Phosphate Buffered Saline） PCR：聚合酶链式反应（ Polymerase Chain Reaction ） PVP：聚乙烯基吡咯烷酮（ Polyvinylpyrrolidone ） SF/T 0134 —2023 2 PVPP：交联聚乙烯基吡咯烷酮（ Polyvinylpolypyrrolidone cross -linked） RIN：RNA完整值（ RNA Integrity Number ） RNA：核糖核酸（ Ribonucleic Acid ） RNase：核糖核酸酶（ Ribonuclease ） SDS：十二烷基磺酸钠（ Sodium Dodecyl Sulfonate ） TE：含乙二胺四乙酸的三羟甲基氨基甲烷缓冲液（ Tris-EDTA Buffer Solution ） Tris：三（羟甲基）氨基甲烷（ Tris Hydroxymethylaminomethane ） 5 总体要求 本文件中法医学生物检材包括人源性生物检材及非人源性生物检材，有条件的情况下，宜选择新 鲜的检材。 本文件中核酸提取包括 DNA提取和RNA提取。 核酸提取过程中 宜避免物理因素（如剪切力、高温等）、化学因素（如强酸、强碱等）和生物因 素（如核酸酶等）的破坏，保证一级结构的完整性。 提取过程中宜避免外界环境（如灰尘、气溶胶等） 对核酸提取的污染； 排除其他分子（如蛋白质、多糖、脂类 和有机溶剂等）的污染； 以及防止 试验过程 中废弃物 和废弃液等对环境的污染。在整个试验过程中应采取安全有效的防护措施。 核酸提取宜使用商品化试剂，具体操作流程宜参照商品化试剂的使用说明书。无商品化试剂或相 应的使用说明书时， 应按照第8章和第9章的规定执行。具体操作 应根据样本量、样本状态等调整实验 试剂的用量、离心参数等，并制定相应方法的作业指导书。 核酸提取可采用全自动核酸提取工作站，具体步骤参照工作站的操作说明书进行。 核酸提取 过程中所使用的水 均为符合 GB/T 6682 规定的一级水。除非另有规定，所采用试剂均为 分析纯级别，所有试剂溶液宜大体积配制、小体积分装后使用，酶溶液应避免反复冻融。 实验室的环境和设施应符合 GB/T 27025 的规定。为了有效防止核酸污染，实验室宜根据预处理步 骤设置不同的工作区域，所有实验操作宜在规定的区域进行。 6 常用仪器和设备 常用仪器和设备 宜包括： a) 冷冻研磨机； b) 冷冻离心机； c) 涡旋振荡仪； d) 平板电泳仪； e) 磁力架； f) 水浴锅或干式恒温金属浴； g) 凝胶成像系统（像素 不小于130万）； h) 可调移液器（ 符合JJG 646的规定）； i) 紫外分光光度仪（波长范围： 190 nm～1100 nm；波长准确度与重复性： ±0.1 nm）； j) 精