2 0 2 5 0 1 0 9 发 布 － － 2 0 2 5 0 5 0 1 － － 实 施 农 药 透 皮 吸 收 试 验 方 法 0 9 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 备 案 号 ： X X X X - X X X X Ｉ Ｃ Ｓ 6 5 . 0 2 0 . 0 1 C C S B 4 5 9 7 — 2 0 2 5 T e s t m e t h o d s f o r p e s t i c i d e d e r m a l a b s o r p t i o n Ｎ Ｙ ／ Ｔ 中 华 人 民 共 和 国 农 业 农 村 部 发 布NY/T４５９７—２０２５ 前　　言 本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规 定起草. 请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任. 本文件由农业农村部种植业管理司提出并归口. 本文件起草单位:农业农村部农药检定所. 本文件主要起草人:于雪骊、张丽英、刘然、陶岭梅、陶传江. ⅠNY/T４５９７—２０２５ 农药透皮吸收试验方法 １　范围 本文件确立了农药透皮吸收体外及体内试验的基本原则和方法. 本文件适用于为农药登记而进行的健康风险评估高级阶段试验———农药透皮吸收试验. ２　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本 文件. GB１４９２５　实验动物　环境及设施 ３　术语和定义 下列术语和定义适用于本文件. ３􀆰１ 透皮吸收　dermalabsorption 化学物质透过皮肤进入循环系统,最终导致系统暴露于化学物质及其代谢物的过程,也称为经皮 吸收. ３􀆰２ 被试物　testsubstances 被测试的单一化学物质或混合物. ３􀆰３ 吸收量(体外试验)　absorbeddose(invitro) 在特定时间内,被试物透过皮肤进入接收液或循环系统的量. ３􀆰４ 吸收量(体内试验)　absorbeddose(invivo) 在特定时间内,被试物透过皮肤后分布于动物血液、组织(如果收集)、呼出气(如果检测)、尿液、粪便、 去除染毒部位皮肤后剩下的尸体以及笼具清洗液中的量. ３􀆰５ 可吸收量(体外和体内试验)　absorbabledose(invitroandinvivo) 暴露结束清洗皮肤后皮肤表面或皮肤中的被试物的量. ３􀆰６ 未吸收量(体外和体内试验)　unabsorbeddose(invitroandinvivo) 暴露结束后,从皮肤表面清洗下的被试物的量,附着在开放性覆盖物上的被试物的量,以及在暴露过 程中从皮肤表面挥发的量. ３􀆰７ 透皮吸收率　percentageabsorption 被试物吸收量与可吸收量的和占被试物用于试验的量的百分率. ３􀆰８ 染毒剂量　applieddose 染毒于单位面积皮肤上的被试物的量. １NY/T４５９７—２０２５ ３􀆰９ 暴露时间　exposureperiod 从被试物染毒于皮肤至从皮肤上被清洗去除的时间. ３􀆰１０ 有限剂量　finitedose 皮肤染毒过程中,在一定时间内,被试物达到皮肤最大吸收率但不维持不变的剂量. ３􀆰１１ 全厚皮肤　fullＧthicknessskin 包括角质层,有活性的表皮和真皮,厚度５００μm~１０００μm. ３􀆰１２ 刃厚皮肤　splitＧthicknessskin 用植皮刀去除下层真皮,获得均一形状和厚度的皮肤,厚度２００~４００μm. ３􀆰１３ 贴条法　tapestripping 贴条法是透皮吸收体外或体内试验结束后进行的操作,将胶带粘贴到暴露于被试物的皮肤表面并适 当按压,然后撕下胶带,角质层与胶带一起从表皮分离,此过程重复进行,直到胶带与皮肤表面不再黏着. 分析胶带所剥离下的角质层中被试物的量. ４　试验目的 通过体外或体内透皮吸收试验检测农药经皮肤吸收的量,进而获得透皮吸收率,为农药健康风险评估 提供分析评估数据. ５　试验概述 ５􀆰１　透皮吸收体外试验 被试物(可以放射性标记)染毒于位于扩散池两个室之间的皮肤表面,在特定条件下作用一定时间后清 洗掉被试物.在试验期间对接收液定时取样并测定其中被试物和代谢物(当使用代谢活化系统时)的量. 通过对接收液和供试皮肤的分析测定,获得在给定时间内,皮肤对被试物的吸收.分析从皮肤上洗下 和残留在皮肤中的被试物,获得被试物的分布情况及回收率等更多试验信息. ５􀆰２　透皮吸收体内试验 被试物(可以用放射性标记)按符合实际使用情况配制,染毒于动物去毛后的皮肤. 