2 0 2 3 1 2 2 2 发 布 － － 2 0 2 4 0 5 0 1 － － 实 施 水 产 养 殖 环 境 （ 水 体 、 底 泥 ） 中 丁 香 酚 的 测 定 气 相 色 谱 - 串 联 质 谱 法 5 0 中 华 人 民 共 和 国 水 产 行 业 标 准 备 案 号 ： X X X X - X X X X Ｉ Ｃ Ｓ 6 5 . 1 5 0 C C S B 9 4 4 7 — 2 0 2 3 D e t e r m i n a t i o n o f e u g e n o l i n w a t e r a n d s e d i m e n t f r o m a q u a c u l t u r e b y g a s c h r o m a t o g r a p h y - t a n d e m m a s s s p e c t r o m e t r y S C ／ Ｔ 中 华 人 民 共 和 国 农 业 农 村 部 发 布SC/T９４４７—２０２３ 前　　言 本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定 起草. 本文件由农业农村部渔业渔政管理局提出. 本文件由全国水产标准化技术委员会渔业资源分技术委员会(SAC/TC１５６/SC１０)归口. 本文件起草单位:中国水产科学研究院南海水产研究所、中国水产科学研究院淡水渔业研究中心、中 国水产科学研究院、广东开放大学. 本文件主要起草人:柯常亮、黄珂、李纯厚、刘奇、王强、肖雅元、赵东豪、宋超、孙志伟、李晋成、金晓石. ⅠSC/T９４４７—２０２３ 水产养殖环境(水体、底泥)中丁香酚的测定　 气相色谱Ｇ串联质谱法 １　范围 本文件描述了气相色谱Ｇ串联质谱法测定水产养殖环境中丁香酚残留量的原理,给出了测定所需的试 剂和材料、仪器和设备,规定了测定与分析步骤、结果计算和检测方法灵敏度、准确度、精密度. 本文件适用于水产养殖环境(水体、底泥)中丁香酚残留量的测定. ２　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件, 仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本 文件. GB/T６６８２　分析实验室用水规格和试验方法 GB１７３７８􀆰５　海洋监测规范　第５部分:沉积物分析 SC/T９１０２􀆰２　渔业生态环境监测规范　第２部分:海洋 SC/T９１０２􀆰３　渔业生态环境监测规范　第３部分:淡水 ３　术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义. ４　原理 试样中残留的丁香酚经正己烷提取,固相萃取柱净化,气相色谱Ｇ串联质谱法测定,内标法定量. ５　试剂和材料 ５􀆰１　试剂 ５􀆰１􀆰１　实验用水为符合GB/T６６８２规定的一级水. ５􀆰１􀆰２　正己烷(C６H１４):色谱纯. ５􀆰１􀆰３　乙酸乙酯(CH３COOCH２CH３):色谱纯. ５􀆰１􀆰４　丙酮(CH３COCH３):色谱纯. ５􀆰１􀆰５　