ICS. 65. 150 B 51 SC 中华人民共和国水产行业标准 SC 2022—2004 真鲷 Red seabream 2004-04-16 发布 2004-06-01实施 中华人民共和国农业部 发布 SC 20222004 前言 本标准的第 5 章、第 7章为强制性的,其余为推荐性的。 本标准的附录 A、附录 B 和附录 C 为规范性附录。 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由全国水产标准化技术委员会海水养殖分技术委员会归口。 本标准起草单位：中国水产科学研究院黄海水产研究所、中国海洋大学。 本标准主要起草人：陈四清、于东祥、马爱军、张岩、孟宪红、雷雾霖、孔晓瑜。 I SC 2022--2004 真鲷 1范围 本标准给出了真鲷(Pagrus major Temminck & Schlegel,1844)的主要形态构造特征、生长与繁殖、 遗传学特征以及检测方法。 本标准适用于真鲷的种质检测和鉴定。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。 GB/T18654.3养殖鱼类种质检验第3部分：性状测定 GB/T18654.12养殖鱼类种质检验第12部分：染色体组型分析 3名称与分类 3.1学名 真鲷( Pagrus major Temminck & Schlegel)。 3.2分类位置 真鲷(Pagrus major T& S)属辐鳍亚纲（Actinopterygii),鲈形目（Percoidei),鲷科（Sparidae）,鲷属 (Pagrus )。 4分布 真鲷分布于我国黄海、渤海、东海、南海及日本、朝鲜和东南亚沿海。真鲷为近海底层暖温性鱼类， 喜结群,有季节性洄游习性,表现为生殖洄游、越冬洄游和索饵洄游特征。真鲷主要以底栖甲壳类、软体 动物、棘皮动物、小鱼等为食。真鲷10龄以下生长较快,最大体长可达100cm,体重9720g，主要生产 国为日本、中国、韩国,是名贵的食用经济鱼类之一。 5 形态构造特征 5.1外形 真鲷体呈长椭圆形,侧扁而高。头大,前端稍尖,吻短。眼中等大，眼间隔宽而隆起。后鼻孔椭圆 形。口小，前位。背鳍连续，鳍基强大，可伏于基部沟中。腹鳍小，胸位。胸鳍尖长,腹鳍具腋鳞，尾鳍又 形,侧线完全。鱼体色鲜艳,淡红色,有稀疏的蓝绿色斑点。尾鳍有淡黑色边缘。真鲷外形见图1。 图1真鲷外形 1 SC 2022—2004 5.2 可数性状 5.2.1背鳍鳍式 D.X~ X I-9~11。 5.2.2臀鳍鳍式 A.Ⅲ-8~9。 5.2.3胸鳍鳍式 P.15。 5.2.4腹鳍鳍式 V.I~5. 5.2.5尾鳍鳍式 C.17。 5.2.6侧线鳞鳞式 8~9 5.3 可量性状 可量性状比见表1。 表 1实测可量性状比例值 体长/体高 体长/头长 头长/吻长 头长/眼径 2.1~2.8 3.1~4.0 2.3~3.0 3.4~5.0 头长/上颌长 头长/眼间距 体长/尾柄长 尾柄长/尾柄高 2.2~2.7 4.4~4.8 1.8~2.2 2.8~3.3 5.4内部结构特征 5.4.1鳃耙 7个～8个+9个～10个。 5.4.2齿 上颌前端有大型犬齿2对,每侧有牙齿4列,外2列为白齿,内2列为细小颗粒状齿，下颌前端具犬 齿3对,中间2对较小,外侧1对较大,两侧为2列颗粒状齿,大小与上颌相似。 5.4.3脊椎骨 脊椎骨数 21 个～23 个。 6 生长与繁殖 6.1 生长 6.1.1年龄与体长、体重 年龄与体长、体重增长的关系见表2。 表 2 真鲷体长、体重增长 年龄,龄 2 3 4 5 6 8 1 体长,cm 15~17 27~ 30 35~37 46~ 48 55 ~ 57 61~63 67~ 69 71 ~ 73 体重,g 70 ~100 390 ~590 830 ~ 1 200 1 900 ~ 2 400 3 200 ~ 3 800 4 500 ~ 5 000 5 900~6 600 7 100 ~ 7 800 2 SC 2022—2004 6.1.2体长体重关系 体长与体重关系式如式(1)所示。 W =0.0199 × L2.814 (1) 式中: W——鱼体总重,单位为克(g); L ——鱼体全长,单位为厘米(cm)。 6.2繁殖特征 6.2.1生物学最小型 生物学最小型雌鱼体长为320mm,体重为650g;生物学最小型雄鱼体长为240mm,体重为350g。 