ICS 07.140 CCS C06 SF 中 华 人 民 共 和 国 司 法 行 政 行 业 标 准 SF/T 0130—2023 同卵双生子个体识别技术规范 Technical specification for individual identification of monozygotic twins 2023 - 10 - 07发布 2023 - 12 - 01实施 中华人民共和国司法部 发布 SF/T 0130 —2023 I 目次 前言 ................................ ................................ ................. II 1 范围 ................................ ................................ ............... 1 2 规范性引用文件 ................................ ................................ ..... 1 3 术语和定义 ................................ ................................ ......... 1 4 缩略语 ................................ ................................ ............. 1 5 总体要求 ................................ ................................ ........... 1 6 检验程序 ................................ ................................ ........... 2 7 结果分析 ................................ ................................ ........... 3 8 鉴定文书 ................................ ................................ ........... 3 参考文献 ................................ ................................ .............. 4 SF/T 0130 —2023 II 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由 司法鉴定科学研究院 提出。 本文件由 司法部信息中心 归口。 本文件起草单位： 司法鉴定科学研究院、复旦大学、河北医科大学、四川大学。 本文件主要起草人： 李成涛、张素华、李淑瑾、丛斌、王正、付丽红、付光平。 SF/T 0130 —2023 1 同卵双生子个体识别技术规范 1 范围 本文件规定了同卵双生子个体识别的总体要求 、检验程序、结果分析和 鉴定文书。 本文件适用于同卵双生子的认定及甄别。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GA/T 1162 法医生物检材的提取 、保存、送检规范 SF/T 0069 法医物证鉴定实验室管理规范 SF/Z JD0105008 —2018 法医物证鉴定线粒体 DNA检验规范 SF/Z JD0105012 —2018 个体识别技术规范 SN/T 2497.21 进出口危险化学品安全试验方法 第21部分：琼脂糖凝胶电泳试验 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 同卵双生子 monozygotic twins 由一个受精卵分裂而发育成的两个个体。 高通量测序 high-throughput sequencing 一种能够一次并行对大量核酸分子进行序列测定的技术 。 注： 通常一次测序反应能产生不少于 100 Mb的数据量。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 DNA：脱氧核糖核酸（ Deoxyribonucleic Acid ） LR：似然率（Likelihood Ratio ） PCR：聚合酶链式反应（ Polymerase Chain Reaction ） STR：短串联重复序列（ Short Tandem Repeats ） 5 总体要求 同卵双生子个体识别 鉴定包括同卵双生子的认定 与同卵双生子的甄别。 鉴定机构 应具有从事法医物证的执业范围，且应满足如下要求： a) 对所有影响鉴定结 果的人员岗位规定相应的能力要求，包括教育、资质、培训、专业知识和 技 能等,并保留相关记录，制定适宜的培训计划并组织实施； b) 依据第6章～第8章的规定， 对鉴定人以及参与鉴定工作的人员进行监督，以评价其鉴定工 作的符合性和满意程度，监督的 结果作为培训需求评价的依据之一； c) 具有能识别样本的标识系统，并确保样本在鉴定过程期间能得到持续的识别； SF/T 0130 —2023 2 d) 建立样本的运输、接收、处置、保护、存储、保留和 /或清理的规定，能对接收、内部传递、 处置、保留、返还和清理等过程进行记录，确保记录的完整性和可追溯性 。 鉴定人应具有法医物证鉴定执业资格，熟悉并掌握 同卵双生子个体识别 的原理和方法，并能正确 评价结果 。 鉴定活动应包括检验 [采样、DNA提取和定量、基于毛细管电泳技术的基因座检验和（或）基于高 通量测序技术的线粒体全基因组测序 ]、结果分析以及鉴定文书撰写 等环节。鉴定活动完毕后，应将各 个环节的记录归档 。 实验室的基本要求 以及样本管理、设备管理 和质量管理等应符合 SF/T 0069 的规定。 6 检验程序 采样 应根据鉴定目的选择合适的 人体生物学样本进行检测， 采样要求如下 ： a) 样本宜为生物学常见检材，如血液（斑）、 唾液（斑）、精液（斑）、带毛囊毛发、组织块 、 骨骼和牙齿等。 进行同卵双生子认定 时，在可能的情况下， 应采集同一种类型的生物检材 ；进 行同卵双生子甄别 时，样本应为同一种类型的生物检材 ，本文件仅适用于血液（斑）或 唾液 （斑）； b) 样本应分别包装， 进行唯一性标识并注明 样本类型、采样日期 和采集人 等。 c) 样本的提取、保存与送检按 照GA/T 1162 执行。 DNA提取和定量 DNA提取和定量要求 如下： a) DNA提取应主要采用物理、化学或生物酶的方法，释放样本中的基因组 DNA，进一步对其进行 纯化，充分去除样本中的蛋白质、脂类等 PCR反应抑制物以及提取过程中加入的试剂。宜采用 与检材状况相适应的方法进行 DNA提取； b) 提取过程中 宜避免物理因素（如剪切力、高温等）、化学因素（如强酸、强碱等）和生物因素 （如核酸酶）的破坏 ，保证一级结构的完整性； c) 提取过程中宜避免外界环境（如灰尘、气溶胶等）对 DNA提取的污染；排除其他分子 （如蛋白 质、多糖、脂类 和有机溶剂等 ）的污染；以及 防止试验过程中废弃物对环境的污染； d) 宜采用合适的定量方法对提取 DNA进行定量，以满足下游实验对 DNA质和量的要求。 基于毛细管电泳技术的基因座检验 6.3.1 基因座与PCR扩增 应选用包含人类多态性常染色体 STR基因座的商业化检测试剂盒， PCR扩增体系与 PCR扩增参数宜按 照试剂盒的操作说明书进行。 每批扩增均应有阳性对照样本（已知浓度和基因型的对照品 DNA或以前检验过的、已知基因型的样 本）以及不含人基因组 DNA的阴性对照样本 。 6.3.2 PCR产物分型与 结果判读 PCR扩增产物的检测和结果判读应符合以下要求： a) 使用遗传分析仪对 PCR产物进行毛细管电泳分析； b) 使用等位基因分型参照物（ Ladder）对样本进行分型； c) PCR扩增产物的检测步骤和方法按照仪器的操作手册进行。 基于高通量测序技术的线粒体全基因组测序 6.4.1 方法 DNA样本的文库构建与 线粒体全基因组检测 均应设置 2个重复（样本量允许的情况下）。 宜采用长片段 PCR方法进行文库构建，文库构建方法宜参照相应的试剂盒说明书 ，文库质控宜按照 SN/T 2497.21 的方法或定量PCR方法进行 。 SF/T 0130 —2023 3 对构建后文库采用高通量测序技术进行线粒体全基因组检测，测序方法宜参照测序仪厂商提供的 标准测序流程。 样本经过高通量测序得到的原始数据，应进行质量控制，去除含接头或低质量的序列，再进行后续 分析。每个 DNA样本可用数据对应的碱基识别质量值应符合 以下要求： a) 大于Q20的碱基比例 大于或等于 90%；