盐酸:ρ(HCl)＝１􀆰１９g/mL,优级纯. ５􀆰１􀆰６　无水硫酸钠(Na２SO４):优级纯,４５０℃烘烤４h,冷却后装入玻璃瓶中密封,于干燥器中保存备用. ５􀆰２　溶液配制 盐酸溶液(１＋５):取５０mL盐酸(５􀆰１􀆰５)慢慢加入２５０mL实验用水(５􀆰１􀆰１)中. ５􀆰３　标准品 ５􀆰３􀆰１　丁香酚(Eugenol,C１０H１２O２,CAS号:９７Ｇ５３Ｇ０),含量≥９９􀆰０％. ５􀆰３􀆰２　氘代丁香酚(EugenolＧD３,C１０H９D３O２,CAS号:１３３５４０１Ｇ１７Ｇ６):含量≥９９􀆰０％. ５􀆰４　标准溶液配制 ５􀆰４􀆰１　标准储备液(１００mg/L):取１０mg丁香酚标准品(５􀆰３􀆰１),精密称定,用乙酸乙酯(５􀆰１􀆰３)溶解并 定容于１００mL棕色容量瓶,配制成浓度为１００mg/L的丁香酚标准储备液,－１８℃以下避光保存,有效 期３个月. ５􀆰４􀆰２　内标储备液(１００mg/L):取１０mg氘代丁香酚标准品(５􀆰３􀆰２),精密称定,用乙酸乙酯(５􀆰１􀆰３)溶 １SC/T９４４７—２０２３ 解并定容于１００mL棕色容量瓶,配制成浓度为１００mg/L的内标储备液,－１８℃以下避光保存,有效期 ３个月. ５􀆰４􀆰３　标准使用液(１􀆰００mg/L):准确量取１mL丁香酚标准储备液(５􀆰４􀆰１)于１００mL棕色容量瓶中, 用乙酸乙酯(５􀆰１􀆰３)定容,混匀,于４℃下避光保存,有效期１个月. ５􀆰４􀆰４　内标使用液(１􀆰００mg/L):准确量取１mL内标储备液(５􀆰４􀆰２)于１００mL棕色容量瓶中,用乙酸 乙酯(５􀆰１􀆰３)定容,混匀,于４℃下避光保存,有效期１个月. ５􀆰５　材料 ５􀆰５􀆰１　铜粉:纯度９９􀆰５％,使用前用盐酸溶液(５􀆰２)去除铜粉表面的氧化物,用实验用水(５􀆰１􀆰１)冲洗除 酸,再用丙酮(５􀆰１􀆰４)清洗,然后用氮吹仪(６􀆰８)吹干待用.临用前处理,保持铜粉表面光亮. ５􀆰５􀆰２　苯基固相萃取柱:５００mg/３mL,或相当者. ５􀆰５􀆰３　氨基固相萃取柱:５００mg/３mL,或相当者. ６　仪器和设备 ６􀆰１　气相色谱三重四极杆串联质谱仪:配电子轰击离子源(EI源). ６􀆰２　分析天平:感量０􀆰００００１g和０􀆰０１g. ６􀆰３　涡旋混合器. ６􀆰４　固相萃取装置,带真空泵. ６􀆰５　低速冷冻离心机:转速≥５０００r/min. ６􀆰６　离心管:５０mL. ６􀆰７　超声波振荡器:频率４０kHz. ６􀆰８　氮吹仪. ６􀆰９　玻璃纤维滤膜:孔径０􀆰４５μm,在４００℃烘烤１h,冷却后储于磨口玻璃瓶中密封保存. ６􀆰１０　分液漏斗:１００mL. ７　样品采集与保存 海水养殖环境样品按照SC/T９１０２􀆰２的相关要求采集和保存,淡水养殖环境样品按照SC/T９１０２􀆰３ 的相关要求采集和保存.水样灌装时避免产生气泡和搅动,使水样充满棕色玻璃瓶,不留顶部空间.底泥 样品剔除砾石和颗粒较大的动植物残骸于洁净磨口棕色玻璃瓶保存.运输过程中应密封、避光、４℃以下 冷藏.