6.2.2生殖季节 北方海区（黄、渤海)的生殖期为5月至7月，盛期在5月下旬至6月初。福建沿海(东海)真鲷生殖 期有2个群体，闽南沿海的生殖期在10月至12月下旬，盛期在11月份；闽中、闽东沿海的生殖期在3 月至4月。广东沿海(南海)为12月初至2月底，1月和2月各有1个产卵高峰。 6.2.3性成熟年龄 养殖鱼性成熟年龄2龄～3龄,野生鱼性成熟年龄为4龄。 6.2.4产卵特点 真鲷属于分批成熟多次产卵型鱼类,真鲷产卵水深一般在10m～40m,每年春夏之交,游往近岸产 卵。性腺发育特点是：分批成熟,多次产卵。怀卵量随体长、年龄的增长而增多，一般为20×104粒～ 110×104粒，高者可达300×104粒。 6.2.5卵子特征 卵子呈浮性透明、球形,卵径为0.9mm～1.07mm,具一油球。每克卵1800粒左右。 7 细胞遗传学特性 7.1染色体数 体细胞染色体数：2n=48。 7.2 核型 核型方式：2n=2st+46t,染色体总臂数NF=50。染色体核型见图2。 图2真鲷染色体核型 8生化遗传学特征 8.1同工酶的谱型 乳酸脱氢酶(LDH)、异柠檬酸脱氢酶(IDH)同工酶电泳图谱见图 3。 多态位点比例（P）为45%。 平均杂合度观察值(Ho）为0.141±0.044。 3 SC 2022—2004 真鲷肌肉LDH图 真鲷肌肉IDH图 图3真鲷LDH、IDH电泳图谱 8.2分子遗传学特征 渤海湾野生群体的真鲷肌肉组织DNA的RAPD图谱见图4。 注：引物为CCCGCTACAC(5'－3') 图4真鲷肌肉组织RAPD谱带 多态位点比例(P)为62.60%。 平均杂合度期望值(He)为0.4786。 9检测方法 9.1性状测定 按GB/T18654.3的规定执行。 9.2染色体和核型检测 按GB/T18654.12的规定执行。 9.3同工酶分析 9.3.1样品制备 样本活体低温保存带回实验室。活体解取肌肉，密封放入超低温冰箱（-76℃)或液氮罐中贮存。 将部分组织(约0.5g)取出放入玻璃匀浆器中,加人1:1(V/W)的0.1mol/L磷酸缓冲液(pH7.0),冰 水浴中匀浆后，倒入1.5mL离心管内，4℃冰箱中抽提0.5h～1h,然后在0℃4℃冷冻离心机中 4 SC 2022—2004 14000r/min离心20min，离心后的上清液作为电泳样品。 9.3.2电泳分析 采用水平淀粉凝胶电泳方法,凝胶浓度为12%,电泳缓冲系统为 TC,pH为7.0,恒流(电流大小为 12 mA)电泳 12 h,TC制胶缓冲液见附录 A。电泳过程在 4℃冰箱中进行,TC 电极缓冲液见附录 B。凝 胶厚度为6mm,电泳后切成4片～5片,分别进行各种酶的染色,染色过程在37℃恒温箱中进行,同工 酶染色液的配制见附录C。 9.3.3数据处理 多态位点比例(P）=（多态位点数/所测位点总数）×100%。 平均杂合度观察值(H)=多态位点杂合度观察值之和/观察位点总和。 9.4RAPD分析 9.4.1样品制备 基因组 DNA的制备：于真鲷尾部取肌肉 100 mg,置于研钵中充分研磨,加入500μL抽提缓冲液 (100 mmol/mL Tris-HCl,pH8.0;0.1 mol/L 乙二胺四乙酸,pH8.0),再加人终浓度分别为 0.5%的 SDS 适量双蒸水溶解，65℃灭活10min后，-4℃保存备用。 9.4.2RAPD 反应 反应体系包括 50 mmol/L KCl,10 mmol/mL Tris-HCl(pH 8.0),0.1% 的 Triton X-100;2.0 mmol/L MgCl2 ;0.1 mmol/L dNTP;0.2 μ mol/L引物,20 ng 基因组 DNA,0.6 UTag DNA 聚合酶,总反应体积为 min,72℃ 2 min),最后 72℃充分延伸 10 min。RAPD 反应结束后 4℃保存。RAPD产物用1.5%琼脂糖 凝胶电泳分离,EB染色紫外灯下观察、拍照。 9.4.3数据处理 多态位点比例：（P)=（多态性扩增片段数/扩增片段总数)×100%。 群体的平均杂合度如式(2)所示。 He = x2) /n (2) 式中: He—群体的平均杂合度； X;——第i个等位基因出现的频率; n 基因点个数,单位为个。 9.5综合判断 检测结果不符合第5章、第7章中任何一章要求的,则判定为不合格项;有不合格项的样品为不合 格样品。合格样品数与样品总数的比为合格率。 5