被试物配制剂与皮肤接触一定时间(符合人体暴露时间),并覆盖合适的材料以防被动物舔舐.暴露 结束后取下覆盖物,清洗动物皮肤并换上新的覆盖物,取下的覆盖物和清洗液保存待测. 试验前、试验期间和试验结束后,动物需单独饲养于代谢笼中,收集其排泄物和呼出气待测.如果有 充足证据表明极少产生或不产生挥发性代谢产物,则可以不收集动物呼出气. 每个试验通常包括多个试验组,其中一个试验组动物在染毒结束后立即处死,其他试验组动物在计划 的时间间隔处死.采样结束后处死存活动物,采集血液及染毒部位皮肤进行分析,并分析动物尸体内未被 排泄的被试物和代谢物.最后对全部采集的样品进行分析测定,并评价透皮吸收率. ６　试验方法 ６􀆰１　透皮吸收体外试验 ６􀆰１􀆰１　被试物 被试物可以放射性标记. 被试物的制备应与人体可能接触该被试物的状态一致,任何偏离使用情况的制备应合理解释.必要 时将被试物溶解或均匀分散于溶媒中.除水之外的溶媒需明确其皮肤吸收特征以及与被试物的相互作 ２NY/T４５９７—２０２５ 用.固体被试物,如粉剂,应用水湿润,制成糊状.颗粒状被试物在试验前应先磨碎.通常将被试物配制 成系列浓度,其浓度范围应覆盖人体实际接触的可能暴露范围. 被试物配制过程中需确保其稳定性和均一性,对于固体和半固体试验配制剂和混悬液,需验证其中被 试物的均一性. ６􀆰１􀆰２　试验体系 ６􀆰１􀆰２􀆰１　扩散池 扩散池有多种类型,静态和流动态的扩散池均可使用.扩散池由供给室和接收室组成,供试皮肤放置 在两个室之间.扩散池需满足以下条件: a)　由惰性材料制成,减少与被试物的相互作用; b)可在皮肤周围提供很好的密封效果、易于采样和混匀与皮肤底面接触的接收液、可控制供试皮肤 和接收液的温度; c)供给室的设计应满足允许封闭和容易去除试验配制剂. ６􀆰１􀆰２􀆰２　接收液 透皮吸收体外试验所选择的接收液应对被试物有足够的溶解度,且不能影响皮肤的完整性,对于未经 放射性同位素标记的被试物,接收液应避免干扰样品分析. 可使用的接收液: a)　对于无代谢活性的皮肤,水溶性被试物的接收液通常是盐溶液;脂溶性被试物的接收液可含有机 溶剂; b)对于有代谢活性的皮肤,选择生理性接收液. 接收液的体积及流速: a)　静态试验系统中,接收液的体积(通常为２mL~２０mL)不可限制被试物的透皮吸收.需持续搅 拌接收液并定期取样. b)流动态试验系统中,液体的流速不可阻碍被试物向接收液中扩散,接收室中皮肤下方接收液的体 积通常为０􀆰１mL~５mL,并不断补充接收液. c)当未经放射性标记的被试物在接收液中的浓度过低时应减慢流速. ６􀆰１􀆰２􀆰３　供试皮肤 a)　人体皮肤或与人体皮肤透皮吸收率相近的动物皮肤均可使用,其中大鼠和猪的皮肤较常用,其他 皮肤也可使用,但需证明适用性. b)人皮肤通常选择腹部或胸部皮肤;猪皮肤通常选择侧身和耳朵部位皮肤,其次是背部和四肢部位 皮肤;大鼠皮肤通常选背部或腹部皮肤,当需要与体内试验相匹配时,选择背部皮肤. c)优先选择有活性的离体皮肤,其次是一次冻存皮肤,不具活性的皮肤需证明完整性,重组人体皮 肤模型需验证其透皮吸收效果与天然皮肤的一致性. d)可使用通过酶、加热或化学方法分离得到的表皮,或用植皮刀去除下层真皮得到的刃厚皮肤(厚 度２００μm~４００μm).当使用全厚皮肤时,其厚度不应超过１mm. ６􀆰１􀆰３　皮肤染毒 根据人体可能接触被试物的情况,一般选择有限剂量染毒.染毒剂量应模仿人体暴露量,通常固体样 品上限１０mg/cm２,液体样品上限为１０μL/cm２.可根据预期使用情况、试验目的以及被试物的理化性质 确定染毒剂量.每个剂量至少４个重复. 试验过程中扩散池和皮肤需保持接近正常活体皮肤的温度[(３２±１)℃],湿度保持在３０％~７０％. ６􀆰１􀆰４　暴露时间和采样频率 被试物对皮肤的染毒暴露时间可以是完整的试验周期,也可以较短(如模拟人体的特定暴露场景). 对于有限剂量染毒的体外透皮吸收试验,暴露时间应反映被试物的实际使用情况.采样周期通常需要 ２４h,对于穿透速度慢的被试物需适当延长,但超过２４h可能影响皮肤的完整性. 接收液的采样频率应满足能够以作图形式表现被试物的透皮吸收情况.２４h的试验周期通常需要６ ３NY/T４５９７—２０２５ 个~１２个采样点,实际采样频率需基于试验前信息(如被试物理化性质等).静态试验系统中,更换新鲜 接收液后,需对接收液体积改变进行校正. ６􀆰１􀆰５　染毒及试验结束处理 染毒结束后,移除供给室中剩余的被试物待测,洗掉皮肤上多余的被试物,收集清洗液待测. 试验结束后,收集试验系统中的所有组成部分待测,可选择采用贴条法,分离皮肤角质层. ６􀆰２　透皮吸收体内试验 ６􀆰２􀆰１　被试物 同６􀆰１􀆰１. ６􀆰２􀆰２　实验动物 通常