底泥样品含水率按照GB１７３７８􀆰５的规定执行. ８　测定步骤 ８􀆰１　提取 ８􀆰１􀆰１　水样处理 水样经玻璃纤维滤膜(６􀆰９)过滤后,量取１００mL水样于分液漏斗中,加入１５０μL内标使用液 (５􀆰４􀆰４),加入１０mL正己烷(５􀆰１􀆰２),充分振荡后,静置分层,取上层清液,重复提取一次,合并提取液,待 净化. ８􀆰１􀆰２　底泥处理 称取已测定过含水率的底泥样品５g(准确到±０􀆰０５g)于离心管中,加入５mL水,涡旋混合２min 后,加入１５０μL内标使用液(５􀆰４􀆰４),混匀,加入５mL正己烷(５􀆰１􀆰２)涡旋混合２min,超声提取１０min, 于离心机中４℃５０００r/min离心５min,取上清液.重复提取一次,合并提取液,于提取液中依次加入 ２g无水硫酸钠(５􀆰１􀆰６)、２g活化铜粉(５􀆰５􀆰１),涡旋混合１min,待净化.如涡旋结束后铜粉变黑,增加铜 粉的量,直至铜粉不变色. ８􀆰２　净化 ２SC/T９４４７—２０２３ ８􀆰２􀆰１　水样净化 取苯基固相萃取柱(５􀆰５􀆰２),用３mL乙酸乙酯(５􀆰１􀆰３)过柱并确保流干,再加３mL正己烷(５􀆰１􀆰２)过 柱,保持柱头浸润.将水样提取液(８􀆰１􀆰１)加入固相萃取柱,待提取液全部流出后,用３mL正己烷 (５􀆰１􀆰２)淋洗,再用３mL乙酸乙酯(５􀆰１􀆰３)洗脱并收集全部洗脱液,洗脱液用乙酸乙酯(５􀆰１􀆰３)定容至３􀆰０ mL,供气相色谱串联质谱仪(６􀆰１)测定. ８􀆰２􀆰２　底泥净化 取氨基固相萃取柱(５􀆰５􀆰３),用３mL乙酸乙酯(５􀆰１􀆰３)过柱并确保流干,再加３mL正己烷(５􀆰１􀆰２)过 柱,保持柱头浸润.将底泥提取液(８􀆰１􀆰２)加入固相萃取柱,待提取液全部流出后,用３mL正己烷 (５􀆰１􀆰２)淋洗,再用３mL乙酸乙酯(５􀆰１􀆰３)洗脱并收集全部洗脱液,洗脱液用乙酸乙酯(５􀆰１􀆰３)定容至３􀆰０ mL,供气相色谱串联质谱仪(６􀆰１)测定. ８􀆰３　标准曲线的制备 分别移取适量丁香酚标准使用液(５􀆰４􀆰３)和丁香酚内标使用液(５􀆰４􀆰４),用乙酸乙酯(５􀆰１􀆰３)稀释,配 制成至少５个浓度点的标准系列,丁香酚的质量浓度为５􀆰００μg/L、１０􀆰０μg/L、５０􀆰０μg/L、１００μg/L、２００ μg/L,添加的内标质量浓度为５０􀆰０μg/L.也可根据仪器灵敏度或线性范围配制能覆盖样品中目标物浓 度的至少５个浓度水平的标准系列. 按照仪器参考条件(８􀆰４􀆰１),从低浓度到高浓度依次进样测定,测得不同浓度梯度目标物及其内标物 的峰面积.以目标物浓度和对应内标物浓度的比值为横坐标,以目标物峰面积与对应内标物峰面积的比 值为纵坐标,绘制标准曲线. ８􀆰４　测定 ８􀆰４􀆰１　气相色谱串联质谱参考条件 ８􀆰４􀆰１􀆰１　气相色谱 气相色谱的参考条件如下: a)　色谱柱:DBＧ１７MS石英色谱柱(３０m×０􀆰２５mm,膜厚０􀆰２５μm),或性能相当者; b)进样量:１μL; c)进样方式:不分流进样; d)载气:氦气,纯度９９􀆰９９９％,流速为１􀆰０mL/min; e)进样口温度:２８０℃; f)升温程序:初始温度为８０℃,保持２min,以２０℃/min升至１８０℃保持１min,以３０℃/min升 至２８０℃保持２min. ８􀆰４􀆰１􀆰２　质谱 串联质谱的参考条件如下: a)　离子源:EI源; b)电子能量:７０eV; c)离子源温度:２３０℃; d)四极杆温度:１５０℃; e)